【正文】 操作要點(diǎn)： ① 對接觸消毒劑的微生物樣本，在達(dá)到規(guī)定作用時(shí)間后，即時(shí)以對微生物無害的稀釋液稀釋，稀釋比例隨試 驗(yàn)需要決定； ② 電動(dòng) 混合或敲打振蕩，使之混勻； ③ 吸取稀釋樣液進(jìn)行隨后培養(yǎng)檢測。多用于難以找到適宜中和劑的消毒劑試驗(yàn)中，如以植物提取物制備的消毒劑。 （ 3）不破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成份，不影響其透明度。勿使培養(yǎng)基外溢，以免影響結(jié)果的準(zhǔn)確性和造成環(huán)境的污染。 （ 1）平板間誤差率計(jì)算公式 ： %100?? 平板間菌落平均數(shù)平板間菌落數(shù)平均差平板間誤差率 平板數(shù) 的絕對值之和各平板菌落數(shù)平板間菌落平均數(shù)平板間菌落數(shù)平均差 )( ?? 平板數(shù)各平板菌落數(shù)之和平板間菌落平均數(shù) ? （ 2）稀釋度間誤差率計(jì)算公式 ： %100?? 稀釋度間菌落平均數(shù)稀釋度間菌落數(shù)平均差稀釋度間菌落數(shù)誤差率 稀釋度數(shù) 的絕對值之和各稀釋度菌落數(shù)稀釋度間菌落平均數(shù)稀釋度間菌落平均差 )(= 稀釋度數(shù) 和各稀釋度平均菌落數(shù)之稀釋度間菌落平均數(shù) = 注意事項(xiàng) （ 1）嚴(yán)格無菌操作，防止污染。 （ 10）計(jì)數(shù)菌落時(shí)，一般以肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查。一般需接種 2個(gè)～ 3個(gè)不同稀釋度。 （ 2）將試管按需要數(shù)量分組排列于試管架上， 每管加入 稀釋液。 （ 4）電動(dòng)混合器 操作程序 本規(guī)范要求在殺菌試驗(yàn)中的活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)統(tǒng)一使用傾注法。此時(shí)，應(yīng)提高初始菌濃度，以便達(dá)到所需的菌量 。滴染菌液后，染菌載體可置 37℃溫箱內(nèi)干 燥 （約 20min～ 30min），或置室溫下自然陰干后再使用。 染菌用菌懸液：使用 TSB營養(yǎng)肉湯配制。 當(dāng)以金屬片為載體時(shí)，因方形金屬載體在振敲時(shí)可將玻璃試管撞碎，故改用 12mm 直徑圓形金屬片（厚 ）。 有效使用期為半年。 5）必要時(shí)，將盛裝菌懸液的三角燒瓶置 45℃ 水浴中 24h，使菌自溶斷鏈，分散成單個(gè)芽孢。將平皿蓋好，放 54℃ ～56℃ 條件下，加熱 30min。挑取上述第 2 代培養(yǎng)物中典型菌落，接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，于 37℃ 培養(yǎng) 18h～ 24h，即為第 3 代培養(yǎng)物。隨后，用 移至另一無菌試管中，用電動(dòng)混合器混合 （振蕩） 20s，或在手掌上振敲 80次，以使細(xì)菌懸浮均勻。 （ 12）數(shù)字可調(diào)移液器（ 10μl ， 20μl ， 100μl ， 200μl ， 1000μl ）及配套用一次性塑料吸頭。 （ 4）無菌蒸餾水。 — 29— 消毒 產(chǎn)品消毒效果檢 驗(yàn)技術(shù) 規(guī)范 消毒劑殺微生物試驗(yàn) 適用范圍 主要適用于消毒劑鑒定和日常監(jiān)測，用來評價(jià)各種用途的消毒劑對微生物的殺滅效果。要注意自我保護(hù)，既要防止或減少受到消毒因子的傷害又要避免受到微生物感染。 16)必要時(shí)，到達(dá)規(guī)定的消毒作用時(shí)間后，由檢驗(yàn)人員對不同消毒對象進(jìn)行消毒后采樣。 作浸泡消毒時(shí)，必須使消毒液浸透被消毒物品。 5)進(jìn)入疫點(diǎn)時(shí)，應(yīng)先消毒有關(guān)通道 。 2)病人陪伴和護(hù)理人員，除做好病人的隨時(shí)消毒外，應(yīng)做好本人的衛(wèi)生防護(hù)，護(hù)理病人后， 應(yīng)消毒雙手。 4)疑似傳染病疫源地的消毒：可按疑似的該類傳染病疫源地進(jìn)行消毒處理或按下一條進(jìn)行 處 理。 30cm179。 （ 3）對丙類傳染病中的急性出血性結(jié)膜炎、感染性腹瀉等由病人或其陪護(hù)人進(jìn)行消毒處理。 消毒工作中的個(gè)人防護(hù) 消毒因子大多對人是有害的，因此，在進(jìn)行消毒時(shí)工作人員一定要有自我保護(hù)的意識和采取自我保護(hù)的措施，以防止消毒事故 的發(fā)生和因消毒操作方法不當(dāng)可能對人體造成的傷害。 5）消毒物品上微生物污染特別嚴(yán)重時(shí)，應(yīng)加大消毒藥劑的使用劑量和 /或延長消毒作用時(shí)間。 2）中度危險(xiǎn)性物品，一般情況下達(dá)到消毒即可，可選用中水平或高水平消毒法。 （ 3）真菌。根據(jù)其危害程度將其分為三類： （ 1）高度危險(xiǎn)性物品：這類物品是穿過皮膚或黏膜而進(jìn)入無菌的組織或器官內(nèi)部的器材，或與破損的組織、皮膚、黏膜密切接觸的器材和用品，例如，手術(shù)器械和用品、穿刺針、輸血器材、輸液器材、注射的藥物和液體、透析器、 血液和血液制品、導(dǎo)尿管、膀胱鏡、腹腔鏡、臟器移植物和活體組織檢查鉗等 。屬于此類的方法有：熱力滅菌、電離輻射滅菌、微波滅菌、等離子體滅菌等物理滅菌方法，以及用甲醛、戊二醛、環(huán)氧乙烷、過氧乙酸、過氧化氫等消毒劑進(jìn)行滅菌的方法。 1）在急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)、急性吸入毒性試驗(yàn)、亞急性毒性試驗(yàn)、致突變試驗(yàn)、亞慢性毒性 試 驗(yàn)、致畸胎試驗(yàn)、慢性 毒性試驗(yàn)和致癌試驗(yàn)時(shí)，一般采用消毒劑原形樣品。接觸皮膚傷口的消毒劑，還必須增做一次破損皮膚刺激試驗(yàn)；接觸創(chuàng)面的消毒劑，應(yīng)增做眼刺激試驗(yàn)。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，判定是否需繼續(xù)做其它項(xiàng)目試驗(yàn)。 消毒產(chǎn)品毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)評價(jià)程序 消毒劑安全性毒理學(xué)評價(jià) ， 可分為 4個(gè)階段。 容量分析實(shí)驗(yàn)室工作溫度應(yīng)控制在 20℃～ 25℃。本規(guī)范中滴定液濃度的計(jì)算，除碘滴定液按原子量計(jì)算外，其它滴定液均按分子量計(jì)算。 溶液或消毒劑的有效成分含量的表示，以 mg/L 或 mg/kg為主。 （ 2）實(shí)用劑量不低于模擬現(xiàn)場試驗(yàn)或現(xiàn)場試驗(yàn)所測得的結(jié)果。試驗(yàn)組應(yīng)列出其殺滅對數(shù)值，殺滅對數(shù)值≥ ，無須列出具體數(shù)值，當(dāng)殺滅對數(shù)值≤ 時(shí)，則應(yīng)列出具體殺滅對數(shù)值。表格中每一欄目應(yīng)用藍(lán)黑或碳素墨水逐項(xiàng)填寫。 中和劑鑒定試驗(yàn) ， 應(yīng)將各組 3 次重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果平行列出 ， 以便對比分析。 （ 4）安全性 試驗(yàn) 包括電器安全試驗(yàn)和消毒器械產(chǎn)生的化學(xué)因子的毒理學(xué) 試驗(yàn) 。 （ 1）殺菌因子強(qiáng)度或濃度的測定 殺菌因子指消毒器械所產(chǎn)生的具有殺菌作用的物理或化學(xué)因子。 表 11 殺滅試驗(yàn)中微生物的選擇 消毒對象 微 生 物 的 種 類 金黃色葡萄球 菌 綠膿 桿菌 大腸 桿菌 白色念珠菌 黑曲 霉菌 白色葡萄球菌 龜分枝桿菌膿腫亞種 枯草桿菌黑色變種芽孢 脊髓灰質(zhì)炎病 毒 手 皮膚和黏膜 + + + + + + 足 + + + 空氣 + 醫(yī)療器械和用品 (滅菌與高水平消毒 ) + 醫(yī)療器械和用品 + + + + — 18— ( 中 水 平 消毒 ) 醫(yī)療器械和用品 ( 低 水 平 消毒 ) + + + 一般物品表面 和織物 + + 食 (飲 )具 + + 飲水和游泳池水 + 瓜果、蔬菜 + 【注】表中‘ +’為必做試驗(yàn)的微生物，消毒劑特指對某微生物具有殺滅作用者，則除按表中要求外，還需另選做該微生物殺滅試驗(yàn)。以化學(xué)成分為主的消毒劑，用化學(xué)法進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)；以植物為主要有效成分的消毒劑，用微生物法進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)；以化學(xué)成分和植物為有效成分 — 17— 的消毒劑，同時(shí)用化學(xué)法和微生物法進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。 消毒產(chǎn)品鑒定測試項(xiàng)目的確定 （ 1）有效成分含量的測定：有效成分系指具有殺菌作用的成分。使用濃度低，作用時(shí)間短者與使用濃度高和作用時(shí)間長者同時(shí)存在時(shí)，以前者 為準(zhǔn)。 （ 3）用于評價(jià)醫(yī)療器械滅菌的消毒劑和消毒器械滅菌的功能鑒定試驗(yàn)應(yīng)用載體定性法，試驗(yàn)應(yīng)重復(fù) 5 次。 無菌操作的基本要求 （ 1）試驗(yàn)開始前，應(yīng)以濕式方法清潔臺面和打掃室內(nèi)地面，然后以紫外線或其他方法對實(shí)驗(yàn)室內(nèi)空氣進(jìn)行消毒； （ 2）實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)穿戴工作服、口罩、帽子；進(jìn)行無菌檢驗(yàn)時(shí) ， 需經(jīng)風(fēng)淋后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，然后 ， 正確穿戴好無菌隔離衣、帽和口罩； （ 3）每吸取一次不同樣液應(yīng)更換無菌吸管，接種 環(huán)（針）需在火焰上燒灼滅菌后，才可再次使用； （ 4）要求無菌的試劑，如蒸餾水、生理鹽水、磷酸鹽緩沖液、培養(yǎng)基、牛血清白蛋白、標(biāo)準(zhǔn)硬水、中和劑等，均需滅菌或過濾除菌； （ 5）無菌器材和試劑，使用前須檢查容器或包裝是否完整，有破損者不得使用； （ 6）正在使用的無菌器材和試劑不得長時(shí)間暴露于空氣中； （ 7）移液或接種時(shí)，應(yīng)將試管口和瓊脂平板靠近火焰，防止污染； （ 8）所有用過的污染器材，應(yīng)立即放入盛有消毒液的容器中，以防止對周圍環(huán)境和清潔物品造成污染； （ 9）若不慎發(fā)生微生物培養(yǎng)物摔碎或其他試驗(yàn)微生物泄漏事故時(shí)， 不論是否具有致病性，均應(yīng)立即對污染及可能波及的區(qū)域進(jìn)行消毒處理； （ 10）全部試驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)按常規(guī)對室內(nèi)空氣和環(huán)境表面進(jìn)行消毒處理。又稱作用時(shí)間、處理時(shí)間。如，設(shè)定 SAL為 106，即經(jīng)滅菌處理后在一百萬件物品中最多只允許有一件物品存在活微生物。 自然菌 natural bacteria 在消毒試驗(yàn)中 ， 指存在于某一試驗(yàn)對象上非人工污染的細(xì)菌。 高效消毒劑 highefficacy disinfectant 指可殺滅一切細(xì)菌繁殖體（包括分枝桿菌）、病毒、真菌及其孢子等，對細(xì)菌芽孢（致病性芽孢菌）也有一定殺滅作用，達(dá)到高水平消毒要求的制劑。本規(guī)范含總則、消毒檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)范、醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)消毒技術(shù)規(guī)范和疫源地消毒技術(shù)規(guī)范四個(gè)部分。 生物指示物 biological indicator 將適當(dāng)載體染以一定量的特定微生物 ， 用于指示消毒或滅菌效果的制品。 中和劑 neutralizer 在微生物殺滅試驗(yàn)中，用以消除試驗(yàn)微生物與消毒劑的混懸液中和微生物表面上殘留的消毒劑，使其失去對微生物抑制和殺滅作用的試劑。 殺滅率 killing rate， KR 在微生物殺滅試驗(yàn)中，用百分率表示微生物數(shù)量減少的值。 無菌檢驗(yàn) sterility testing 證明滅菌后的物品中是否存在活微生物所進(jìn)行的試驗(yàn)。 消毒產(chǎn)品功效檢驗(yàn)的基本原則和要求 消毒產(chǎn)品檢驗(yàn)的基本要求 — 15— 消毒實(shí)驗(yàn)室的基本要求 檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采取封閉式布局，建筑應(yīng)便于清 潔、消毒。 （ 3）化學(xué)指示物、生物指示物、滅菌包裝、衛(wèi)生用品和 1 次性使用醫(yī)療用品，送檢單位應(yīng)送檢 3批樣品。 試驗(yàn)設(shè)3 個(gè)不同作用時(shí)間，原則上第一時(shí)間為說明書規(guī)定的最短作用時(shí)間的 倍，第二時(shí)間為最短作用時(shí)間，第三時(shí)間為最短作用時(shí)間的 倍。對用于 滅菌的消毒劑 則以說明書中規(guī)定的使用濃度和其 滅菌效果。 （ 2） pH 值的測定：所有消毒劑需測定消毒劑原液的 pH 值，固體消毒劑應(yīng)測定最高應(yīng)用濃度的 pH 值。 不同用途的消毒劑和消毒 器械，實(shí)驗(yàn)室殺滅微生物試驗(yàn)的代表微生物應(yīng)按照 表 11 所列者 選擇 。其中醫(yī)療器械的模擬現(xiàn)場試驗(yàn)應(yīng)區(qū)分消毒或滅菌。其要求與消毒劑的金屬腐蝕性試驗(yàn)相同。復(fù)方消毒劑以其殺菌主要有效成分含量表示；植物消毒劑以百分濃度表示，如 1 份原液加 4 份水即該消毒劑溶液的濃度為 20%。必要時(shí)，還需要經(jīng)過多種試驗(yàn)，多個(gè) 實(shí)驗(yàn)室重復(fù)，查 閱國內(nèi)外文獻(xiàn) ， 從各個(gè)角度證明，才能做出可靠的結(jié)論。各樣品檢測可能有其特殊 性，因樣品用途、用法不同，其檢驗(yàn)條件和檢驗(yàn)方法亦可隨之改變，若檢驗(yàn)報(bào)告中不說明其改變的情況，將會(huì)影響對所得結(jié)果做出準(zhǔn)確的評價(jià)。 殺菌劑量包含有兩個(gè)參數(shù)，一是殺菌因子的強(qiáng)度，二是作用的時(shí) 間。 以滴定法分析有效成分時(shí)，滴定液用量不宜超過滴定管所標(biāo)示的量。未經(jīng)濃度標(biāo)定者則稱“溶液”，以示區(qū)別。 對儀器設(shè)備進(jìn)行計(jì)量檢定。如果無法提供空白樣品，可用加入標(biāo)準(zhǔn)量法進(jìn)行方法可靠性的論證。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果 ， 判斷是否需繼續(xù)做其它試驗(yàn)項(xiàng)目。視其試驗(yàn)結(jié)果，判定是否需做其它試驗(yàn)項(xiàng)目。 毒理學(xué)試驗(yàn)用消毒產(chǎn)品樣品的規(guī)定 （ 1）受試樣品必須是按照既定的生產(chǎn)工藝和配方進(jìn)行規(guī)范化生產(chǎn)的消毒產(chǎn)品，其成分和濃度與實(shí)際生產(chǎn)和銷售的相同。 3）在皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)時(shí)，采用的誘導(dǎo)濃度應(yīng)為引起皮膚刺激反應(yīng)的最低濃度或原液，激發(fā)濃度應(yīng)為不引起皮膚刺激反應(yīng)的最高濃度或 原液。 （ 4）低水平消毒法：只能殺滅細(xì)菌繁殖體（分 枝桿菌除外）和親脂病毒的化學(xué)消毒劑和通風(fēng)換氣、沖洗等機(jī)械除菌法。例如，毛巾、面盆、痰盂（杯）、地面、便器、餐具、茶 具、墻面、桌面、床面、被褥、一般診斷用品 (聽診器、聽筒、 血壓計(jì)袖帶等 )等。 選擇消毒、滅菌方 法的原則 （ 1）使用經(jīng)衛(wèi)生行政部門批準(zhǔn)的消毒藥、械，并按照批準(zhǔn)使用的范圍和方法在醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)和疫源地等消毒中使用。 2）對受到真菌、親水病毒、螺旋體、支原體、衣原體和病原微生物污染的物品，選用中水平以上的消毒方法。 4）選擇表面消毒方法， 應(yīng)考慮表面性質(zhì)，光滑表面可選擇紫外線消毒器近距離照射，或液體消毒劑擦拭；多孔材料表面可采用噴霧消毒法。 (5) 處理銳利器械和用具應(yīng)采取有效防護(hù)措施，以避免可能對人體的刺、割等傷 害。 裝備要求 承擔(dān)疫源地消毒任務(wù)的單位，應(yīng)根據(jù)工作需要和條件配備消毒工具和防護(hù)用品，儲備一定數(shù)量的消毒劑。 — 27— 2)消毒持續(xù)時(shí)間：以傳染病流行情況和病原體監(jiān)測結(jié)果為依據(jù)確定消毒的持續(xù)時(shí)間。 (2)疫點(diǎn)的隨時(shí)消毒 1)對病人應(yīng)根據(jù)病情做到“三分開”與“六消毒”。用過氧乙酸或含氯制劑時(shí)，須戴防護(hù)眼鏡。 — 28— 10)如系腸道傳染病，應(yīng)先于室內(nèi)滅蠅，再進(jìn)行消毒。 15