20xx人教版高中生物選修一5-3《血紅蛋白的提取和分離》ppt同步課件(文件)
【正文】 滌次數(shù)少，未能除去血漿蛋白離心速度過高或時間過長 凝膠色譜 柱的裝填 ① 放一支與凝膠柱垂直的日光燈 → 直接檢查凝膠是否裝填得均勻 ② 加入大分子有色物質(zhì)如藍(lán)色葡聚糖－ 2 000 或紅色葡聚糖，若色帶均勻、狹窄、平整 → 裝填成功 血紅蛋白 的分離 ① 血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻、狹窄、平整，隨洗脫液緩慢流出 → 分離成功 ② 血紅蛋白的紅色區(qū)帶歪曲、散亂、變寬 → 分離效果不好，可能與凝膠色譜柱的裝填有關(guān) 特別提醒 SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量，是根據(jù)大多數(shù)蛋白質(zhì)都能與陰離子表面活性劑十二烷基硫酸鈉(SDS)按重量比結(jié)合成復(fù)合物，使蛋白質(zhì)分子所帶的負(fù)電荷遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過天然蛋白質(zhì)分子的負(fù)電荷，消除了不同蛋白質(zhì)分子的電荷效應(yīng)，使蛋白質(zhì)分子相對遷移率的大小完全取決于相對分子質(zhì)量的高低，因此可從已知相對分子質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的對數(shù)和相對遷移率所作的標(biāo)準(zhǔn)曲線中求出供試品的相對分子質(zhì)量。 血紅蛋白提取和分離的基本原理 思維導(dǎo)圖： 深度剖析 本題考查凝膠色譜法原理 。 血紅蛋白提取和分離的實(shí)驗操作 A． 首先用圖甲裝置對濾液進(jìn)行處理 ， 其目的是去除相對分子質(zhì)量較小的雜質(zhì) B． 圖乙裝置的試管中收集到的液體中最先出現(xiàn)的是相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì) C． 用圖乙裝置分離血紅蛋白時 ， 待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時 ， 用試管收集流出液 ， 每管收集 5 mL， 連續(xù)收集 D． 圖丙裝置中電泳法分離提純血紅蛋白的原理是血紅蛋白帶有一定量的電荷 ， 在電場的作用下向一極移動 思維導(dǎo)圖： 深度剖析 用圖甲裝置對濾液進(jìn)行處理 ， 其目的是去除相對分子質(zhì)量較小的雜質(zhì) 。相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)不能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，只能分布在顆粒之間，通過的路程較短，移動速度較快；相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)的通道，通過的路程較長，移動速度較慢。 該方法的原理的核心是利用了不同體積 (大小 )的蛋白質(zhì)在凝膠中的遷移速度不同以達(dá)到分離的目的 。因此，樣品中相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)先流出，相對分子質(zhì)量中等的分子后流出，相對分子質(zhì)量最小的分子最后流出，這種現(xiàn)象又叫分子篩現(xiàn)象。 緩沖溶液的作用是維持反應(yīng)體系的 pH不變 。 此方法的核心是利用電場力使帶電性質(zhì)不同或體積不同的蛋白質(zhì)分離 。 4． 解析 從生物材料中分離生物大分子的方法較為復(fù)雜 ，因為生物材料中含有的成分非常復(fù)雜 ， 需要逐一除去 。這使血紅蛋白的分離過程非常直觀，大大簡化了實(shí)驗操作。 首先通過洗滌紅細(xì)胞 、 血紅蛋白的釋放 、 離心等操作收集到血紅蛋白溶液 ， 即樣品的處理；再經(jīng)過透析去除相對分子質(zhì)量較小的雜質(zhì) ， 即樣品的粗分離；然后通過凝膠色譜法將相對分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白除去 ， 即樣品的純化；最后經(jīng) SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定 。許多重要的生物大分子 ， 如氨基酸 、 多肽 、 蛋白質(zhì) 、 核苷酸 、 核酸等都具有可解離基團(tuán) ， 它們在某個特定的 pH下會帶上正電或負(fù)電；在電場的作用下 ， 這些帶電分子會向著與其所帶電荷相反的電極方向移動 。 為了在實(shí)驗室條件下準(zhǔn)確地模擬生物體內(nèi)的環(huán)境 ， 就必須保持體外生物化學(xué)反應(yīng)過程有與體內(nèi)反應(yīng)過程完全相同的 pH。 2． 答案 在 一定范圍內(nèi) ， 能對抗外來少量強(qiáng)酸 、 強(qiáng)堿或稍加稀釋不引起溶液 pH發(fā)生明顯變化的作用叫做緩沖作用 ， 具有緩沖作用的溶液叫做緩沖溶液 。所用的凝膠實(shí)際上是一些微小的多孔球體，這些小球體大多數(shù)是由多糖類化合物構(gòu)成，小球體內(nèi)部有許多貫穿的通道，當(dāng)一個含有各種分子的樣品溶液緩慢流經(jīng)時，各分子在色譜柱內(nèi)進(jìn)行兩種不同的運(yùn)動，即垂直向下的運(yùn)動和無規(guī)則的擴(kuò)
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