【正文】 （3）子囊菌的有性繁殖4 / 66①子囊：子囊形狀有圓形，橢圓形或棒狀。（2）子囊菌的無性繁殖產(chǎn)生分生孢子或孢子器，非常發(fā)達，形狀多樣，圓形，卵形，棒形，絲狀，鐮刀形(新月形)，蠟?zāi)c形，有單孢，雙孢，多孢。子囊(Ascus)，子囊孢子(Ascospore)。（2）孢囊梗從匍匐絲上長出，頂端形成孢子囊，內(nèi)生孢囊孢子，孢子囊壁破散出孢囊孢子。接合菌亞門的致病特點其多為腐生菌，廣泛分布于土壤和糞肥中，少數(shù)為弱寄生菌，可引起果實貯藏期腐爛。④卵孢子壁厚，表面有瘤狀突起。④有性生殖形成卵孢子。③有性生殖在藏卵器內(nèi)形成一個卵孢子。②有性繁殖在藏卵器內(nèi)形成一個卵孢子。2 / 66與園藝植物有關(guān)的鞭毛菌(1)根腫菌屬（Plasmodiophora）由根腫菌屬的病菌引起的，在病組織內(nèi)這些呈魚卵狀排列的是病菌的休眠孢子囊。(3)莖基和根部被害使皮層變褐色腐爛。纖絲之間填充有膠質(zhì)鞘。鞭毛有茸鞭和尾鞭兩種。(4)鞭毛菌大多具有水生習(xí)性，因此只有在高濕、多雨、低洼積水和通風(fēng)透光不好的條件下，侵染植物導(dǎo)致病害。目 錄第一部分 微生物病理基礎(chǔ)知識 ................................................................................11－1 鞭毛菌亞門及其所致病害的特點 ................................................................11－2 接合菌亞門及其所致病害的特點 ................................................................31－3 子囊菌亞門及其所致病害的特點 ................................................................41－4 擔(dān)子菌亞門及其所致病害的特點 .................................................................71－5 半知菌亞門及其所致病害的特點 ...................................................................8第二部分 微生物病理實驗基本操作 ..........................................................................92－1 植物病理徒手制片技術(shù) .............................................................................92－2 培養(yǎng)基的配制和滅菌 ...................................................................................112－3 植物病原菌的分離和培養(yǎng) .......................................................................152－4 真菌孢子的萌發(fā) ...........................................................................................182－5 植物病原物的接種 .......................................................................................202－6 植物病原生物繪圖技術(shù) .................................................................................21第三部分微生物病理技能訓(xùn)練 ..................................................................................23實訓(xùn)一 植物病原細菌觀察 ...................................................................................23實訓(xùn)二鞭毛菌亞門真菌及其所致病害癥狀觀察 ..................................................25實訓(xùn)三　 接合菌亞門真菌及其所致病害癥狀觀察 ..............................................29實訓(xùn)四子囊菌亞門真菌及其所致病害癥狀觀 ......................................................30實訓(xùn)五 擔(dān)子菌亞門真菌及其所致病害癥狀觀察 ...............................................35實訓(xùn)六 半知菌亞門真菌及其所致病害癥狀觀察 .................................................381 / 66微生物病理技能訓(xùn)練教程第一部分 微生物病理基礎(chǔ)知識1－1 鞭毛菌亞門及其所致病害的特點鞭毛菌亞門的主要特點(1)鞭毛菌亞門真菌的共同特征是無性產(chǎn)生具 12 根鞭毛的游動孢子，因此通常稱作鞭毛菌。(5)鞭毛菌繁殖時，有的整個營養(yǎng)體全部轉(zhuǎn)變?yōu)榉敝丑w，稱為整體產(chǎn)果，如壺菌；有的只是營養(yǎng)體的一部分轉(zhuǎn)變?yōu)闋I養(yǎng)體，稱為分體產(chǎn)果。每個游動孢子具單鞭或雙鞭兩種類型。共 31 條亞纖絲。(4)葉上斑點，若由疫霉引起，病斑較大，暗褐色圓形水漬病斑；若由霜霉引起，病斑較小，黃色至褐色，邊緣不明顯，病斑受葉脈限制呈多角形，后期在病斑上長出白色至灰白色霜狀霉層。休眠孢子囊在寄主細胞內(nèi)分散呈魚卵塊狀，萌發(fā)時產(chǎn)生前端有 2 根鞭毛長短不一的游動孢子。③如引起黃瓜、茄子等幼苗瘁倒病的病菌，都屬于腐霉屬。(4)霜霉科（Peronosporaaceae） ①高等的鞭毛菌，都是植物體上的活體寄生菌，菌絲蔓延在寄生的細胞間，以吸器伸入寄主的細胞內(nèi)吸收養(yǎng)分。(5)白銹菌屬(Albugo)①活體寄生物，菌絲在寄主細胞間蔓延，以吸器伸入寄主細胞內(nèi)吸收營養(yǎng)。1－2 接合菌亞門及其所致病害的特點接合菌亞門的主要特點（1）菌絲體無隔多核，細胞壁由甲殼質(zhì)組成。已知接合菌亞門分 2 個綱、7 個目、約 600 個種。（3）有性生殖形成接合孢子（不常見）。簡單的僅為單細胞，但大多數(shù)有發(fā)達的菌絲體，菌絲有隔，每個細胞有一個、二個、多個核，壁以幾丁質(zhì)為主，營養(yǎng)體可以形成厚垣孢子。有的有色，有的無色。子囊壁有的單層壁，有的雙層壁,有的囊壁成熟后溶解，有的不溶，有的子囊頂有孔口，有的無孔口。在子囊內(nèi)排列的有散生，單列，雙列，并列，螺旋形排列。C、子囊盤—盤狀或杯狀，頂端開口大。常見病狀：畸形，葉片皺縮、果實膨大等。在病部形成白粉或小黑點。⑤ 有性世代：寄生后期在菌絲的上部形成閉囊殼(小黑點)，有附屬絲，便于傳播。如：桑樹有桑表白粉，桑里白粉。5 / 66白粉菌（閉殼菌）：菌絲以吸器吸收營養(yǎng)；子囊著生在閉囊殼內(nèi)，外部有附著絲；菌絲分化成分生孢子梗，頂端串生分生孢子，呈白粉狀故名白粉菌。D、病害癥狀：引起樹皮腐爛、潰瘍、瘤腫和枝枯；侵害果實引起腐爛和輪紋等癥狀。B、黑腐皮殼屬 （Valsa）子囊殼埋生子座基部，有長頸伸出子座；子囊孢子臘腸狀，單胞無色或暗色。C、囊孢殼屬（Physalospora）無子座。子囊圓柱形，有頂環(huán)。（4）腔菌①主要特點A、子囊著生在子座的空腔內(nèi)，子囊間無側(cè)絲，子囊具雙層壁 。為害植物主要是無性世代，在分生孢子盤上產(chǎn)生分生孢子。無性世代很發(fā)達，包括在葉點菌屬和莖點菌屬。無性世代包括許多屬，如葉點菌屬Phyllosticta，莖點菌屬 Phoma，尾孢屬 Cercospora。②子囊盤有些從菌核或假根菌核上長出，③盤菌一般很多不產(chǎn)生分生孢子。無性世代不發(fā)生。梨銹?。℅. haraeanum ）冬孢子階段在檜柏上，性孢子和銹孢子在梨樹上引起梨銹病。④多胞銹菌屬（Phragmidium ）冬孢子 3 至多細胞，壁厚，表面光滑或有瘤狀突起，柄的基部膨大。⑥柵銹菌屬（Melampsora）冬孢子單細胞，無柄，排列成整齊的一層；夏孢子表面有疣或刺。黑粉菌分類主要以冬孢子的形狀、大小、有無不孕細胞、萌發(fā)的方式及冬孢子球的形態(tài)等。層菌常產(chǎn)生有性孢子，很少產(chǎn)生無性孢子。（2）分生孢子座（sporodochium）：很短的分生孢子梗聚集而成，墊狀或瘤狀，其上產(chǎn)生分生孢子。頂部產(chǎn)生菌鍵型的分生節(jié)孢子(粉孢子)?！颤S萎輪枝孢(棉黃萎病菌 )引起棉花黃萎病〕。④葡萄孢屬(Botrytis )分生孢子梗無色，頂端細胞膨大成球形，上面有許多小梗；分生孢子單胞，無色，橢圓形，著生小梗上聚集成葡萄穗狀。 ⑥尾孢屬（Cercospora）分生孢子梗屈膝狀，青褐色至黑褐色，分生孢子多細胞，線形、鞭形至蠕蟲形。[大孢鏈格孢(A. macrospora )引起棉花輪紋斑病]。有的分生孢子盤四周或分生孢子梗之間具有黑色的剛毛。引起的病害如蘋果樹腐爛病、梨干腐病、蘋果及梨輪紋病、棉花褐斑病、芹菜斑枯病、茄子褐紋病等。因此，徒手制片技術(shù)也是植物病理學(xué)研究的重要手段之一。(一)整體封藏法 對于生長在植物病部表面或培基上的菌絲體、分生孢子、分生孢子梗和其他孢子器官以及線蟲等，可直接擇取少許封藏在適當(dāng)?shù)母≥d劑中，在顯微鏡下觀察，根據(jù)材料的特點和觀察的目的可采用不同的方法封藏制片。10 / 66 2 刮：對病部病原體稀少，或用放大鏡也難辯認霉層的病害標(biāo)本，可采用兩側(cè)具刀的三角刮針(或可用刀片代替)刮取病原物制片。 3 撥：對于產(chǎn)生在植物表皮下或半埋生于基物內(nèi)的病原體孢子器官。 在毛毛雨天自田間取回感染白粉病的麥苗(或在保溫箱中取接種染病的麥苗)。切片時先選取材料并作適當(dāng)?shù)男拚?，以左手的食指和姆指捏住材料，中指頂住材料下端，使材料上端突出于手指以?2—3 毫米。同時雙手不應(yīng)緊靠身體，而是要活動自如。實驗室中通常將通草、接骨木或向日葵的莖髓，剪成適當(dāng)大小，浸于 70%酒精中備用。三、作業(yè)和思考題 1 每人交兩片符合質(zhì)量要求的玻片標(biāo)本。1 馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基（PSA） 這是植病實驗室最常用的培養(yǎng)基(簡稱 PSA)，主要用于植物病原真菌的分離和培養(yǎng)，有時也用于植物病原細菌。2 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（NA） 這種培養(yǎng)基主要用于細菌的分離和培養(yǎng) 成分：牛肉浸膏 3 克 蛋白胨 10 克 蔗糖 10 克 酵母浸膏 1 克 瓊脂 20 克 加水至 1000 毫升 方法：先將瓊脂加熱熔化于大部水中，再將其它各成分用少量水化開加入，調(diào)節(jié) pH至 7，趁熱用雙層紗布過濾，分裝，塞棉塞高壓滅菌。調(diào)節(jié) pH 至中性的簡便方法是用石蕊示紙。A. 培養(yǎng)基的分裝 ，外部太松B. 棉塞的做法 ，外部太短松此外，4 各組均制備 15 管試管裝和 2 瓶三角瓶裝的無菌水。 (2)將包裝好的玻璃儀器擺入電熱烘箱中，彼此間留有一定的空隙以便流通空氣。 2 高壓蒸汽滅菌法 高壓蒸汽滅菌法又稱濕熱滅菌，它的原理是利用高壓來提高蒸汽的溫度，達到滅菌的目的，其操作步驟如下： (1)關(guān)好排水閥門放入清水至標(biāo)度為止，注意水量一定要加足，否則容易造成事故。 (4)壓力表的指針上升時，鍋內(nèi)溫度也逐漸升高，當(dāng)壓力表指針升至 15 磅時，蒸氣溫度相當(dāng)于 120℃—121℃(等于一個大氣壓)，此時開始計算滅菌時間，控制熱源，使處于 15磅壓力保持 30 分鐘，即能達到完全滅菌的目的，然后停止加溫。 (7)最后將高壓滅菌器內(nèi)的剩余水排出。然而，在自然情況下，病原菌通常是與其他雜菌混生在一起的，從受病組織或其他基物中將病原菌單獨分選出來，叫作分離。病、健交接處，除材料新鮮，污染的可能性小外，病原菌的生活力強、比較活躍，容易分離成功。 (1)葉斑病類病原菌的分離（玉米大斑病病菌的分離） 取玉米大斑病病葉，在病、健交界處剪取 2—3 毫米長的病組織。菌絲長出后轉(zhuǎn)至馬鈴薯瓊脂斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng) 34 天后，無菌條件下鏡檢是否獲得純培養(yǎng)。 分離時，在新的水爛斑邊緣挑取少量病組織在無菌水試管中配成菌懸液，取滅菌培養(yǎng)皿 3 付，標(biāo)好次序，其內(nèi)各置無菌水 1 毫升，用移置環(huán)移取菌懸液一環(huán)，放在第 1 皿水中混合均勻，從中挑取一環(huán)稀釋液至第 2 皿，再以同法稀釋成第 3 皿，取熔化后冷至 45℃左右的(一般將化好的培養(yǎng)基瓶靠近鼻尖，以不燙為度)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，每皿倒約 15 毫升，沿著桌面輕輕搖勻，凝固后倒置于 26—28℃的溫箱中培養(yǎng)，1—2 日后可見白色，圓形或近圓形直徑為 1—2 毫米的菌落，從中選典型菌落用移植環(huán)（劃線法）移入牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，每組轉(zhuǎn) 4—5 管，注意過早出現(xiàn)的大型菌落多為腐生細菌。17 / 66平板劃線操作示意圖三、實驗準(zhǔn)備 (一)清潔環(huán)境：分離工作嚴格說應(yīng)在無菌條下進行，無菌室或無菌箱是分離不可缺少的設(shè)施。 1 病組織材料 小麥根腐病黑胚粒 5