【正文】 述要求選擇相應微生物進行試驗；對枯草桿菌黑色變種芽孢殺滅達到消毒要求（殺滅對數(shù)值≥ ）的消毒劑，在不低于此濃度用作消毒時可不作病毒、真菌和分枝桿菌殺滅試驗。黏膜消毒劑的模擬現(xiàn)場試驗或現(xiàn)場試驗可用皮膚代替。對器械、耐壓或電氣性能及關鍵部件的使用壽命等的鑒定，由相關行業(yè)計量認證考核合格的檢驗機構按其標準進行檢測，提供檢驗報告?；瘜W因子則由消毒器械產(chǎn)生具有殺菌作用的化學物質(zhì) ， 常見有次氯酸鈉、臭氧、二氧化氯等，可測定所產(chǎn)生消毒液中有效成分的濃度。用于滅菌的器械應做定性殺滅試驗?？諝庀緞┬栌眠M — 19— 行模擬現(xiàn)場和現(xiàn)揚試驗。必要的器材和試劑應重新制備或滅菌，以防產(chǎn)生系統(tǒng)性誤差。如有不同于通常規(guī)律的結果，應重新考慮實驗設計。為使記錄規(guī)范化， 須用表格方式記錄，表格中應包括樣品名稱與編號、檢驗日期、檢測項目、檢測依據(jù)、試驗條件、使用儀器編號、觀察結果、試驗者和校核者簽名等欄目。 檢測報告的要求 檢測報 告是試驗情況和結果的書面表達，具有長期保存和法律價值，因此必須逐項填寫 清楚。 檢驗報告的結果部分，用表格將各試驗組、陽性對照、陰性對照及其他對照組的數(shù) 據(jù)列出（定性的對照可用文字加以說明）。 此外，對試驗中出現(xiàn)某些異?，F(xiàn)象亦應加以說明。實用劑量應符合下列要求： （ 1）申請檢驗單位應根據(jù)消毒產(chǎn)品的研制結果 ， 針對不同用途 ，提出殺滅微生物有效、安全的實用劑量 。消毒劑有 效成分必須符合我國允許的消毒劑組分。若所測消毒劑濃度過高 ， 可適當減少取樣量或經(jīng)稀釋后測定，以減少測定結果的誤差；若消毒劑濃度過低，可增加取樣量或采用靈敏度更高的方法進行測定。配制滴定液試劑 (如硫代硫酸鈉 )因配制后尚需專門處理，亦可用化學純。10 23 時即為 1 mol。所有試驗結果 (包括消毒劑有效成分測定及滴定液標定 )應當以空白試驗校正。所用容量瓶和量筒等不能加熱。 粉劑和片劑的取樣量為測定所需量的 10 倍，經(jīng)研磨后精確稱取適量樣品進行測定。 消毒產(chǎn)品毒理學實驗基本要求 為了確保消毒劑的安全性，消毒劑除在配方組分或雜質(zhì)（污染物）含量方面必須達到國家有關部門頒發(fā)的相關技術 法規(guī)或強制性標準對它們的禁用或限用的要求外，消毒劑還需進行相應的安全性毒理學評價。原則上需進行上述 4 個階段的毒理學試驗。首先必須 做急性經(jīng)口毒性試驗、亞急性毒性試驗和兩項致突變試驗 (包括反映基因水平和染色體水平兩 種類型試驗 )。根據(jù)試驗結果，判定是否需繼續(xù)做其它試驗。如果偶爾使用或間隔數(shù)日使用的消毒劑，采用一次完整皮膚刺 激試驗；如果每日使用或連續(xù)數(shù)日使用的消毒劑，采用多次完整皮膚刺激試驗。 (6) 黏膜消毒劑：除按第一類、第二類或第三類消毒劑的要求進行毒理學試驗外 ， 還必須做急性眼刺激試驗和陰道黏膜刺激試驗。 （ 3）進行安全性毒理學評價用受試物 根據(jù)不同毒理學試驗的目的 ， 采用相應的受試物。 2）在皮膚刺激試驗、急性眼刺激試驗和陰道黏膜刺激試驗中所用受試物的濃度，通常是對皮膚、黏膜消毒時應用濃度的 5倍。 （ 1）滅菌：可殺滅一切微生物（包括細菌芽孢）達到滅菌保證水平的方法。屬于此類的方法有：熱力、電力輻射、微波和紫外線等以及用含氯、二氧化氯、過氧乙酸、過氧化氫、含溴消毒劑、臭氧、二溴海因等甲基乙內(nèi)酰脲類化合物和一些復配的消毒劑等消毒因子進行消毒的方法。 醫(yī)用物品對人體的危險性分類 醫(yī)用物品對人體的危險性是指物品污染后造成危害的程度。 （ 3）低度危險性物品：雖有微生物污染，但在一般情況下無害，只有當受到一定量的病原微生物污染時才造成危害的物品。 （ 2）細菌繁殖體。 （ 6）細菌芽孢，例如炭疽桿菌芽孢、枯草桿菌芽孢等。 1）高度危險性物品，必須選用滅菌方法處理。例如 ，在有病原微生物污染時，必須針對所污染病原微生物的種類選用有效的消毒方法。 4） 對存在較多有機物的物品消毒時，應加大消毒藥劑的使用劑量 和/或延長消毒作用時間。 2）不耐熱、不耐濕，以及貴重物品，可選擇環(huán)氧乙烷或低溫蒸汽甲醛氣體消毒、滅菌。普通病人用過的物品，可先清洗后消毒。 (3) 氣體化學消毒劑：應防止有毒有害消毒氣體的泄漏，經(jīng)常檢 — 26— 測消毒環(huán)境中該類氣體的濃度，確保在國家規(guī)定的安全范圍之內(nèi)；對環(huán)氧乙烷氣體消毒劑，還應嚴防發(fā)生燃燒和爆炸事故。 （ 2）對乙類傳染病中的病毒性肝炎、細菌性痢疾、傷寒和副傷寒、脊髓灰質(zhì)炎、白喉、布魯菌病、炭疽、鉤端螺旋體病、流行性出血熱、淋病、梅毒等和丙類傳染病中肺結核，必須按照當?shù)丶膊☆A防控制和監(jiān)督機構提出的衛(wèi)生要求，由病人陪護人或所在單位進行消毒處理或由當?shù)丶膊】刂茩C構組織 進行消毒處理。 （ 6）非專業(yè)消毒人員開展疫源地消毒前應接受培訓。 (2)防護用品：工作服、隔離服、防護眼鏡、口罩、防鼠疫口罩、帽子、手套、長筒膠靴、毛巾、污物袋、手電筒、皮卷尺、雨衣、長柄毛刷、裝工作衣的布袋（ 30cm179。常用消毒劑有過氧乙酸、含氯消毒劑、碘伏等。盡 量避免破壞消毒對象的使用價值和造成環(huán)境的污染。加強易感人群的保護?！傲尽笔侵福孩傧痉置诨蚺判刮铮ㄈ绾粑纻魅静≈饕獮榭诒欠置谖铮c道傳染病主要為糞便，接觸性傳染病主要為膿液、痂皮等）；②消毒生活用具；③消毒雙手；④消毒衣服、被單；⑤消毒患者居室；⑥消毒生活污水、污物。 3)對脫掉外衣應放在自帶的布袋中（不要放在污染或可能受到污染的地方）。根據(jù)消毒對象及其污染情況，選擇適宜的消毒方法。 8)消毒前應關閉門窗，將水缸蓋好，將未被污染的貴重衣物、飲食類物品、名貴字畫及陳 列物品收藏好。 12)病人用過的餐（飲）具、污染的衣物若不能集中在消毒站消毒時，可在疫點進行煮沸、浸泡或擦拭消毒。 13)室內(nèi)消毒后，必要時對廁所、垃圾、下水道口、自來水龍頭、缸水和井水等進行消毒。所用消毒工具表面用消毒劑進行擦洗消毒。 (4)消毒人員注意事項 1）出發(fā)前，要檢查應攜 帶的消毒工具是否齊全無故障，消毒劑是否足夠。 3）消毒過程中，不得吸煙、飲食。凡應消毒的物品，不得遺漏。 8)填好的消毒記錄應及時上報。 菌懸液與菌片的制備 適用范圍 制備消毒 劑殺菌試驗用細菌懸液與菌片，以供消毒劑殺菌試驗時使用。 （ 3）磷酸鹽緩沖液 ： 見附錄 A。 （ 7）革蘭染色液 ： 見附錄 A。 （ 11）刻度吸管（ 、 、 ），毛細吸管。 細菌懸液制備程序 （ 1）細菌繁殖體懸液的 制備 1）取凍干菌種管，在無菌操作下打開，以毛細吸管加入適量營養(yǎng)肉湯，輕柔吹吸數(shù)次，使菌種融化分散。 — 31— 2） 取菌種第 3代～ 14代的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物（ 18h～24h），用 吸取 ml～ ， 反復吹吸，洗下菌苔。 應當天使用不得過夜。用接種環(huán)取第 1代培養(yǎng)的菌懸液，劃線接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上，于 37℃培養(yǎng) 18h～ 24h。 當芽孢形成率達 95% 以上 時 ，即 可進行以下處理。②將涂片放入平皿內(nèi)，片上放兩層濾紙，滴加足量的 % 孔雀綠水溶液。水洗，待干后鏡檢。將第一 和第二批洗下的菌懸液集中于一含玻璃珠的無菌三角燒瓶中，振搖 5min，打碎菌塊，使成均勻的芽孢懸液。棄上清液，加蒸餾水吹吸使芽孢重新懸浮。待冷至室溫后，保存于 4℃ 冰箱中備用。 菌片的制備程序 （ 1）消毒試驗中使用的菌片是以菌液滴加于載體上制成。10mm 。 （ 3）布片用白平紋棉布制作。 （ 4）載體經(jīng)壓力蒸汽滅菌后，使用滴染法 染菌 。10 8cfu/ml～ 5179。用 10μl 移液器接滅菌塑料吸頭滴染菌液，并用接種環(huán)涂勻整個載體表面。10 6 cfu/片。 （ 3） 細菌繁殖體在烤干過程中，可引起部分死亡，如銅綠假單胞菌在 37℃ 干 燥 過程中，滴度最高可下降 1個對數(shù)值。 （ 6）制得的菌懸液和菌片，用畢應隨時放入冰箱內(nèi)，盡量減少在室溫下放置 時間，以 減少 細菌的自然死亡。 （ 3）營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 ： 見附錄 A。對菌片、采樣棉拭與小型固體樣本等，應將其上的細菌洗下成為菌懸液后進行培養(yǎng)計數(shù)。以上操作應嚴格按無菌要求進行。 （ 4）將 101 管依前法用電動混合器混合 20s（或在手掌上用力振敲 80次），混勻，再吸取出 102 管內(nèi)。每一稀釋度接種 3個平皿。 （ 7）將平皿蓋好，即刻輕輕搖動混勻，平放于臺上。 （ 9）對菌片和采樣棉拭洗液的活菌培養(yǎng)計數(shù)，先按各試驗要求處理（如去除殘留消毒劑等），而后取其最終樣液按上法進行培養(yǎng)計數(shù)。 對估計菌量極少的樣本（如消毒處理后樣本），在培養(yǎng)計數(shù)時可不作稀釋，即使平板菌落數(shù)未達 15時，亦可用其計算最終結果。對誤差率的自檢，可按以下公式計算。 （ 4）稀釋或取液時要準確，盡量減少吸管使用中產(chǎn)生的誤差。傾注和搖動時，動作應盡量平穩(wěn)，以利細菌分散均勻，便于計數(shù)菌落。 殘留消毒劑的去除方法 目 的 在化學消毒試驗中，達到規(guī)定消毒時間終點時，要求立即終止殘留消毒劑的繼續(xù)作用，以便準確檢測出消毒體系中殘留存活的微生物及其數(shù)量。 （ 2）對微生物無害，不減少微生物應有的回收量。本法同時含有稀釋作用效果（至少 1:1稀釋，常用 1:10稀釋） ， 是最為普遍使用的方法。 （ 2）過濾沖洗法 將經(jīng)消毒劑作用過的微生物樣本，立即加入適量稀釋液中混勻（通過適量稀釋，可減輕消毒劑的持續(xù)作用），并傾入裝有微孔濾膜的濾器內(nèi)，接真空泵抽吸過濾（或加壓過濾）后，再加適量稀釋液沖洗，同時過濾，可去除殘留的消毒劑。 （ 3）稀釋法 將經(jīng)消毒劑作用過的微生物樣本，用稀釋液稀釋，降低殘留消毒 — 36— 劑濃度，以消除對微生物的抑制作用。本法應按擬進行試驗具體情況，經(jīng)鑒定合格后再使用。此點。 注意事項 （ 1）處理時應嚴守無菌操作要求，所有試液須無菌，接觸樣本和試液的器材（如吸管、平皿、試管、濾材等）亦均須經(jīng)滅菌，以免污染樣本，影響試驗結果。本法可單獨使用，但更常見的是與其它方法同時使用。本除藥方法應按擬進行試驗具體情況，經(jīng)鑒定合格后再使用。所以，在消毒試驗前仍應將擬用中和劑按試驗具體情況，經(jīng)鑒定合格后再使用。 （ 4）必須按規(guī)定方法進行鑒定試驗，并認為合格者方可在相應的消毒試驗中使用。殘留消 毒劑的去除（下簡稱除藥），可排除殘留消毒劑對微生物的抑制，從而使試驗獲得正確結果。 （ 8）為提高試驗成功率，最好先用濁度計對 原菌液含菌量做出估計，盡可能在首次試驗時所取的有限稀釋范圍內(nèi)（ 2個 ～ 3個 稀釋度）即有長菌在 15cfu～ 300cfu 之 間的平板。 （ 6）樣液接種于平皿后應盡快傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，避免樣液干燥于平皿上，影響結果的準確性。 （ 2）認真檢查試驗器材有無破損（要 特別注意試管底的裂痕和破洞），以防丟失樣本和污染環(huán)境。菌量單位為 cfu。以菌 — 34— 落數(shù)在 15cfu～ 300cfu的平板為準，每個稀釋度 3 個平板 生長菌落數(shù)全合乎上述標準，則以該 3個平板的菌落平均值作為結果；若有 2個符合上述標準，則以該合格的兩個平板菌落的平均值為結果。 （ 8）每日觀察細菌生長情況。平皿加樣前，應先按組編號，以免弄混。必要時，還可作某稀釋度的 1:1或 1:4稀釋。各組由左向右，逐管標上 10 10 103......等。具體方法如下 : 取含 稀釋液無菌試管，對菌片或小型固體樣本直接投入即可，對棉拭則將其采樣端剪入管內(nèi)，每管一份樣本。其操作程序如下。 試驗器材 （ 1）刻度吸管（ 、 ）。 （ 4）配制菌懸液和制備菌片時，嚴格按無菌要求操作，以防污染 — 33— 雜菌，影響隨后殺菌試驗的結果。作為菌懸液含菌濃度或菌片染菌量的正式報告（如殺菌試驗中陽性對照組菌懸液或菌片所含菌量），必須 以活菌培養(yǎng)計數(shù)的實測結果為準，不得使用根據(jù)比濁法判定的估計值。 （ 5）每個菌片的回收菌數(shù)，按活菌培養(yǎng)計數(shù)所得結果，應為 5179。 滴染法染菌時，將經(jīng)滅菌的載體片平鋪于無菌平皿 內(nèi)，逐片滴加菌液。細菌繁殖體，可直接使用經(jīng)18h～ 24h培養(yǎng)的斜面 培養(yǎng)物，細菌芽孢可使用 4℃ 冰箱貯存液。此法制成的載體大小一致，且無毛邊。 （ 2）所用載體（除濾紙片外）于染菌前，應進行脫脂處理。根據(jù)其特點選擇適宜材料載體作為代表。 10）芽孢懸液在使用時，應先進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。 — 32— 8）將洗凈的芽孢懸浮于三角燒瓶內(nèi)蒸餾水中，并加入適量小玻璃珠。 6）用無菌棉花或紗布過濾芽孢懸液，清除其中的瓊脂凝塊。 4）羅氏瓶培養(yǎng)物，用 吸管加 無菌蒸餾水于每一羅氏瓶中，以 L棒輕輕推刮下菌苔。取出，去濾紙，用自來水沖洗殘留孔雀綠溶 液。 改良芽孢染色法：①用接種環(huán)取菌樣涂布于玻片上，待自然干燥。 2）用 吸管吸取 ml～ 第 3代～ 5代的 18h～ 24h 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物，接種于羅氏瓶中營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基表面，將其搖動使菌液布滿營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的表面，再將多余肉湯培養(yǎng)物吸出， 將羅氏瓶 置 于 37℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng) 5d～ 7d。 （ 2）細菌芽孢懸液的制備 1）取凍干菌種管，在無菌操作下打開，以毛細吸管吸加適量營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，輕柔吹吸 數(shù)次，使菌種融化 分散。 3）初步制成的菌懸液，先用細菌濃度比濁測定法粗測其含菌濃度，然后以稀釋液稀釋至所需使用的濃度。用接種 — 30— 環(huán)取第 1代培養(yǎng)的菌