【正文】 )疫點(diǎn)消毒工作完畢，對(duì)消毒人員穿著的工作服、膠靴等進(jìn)行噴灑消毒后脫下。選擇消毒因子時(shí)，應(yīng)盡量采用物理法消毒。 6)攜回的污染衣物應(yīng)立即分類作最終消毒。在上述規(guī)定的菌株基礎(chǔ)上，根據(jù)消毒劑特定用途或試驗(yàn)特殊需要，還可增選其他菌株。 （ 9）恒溫水浴箱。用接種 — 30— 環(huán)取第 1代培養(yǎng)的菌懸液，劃線接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上，于 37℃培養(yǎng) 18h～ 24h。 （ 2）細(xì)菌芽孢懸液的制備 1）取凍干菌種管，在無(wú)菌操作下打開，以毛細(xì)吸管吸加適量營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，輕柔吹吸 數(shù)次，使菌種融化 分散。 改良芽孢染色法：①用接種環(huán)取菌樣涂布于玻片上，待自然干燥。 4）羅氏瓶培養(yǎng)物，用 吸管加 無(wú)菌蒸餾水于每一羅氏瓶中，以 L棒輕輕推刮下菌苔。 — 32— 8）將洗凈的芽孢懸浮于三角燒瓶?jī)?nèi)蒸餾水中，并加入適量小玻璃珠。根據(jù)其特點(diǎn)選擇適宜材料載體作為代表。此法制成的載體大小一致，且無(wú)毛邊。 滴染法染菌時(shí)，將經(jīng)滅菌的載體片平鋪于無(wú)菌平皿 內(nèi)，逐片滴加菌液。作為菌懸液含菌濃度或菌片染菌量的正式報(bào)告（如殺菌試驗(yàn)中陽(yáng)性對(duì)照組菌懸液或菌片所含菌量），必須 以活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)的實(shí)測(cè)結(jié)果為準(zhǔn)，不得使用根據(jù)比濁法判定的估計(jì)值。 試驗(yàn)器材 （ 1）刻度吸管（ 、 ）。具體方法如下 : 取含 稀釋液無(wú)菌試管，對(duì)菌片或小型固體樣本直接投入即可，對(duì)棉拭則將其采樣端剪入管內(nèi)，每管一份樣本。必要時(shí)，還可作某稀釋度的 1:1或 1:4稀釋。 （ 8）每日觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況。菌量單位為 cfu。 （ 6）樣液接種于平皿后應(yīng)盡快傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，避免樣液干燥于平皿上，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。殘留消 毒劑的去除（下簡(jiǎn)稱除藥），可排除殘留消毒劑對(duì)微生物的抑制，從而使試驗(yàn)獲得正確結(jié)果。所以，在消毒試驗(yàn)前仍應(yīng)將擬用中和劑按試驗(yàn)具體情況，經(jīng)鑒定合格后再使用。本法可單獨(dú)使用，但更常見的是與其它方法同時(shí)使用。此點(diǎn)。 （ 3）稀釋法 將經(jīng)消毒劑作用過(guò)的微生物樣本，用稀釋液稀釋，降低殘留消毒 — 36— 劑濃度，以消除對(duì)微生物的抑制作用。本法同時(shí)含有稀釋作用效果（至少 1:1稀釋，常用 1:10稀釋） ， 是最為普遍使用的方法。 殘留消毒劑的去除方法 目 的 在化學(xué)消毒試驗(yàn)中，達(dá)到規(guī)定消毒時(shí)間終點(diǎn)時(shí)，要求立即終止殘留消毒劑的繼續(xù)作用，以便準(zhǔn)確檢測(cè)出消毒體系中殘留存活的微生物及其數(shù)量。 （ 4）稀釋或取液時(shí)要準(zhǔn)確，盡量減少吸管使用中產(chǎn)生的誤差。 對(duì)估計(jì)菌量極少的樣本（如消毒處理后樣本），在培養(yǎng)計(jì)數(shù)時(shí)可不作稀釋，即使平板菌落數(shù)未達(dá) 15時(shí)，亦可用其計(jì)算最終結(jié)果。 （ 7）將平皿蓋好，即刻輕輕搖動(dòng)混勻，平放于臺(tái)上。 （ 4）將 101 管依前法用電動(dòng)混合器混合 20s（或在手掌上用力振敲 80次），混勻，再吸取出 102 管內(nèi)。對(duì)菌片、采樣棉拭與小型固體樣本等，應(yīng)將其上的細(xì)菌洗下成為菌懸液后進(jìn)行培養(yǎng)計(jì)數(shù)。 （ 6）制得的菌懸液和菌片，用畢應(yīng)隨時(shí)放入冰箱內(nèi)，盡量減少在室溫下放置 時(shí)間，以 減少 細(xì)菌的自然死亡。10 6 cfu/片。10 8cfu/ml～ 5179。 （ 3）布片用白平紋棉布制作。 菌片的制備程序 （ 1）消毒試驗(yàn)中使用的菌片是以菌液滴加于載體上制成。棄上清液，加蒸餾水吹吸使芽孢重新懸浮。水洗，待干后鏡檢。 當(dāng)芽孢形成率達(dá) 95% 以上 時(shí) ，即 可進(jìn)行以下處理。 應(yīng)當(dāng)天使用不得過(guò)夜。 細(xì)菌懸液制備程序 （ 1）細(xì)菌繁殖體懸液的 制備 1）取凍干菌種管，在無(wú)菌操作下打開，以毛細(xì)吸管加入適量營(yíng)養(yǎng)肉湯，輕柔吹吸數(shù)次，使菌種融化分散。 （ 7）革蘭染色液 ： 見附錄 A。 菌懸液與菌片的制備 適用范圍 制備消毒 劑殺菌試驗(yàn)用細(xì)菌懸液與菌片，以供消毒劑殺菌試驗(yàn)時(shí)使用。凡應(yīng)消毒的物品，不得遺漏。 (4)消毒人員注意事項(xiàng) 1）出發(fā)前，要檢查應(yīng)攜 帶的消毒工具是否齊全無(wú)故障，消毒劑是否足夠。 13)室內(nèi)消毒后，必要時(shí)對(duì)廁所、垃圾、下水道口、自來(lái)水龍頭、缸水和井水等進(jìn)行消毒。 8)消毒前應(yīng)關(guān)閉門窗，將水缸蓋好，將未被污染的貴重衣物、飲食類物品、名貴字畫及陳 列物品收藏好。 3)對(duì)脫掉外衣應(yīng)放在自帶的布袋中（不要放在污染或可能受到污染的地方）。加強(qiáng)易感人群的保護(hù)。常用消毒劑有過(guò)氧乙酸、含氯消毒劑、碘伏等。 （ 6）非專業(yè)消毒人員開展疫源地消毒前應(yīng)接受培訓(xùn)。 (3) 氣體化學(xué)消毒劑：應(yīng)防止有毒有害消毒氣體的泄漏，經(jīng)常檢 — 26— 測(cè)消毒環(huán)境中該類氣體的濃度，確保在國(guó)家規(guī)定的安全范圍之內(nèi)；對(duì)環(huán)氧乙烷氣體消毒劑，還應(yīng)嚴(yán)防發(fā)生燃燒和爆炸事故。 2）不耐熱、不耐濕，以及貴重物品，可選擇環(huán)氧乙烷或低溫蒸汽甲醛氣體消毒、滅菌。例如 ，在有病原微生物污染時(shí)，必須針對(duì)所污染病原微生物的種類選用有效的消毒方法。 （ 6）細(xì)菌芽孢，例如炭疽桿菌芽孢、枯草桿菌芽孢等。 （ 3）低度危險(xiǎn)性物品：雖有微生物污染，但在一般情況下無(wú)害，只有當(dāng)受到一定量的病原微生物污染時(shí)才造成危害的物品。屬于此類的方法有：熱力、電力輻射、微波和紫外線等以及用含氯、二氧化氯、過(guò)氧乙酸、過(guò)氧化氫、含溴消毒劑、臭氧、二溴海因等甲基乙內(nèi)酰脲類化合物和一些復(fù)配的消毒劑等消毒因子進(jìn)行消毒的方法。 2）在皮膚刺激試驗(yàn)、急性眼刺激試驗(yàn)和陰道黏膜刺激試驗(yàn)中所用受試物的濃度，通常是對(duì)皮膚、黏膜消毒時(shí)應(yīng)用濃度的 5倍。 (6) 黏膜消毒劑：除按第一類、第二類或第三類消毒劑的要求進(jìn)行毒理學(xué)試驗(yàn)外 ， 還必須做急性眼刺激試驗(yàn)和陰道黏膜刺激試驗(yàn)。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，判定是否需繼續(xù)做其它試驗(yàn)。原則上需進(jìn)行上述 4 個(gè)階段的毒理學(xué)試驗(yàn)。 粉劑和片劑的取樣量為測(cè)定所需量的 10 倍，經(jīng)研磨后精確稱取適量樣品進(jìn)行測(cè)定。所有試驗(yàn)結(jié)果 (包括消毒劑有效成分測(cè)定及滴定液標(biāo)定 )應(yīng)當(dāng)以空白試驗(yàn)校正。配制滴定液試劑 (如硫代硫酸鈉 )因配制后尚需專門處理，亦可用化學(xué)純。消毒劑有 效成分必須符合我國(guó)允許的消毒劑組分。 此外，對(duì)試驗(yàn)中出現(xiàn)某些異常現(xiàn)象亦應(yīng)加以說(shuō)明。 檢測(cè)報(bào)告的要求 檢測(cè)報(bào) 告是試驗(yàn)情況和結(jié)果的書面表達(dá)，具有長(zhǎng)期保存和法律價(jià)值，因此必須逐項(xiàng)填寫 清楚。如有不同于通常規(guī)律的結(jié)果，應(yīng)重新考慮實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)?？諝庀緞┬栌眠M(jìn) — 19— 行模擬現(xiàn)場(chǎng)和現(xiàn)揚(yáng)試驗(yàn)?；瘜W(xué)因子則由消毒器械產(chǎn)生具有殺菌作用的化學(xué)物質(zhì) ， 常見有次氯酸鈉、臭氧、二氧化氯等，可測(cè)定所產(chǎn)生消毒液中有效成分的濃度。黏膜消毒劑的模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)或現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)可用皮膚代替。試驗(yàn)前 ， 必須先按不同種類的試驗(yàn)微生物分別進(jìn)行相應(yīng)的化學(xué)中和劑或其它殘留消毒劑去除法的鑒定試驗(yàn)，選出適宜 的中和試驗(yàn)微生物以金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)ATCC 6538 作為細(xì)菌繁殖體中化膿 性球 菌的代表； 大腸桿菌 (Escherichia coli)8099 作為細(xì)菌繁殖體中腸道菌的代表； 銅綠假單胞菌 (Pseudomonas aeruginosa)ATCC 15442作為醫(yī)院感染中最常分離的細(xì)菌繁殖體的代表； 白色葡萄球菌(Staphylococcus albus)8032 作為空氣 中 細(xì)菌 的 代表 ；龜分枝桿菌膿腫亞種 (Mycobacterium chelonae subsp. abscessus)ATCC 93326 作為人結(jié)核 分枝 桿菌的代表； 枯草桿菌黑色變種芽孢 (Bacillus subtilis )ATCC 9372 作為細(xì)菌芽孢的代表 ；白色念珠菌(Candida albicans)ATCC 10231 和黑曲霉菌 (Aspergillus niger)ATCC 16404 作為致病性真菌的代表 ；脊髓灰質(zhì)炎病毒 Ⅰ型疫苗株(PoliovirusⅠ )作為病毒的代表。復(fù)方化學(xué)消毒劑測(cè)其殺菌主要成分的含量。評(píng)價(jià)消毒劑消毒效果的現(xiàn)場(chǎng)或模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)，應(yīng)用產(chǎn)品使用說(shuō)明書的最低有效濃度和最短作用時(shí)間進(jìn)行試驗(yàn)。在無(wú)特殊要求的情況下 ， 以布片為載體。在毒理試驗(yàn)中，取 3 批樣品中含量最高者進(jìn)行試驗(yàn)。 抗菌 antibacterial 采用化學(xué)或物理方法殺滅細(xì)菌或妨礙細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖及其活性的過(guò)程。 終末消毒 terminal disinfection 傳染源離開疫源地后進(jìn)行的徹底消毒。 D 值 D value 殺滅微生物數(shù)量達(dá) 90%所需的時(shí)間 (min)。 有效氯 available chlorine 有效氯是衡量含氯消毒劑氧化能力的標(biāo)志，是指與含氯消毒劑氧化能力相當(dāng)?shù)穆攘?(非指消毒劑所含氯量 )，其含量用 mg/L 或 %濃度表示。 滅菌 sterilization — 13— 殺滅或清除傳播媒介上一切微生物的處理。 術(shù)語(yǔ) 消毒 disinfection 殺滅或清除傳播媒介上病原微生物 ， 使其達(dá)到無(wú)害化的處理。 低效消毒劑 lowefficacy disinfectant 指僅可殺滅細(xì)菌繁殖體和親脂病毒，達(dá)到消毒要求的制劑。 殺滅時(shí)間 killing time， KT 用于生物指示物抗力鑒定時(shí) ， 指 受試指示物樣本，經(jīng)殺菌因子作用后全部樣本無(wú)菌生長(zhǎng)的最短作用時(shí)間 (min)。 隨時(shí)消毒 concurrent disinfection 有傳染源存在時(shí)對(duì)其排出的病原體可能污染的環(huán)境和物品及時(shí)進(jìn)行的消毒。 載體 carrier 試驗(yàn)微生物的支持物。在殺滅試驗(yàn)時(shí)，取 3 批樣品中含量最低者進(jìn)行試驗(yàn)。 （ 4）對(duì)不宜用懸液定量法評(píng)價(jià)的消毒劑，如粘稠的消毒劑和沖洗消毒的消毒劑等的實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)用載體定量 法，試驗(yàn)應(yīng)重復(fù) 3 次。 評(píng)價(jià)消毒劑滅菌效果的模擬現(xiàn)場(chǎng)滅菌試驗(yàn)，應(yīng)用產(chǎn)品說(shuō)明書規(guī)定的最低使用濃度和 倍 的最短作用時(shí)間進(jìn)行試驗(yàn)。所測(cè)含量在產(chǎn)品有效期內(nèi)，不得低于企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的下限值。 （ 5）微生物殺滅試驗(yàn)：所有消毒劑均應(yīng)進(jìn)行本項(xiàng)檢測(cè)。 用于飲水、手、皮膚、一般物體表面消毒的消毒劑任選模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)或現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)。對(duì)物理殺菌因子應(yīng)測(cè)定其規(guī)定殺菌條件下的強(qiáng)度 ， 如對(duì)熱力殺菌器械應(yīng)測(cè)量其溫度 ， 對(duì)紫外線殺菌器材測(cè)定其輻照度值 。消毒器械產(chǎn)生的化學(xué)因子按消毒劑的要求進(jìn)行 模擬現(xiàn)場(chǎng) 或 現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)。除反復(fù)推敲試驗(yàn)過(guò)程和結(jié)果的準(zhǔn)確性外，還應(yīng)和國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)該消毒劑（消毒器械）的性能和不同試驗(yàn)方法所得結(jié)果進(jìn)行比較，以判 斷 所下結(jié)論有無(wú)不妥之處。原始記錄數(shù)據(jù)和計(jì)算應(yīng) 及時(shí)校核，整理裝訂附于檢驗(yàn)報(bào)告后 ， 入檔保存?zhèn)洳椤? 檢驗(yàn)報(bào)告的結(jié)論部分，應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果得出明確的結(jié)論。 消毒產(chǎn)品理化檢驗(yàn)基本要求 消毒劑配方中不 能含有“消毒劑禁用物質(zhì)”，也必須符合消毒劑限量物質(zhì)要求。 方法中所用試劑的純度涉及基準(zhǔn)、分析純、化學(xué)純及色譜純等，未作 專門說(shuō)明者，一般采用分析純。將滴 定管中滴定液補(bǔ)足至全量后滴定 。每批取 1 個(gè)樣品平行測(cè)定 2次，取平均值報(bào)告結(jié)果。 (1)第一類消毒劑：指我國(guó)首創(chuàng)或根據(jù)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道首次生產(chǎn)的消毒劑。首先必須做急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)和 一項(xiàng)致突變?cè)囼?yàn) (反映體細(xì)胞基因水平或染色體水平類型 的試驗(yàn) ) ；若消毒劑（皮膚黏膜消毒劑）直接用于人體，并有可能重復(fù)接觸的，還必須增做亞 急性毒性試驗(yàn)。根據(jù)消毒劑的成分 ， 估計(jì)可能有致敏作用者， — 23— 還需增做皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)。對(duì)于二元或多元包裝的消毒劑，以按比例混合配制后作為消毒劑原形。這類消毒方法應(yīng)能殺滅一切細(xì) 菌繁殖體（包括結(jié)核分枝桿菌）、病毒、真菌及其孢子和絕大多數(shù)細(xì)菌芽孢。例如，呼吸機(jī)管道、胃腸道內(nèi)窺鏡、氣管鏡、麻醉機(jī)管道、子宮帽、避孕環(huán)、壓舌板、喉鏡、體溫表等。 （ 5）分枝桿菌，例如結(jié)核分枝桿菌、龜分枝桿菌等。 3）低度危險(xiǎn)性物品，一般可用低水平消毒方法，或只作一般的清潔處理即可，僅在特殊情況下，才作特殊的消毒要求。應(yīng)遵循以下基本原則： 1）耐高溫、耐濕度的物品和器材，應(yīng)首選壓力蒸汽滅菌；耐高溫的玻璃器材、油劑類和干粉類等可選用干熱滅菌。 (2) 紫外線、微波消毒：應(yīng)避免對(duì)人體的直接照射。 （ 5）在醫(yī)院中對(duì)傳染病病人的終末消毒由醫(yī)院安排專人進(jìn)行。 (3)消毒劑：儲(chǔ)備一定 量的消毒劑并與有關(guān)廠家建立聯(lián)系，確保處理突發(fā)疫情的需要。 6)注意與其它傳染病控制措施配合：搞好傳染源的管理，疫區(qū)的封鎖、隔離，殺蠅、防蠅 ，滅鼠、防鼠，滅蚤，搞好飲用水、污水、食品的消毒及衛(wèi)生管理，搞好環(huán)境衛(wèi)生。 2)消毒人員到達(dá)疫點(diǎn)，首先查對(duì)門牌號(hào)和病人姓名，并向有關(guān)人員說(shuō)明來(lái)意，做好防疫知 識(shí)宣傳，禁止無(wú)關(guān)人員進(jìn) 入消毒區(qū)域內(nèi)。 7)必要時(shí)，由檢驗(yàn)人員對(duì)不同消毒對(duì)象進(jìn)行消毒前采樣。對(duì)污染重、經(jīng)濟(jì)價(jià)值不大的物品和廢棄物，在征得病 家同意后焚燒。 18)離開病家前，讓病家開窗通風(fēng)，擦拭打掃。 5)消毒應(yīng)有條不紊，突出重點(diǎn)。不能反映消毒劑的全面特性。 （ 6）細(xì)菌培養(yǎng)基 ： 胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（ TSA），胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（ TSB） 等， 見附錄 A。 （ 14）電動(dòng)混合器 （ 15）濁度計(jì)。 4）細(xì)菌繁殖體懸液應(yīng)保存在 4℃ 冰箱內(nèi)備用。 3）用接種環(huán)取菌樣少許涂于玻片上，固定后以改良芽孢染色法染色，并在顯微鏡（油鏡） 下進(jìn)行鏡檢。 ③ 加 % 沙黃水溶液，染 1min。 7）將過(guò)濾后的芽孢懸液，置無(wú)菌離心管內(nèi)，以 3000 r/min 速度離心 30min。 11）懷疑有雜菌污染時(shí)，應(yīng)以菌落形態(tài)、革蘭染色