分子生物學(xué)要點(diǎn)-wenkub
2023-04-22 03:17:21 本頁面
【正文】 結(jié)構(gòu)；④絕大部分為單拷貝；⑤可表達(dá)基因約50%，大于真核生物小于病毒；⑥基因一般是連續(xù)的，無內(nèi)含子；⑦重復(fù)序列很少。4周期蛋白:是一類呈細(xì)胞周期特異性或時(shí)相性表達(dá)、累積與分解的蛋白質(zhì)，它與周期素依賴性激酶共同影響細(xì)胞周期的運(yùn)行。4 SD序列:轉(zhuǎn)錄出的mRNA要進(jìn)入核糖體上進(jìn)行翻譯，需要一段富含嘌呤的核苷酸序列與大腸桿菌16S rRNA3，末端富含嘧啶的序列互補(bǔ)，是核糖體的識(shí)別位點(diǎn)。4SSCP:單鏈構(gòu)象多態(tài)性檢測(cè)是一種基于DNA構(gòu)象差別來檢測(cè)點(diǎn)突變的方法。3反義RNA:堿基序列正好與有意義的mRNA互補(bǔ)的RNA稱為反義RNA。3基因診斷:以DNA或RNA為診斷材料，通過檢查基因的存在、結(jié)構(gòu)缺陷或表達(dá)異常，對(duì)人體的狀態(tài)和疾病作出診斷的方法和過程。3細(xì)胞癌基因:存在于正常的細(xì)胞基因組中，與病毒癌基因有同源序列，具有促進(jìn)正常細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化和發(fā)育等生理功能。3移碼突變:在編碼序列中，單個(gè)堿基、數(shù)個(gè)堿基的缺失或插入以及片段的缺失或插入等均可以使突變位點(diǎn)之后的三聯(lián)體密碼閱讀框發(fā)生改變，不能編碼原來的蛋白質(zhì)的突變。由于常用計(jì)算機(jī)硅芯片作為固相支持物，所以稱為DNA芯片。2原位PCR:以組織固定處理細(xì)胞內(nèi)的DNA或RNA作為靶序列，進(jìn)行PCR反應(yīng)的過程。2DNA復(fù)性:當(dāng)促使變性的因素解除后，兩條DNA鏈又可以通過堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合形成DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)。1感染:以噬菌體、粘性質(zhì)粒和真核細(xì)胞病毒為載體的重組DNA分子，在體外經(jīng)過包裝成具有感染能力的病毒或噬菌體顆粒，才能感染適當(dāng)?shù)募?xì)胞，并在細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)增。1 蛋白磷酸酶:是具有催化已經(jīng)磷酸化的蛋白質(zhì)分子發(fā)生去磷酸化反應(yīng)的一類酶分子，與蛋白激酶相對(duì)應(yīng)存在，共同構(gòu)成了磷酸化和去磷酸化這一重要的蛋白質(zhì)活性的開關(guān)系統(tǒng)。其中由細(xì)胞分泌的調(diào)節(jié)靶細(xì)胞生命活動(dòng)的化學(xué)物質(zhì)稱為細(xì)胞間信息分子；而在細(xì)胞內(nèi)傳遞信息調(diào)控信號(hào)的化學(xué)物質(zhì)稱為細(xì)胞內(nèi)信息分子。增強(qiáng)子:位于真核基因中遠(yuǎn)離轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)，能明顯增強(qiáng)啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄效率的特殊DNA序列。 順式作用元件:是指那些與結(jié)構(gòu)基因表達(dá)調(diào)控相關(guān)、能夠被基因調(diào)控蛋白特異性識(shí)別和結(jié)合的特異DNA序列?；蚪M:細(xì)胞或生物體的一套完整單倍體的遺傳物質(zhì)的總和。端粒:以線性染色體形式存在的真核基因組DNA末端都有一種特殊的結(jié)構(gòu)叫端粒。包括啟動(dòng)子、上游啟動(dòng)子元件、增強(qiáng)子、加尾信號(hào)和一些反應(yīng)元件等。它可位于被增強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄基因的上游或下游，也可相距靶基因較遠(yuǎn)。1 受體:是存在于靶細(xì)胞膜上或細(xì)胞內(nèi)能特異識(shí)別生物活性分子并與之結(jié)合，進(jìn)而發(fā)生生物學(xué)效應(yīng)的的特殊蛋白質(zhì)。1 基因工程:有目的的通過分子克隆技術(shù)，人為的操作改造基因，改變生物遺傳性狀的系列過程。1 轉(zhuǎn)導(dǎo):指以噬菌體為載體，在細(xì)菌之間轉(zhuǎn)移DNA的過程，有時(shí)也指在真核細(xì)胞之間通過逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)移和獲得細(xì)胞DNA的過程。2 退火:指將溫度降至引物的TM值左右或以下，引物與DNA摸板互補(bǔ)區(qū)域結(jié)合形成雜交鏈。2 定量PCR:基因表達(dá)涉及的轉(zhuǎn)錄水平的研究常需要對(duì)mRNA進(jìn)行定量測(cè)定，對(duì)此采用的PCR技術(shù)就叫定量PCR。2錯(cuò)義突變DNA分子中堿基對(duì)的取代，使得mRNA的某一密碼子發(fā)生變化，由它所編碼的氨基酸就變成另一種的氨基酸，使得多肽鏈中的氨基酸順序也相應(yīng)的發(fā)生改變的突變。3癌基因:是細(xì)胞內(nèi)控制細(xì)胞生長(zhǎng)的基因，具有潛在的誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的特性。在正常細(xì)胞內(nèi)未激活的細(xì)胞癌基因叫原癌基因，當(dāng)其受到某些條件激活時(shí)，結(jié)構(gòu)和表達(dá)發(fā)生異常，能使細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。3 RFLP:即限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性，個(gè)體之間DNA的核苷酸序列存在差異，稱為DNA多態(tài)性。可以作為一種調(diào)控特定基因表達(dá)的手段。相同長(zhǎng)度的單鏈DNA，如果堿基序列不同，形成的構(gòu)象就不同，這樣就形成了單鏈構(gòu)象多態(tài)性。4反義核酸技術(shù):是通過合成一種短鏈且與DNA或RNA互補(bǔ)的，以DNA或RNA為目標(biāo)抑制翻譯的反義分子，干擾目的基因的轉(zhuǎn)錄、剪接、轉(zhuǎn)運(yùn)、翻譯等過程的技術(shù)。4CAP:是大腸桿菌分解代謝物基因活化蛋白，這種蛋白可將葡萄糖饑餓信號(hào)傳遞個(gè)許多操縱子，使細(xì)菌在缺乏葡萄糖時(shí)可以利用其他碳源。真核基因組的特點(diǎn):① 真核生物基因組遠(yuǎn)大于原核生物基因組，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，基因數(shù)龐大，具有多個(gè)復(fù)制起點(diǎn)；②基因組DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合成染色體，儲(chǔ)存于細(xì)胞核內(nèi)；③真核基因?yàn)閱雾?反子，而細(xì)菌和病毒的結(jié)構(gòu)基因多為多順反子；④基因組中非編碼區(qū)多于編碼區(qū)；⑤真核基因多為不連續(xù)的斷裂基因，由外顯子和內(nèi)含子鑲嵌而成；⑥存在大量的重 復(fù)序列；⑦功能相關(guān)的基因構(gòu)成各種基因家族；⑧存在可移動(dòng)的遺傳因素；⑨體細(xì)胞為雙倍體，而精子和卵子為單倍體。 CAP的正性調(diào)節(jié):在啟動(dòng)子上游有CAP結(jié)合位點(diǎn)，當(dāng)大腸桿菌從以葡萄糖為碳源的環(huán)境轉(zhuǎn)變?yōu)橐匀樘菫樘荚吹沫h(huán)境時(shí)，cAMP濃度升高，與CAP結(jié)合，使 CAP發(fā)生變構(gòu)，CAP結(jié)合于乳糖操縱子啟動(dòng)序列附近的CAP結(jié)合位點(diǎn)，激活RNA聚合酶活性，促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合于操縱子后促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因的 轉(zhuǎn)錄，對(duì)乳糖操縱子實(shí)行正調(diào)控，加速合成分解乳糖的三種酶。轉(zhuǎn) 錄起始復(fù)合物的形成過程為:TFⅡD結(jié)合TATA盒；RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合TFⅡDDNA復(fù)合物形成一個(gè)閉合的復(fù)合物；其他轉(zhuǎn)錄因子與RNA聚合酶結(jié) 合形成一個(gè)開放復(fù)合物。⑵反式作用因子與順式作用元件的結(jié)合:反式作用因子被激活后，即可識(shí)別并結(jié)合上游啟動(dòng)子元件和增強(qiáng)子中的保守性序列，對(duì)基因轉(zhuǎn)錄起調(diào)節(jié)作用。Grb2是作為接頭蛋白結(jié)合到受體上。Raf是MAPK級(jí)聯(lián)反應(yīng)的第一個(gè)分子，由此啟動(dòng)了MAPK的三級(jí)激活過程。途徑: v受體活化G蛋白 v受體活化G蛋白vIP3 使鈣通道打開，細(xì)胞內(nèi)Ca2+升高 （九）、分子克隆中常用的工具酶及良好載體的條件？答:（1）、常用的工具酶限制性核酸內(nèi)切酶:是細(xì)菌產(chǎn)生的一類能識(shí)別和切割雙鏈DNA分子內(nèi)特定的堿基順序的核酸水解酶。末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶:將脫氧核糖核酸加到DNA的3末端。 （2）、良好載體的條件如果在 多克隆位點(diǎn)上插入外源DNA片段，將使lac Z基因滅活，不能生成半乳糖苷酶，結(jié)果菌落出現(xiàn)白色。在DNA聚合酶作用下通過三磷酸基團(tuán)摻入到延伸 的DNA鏈中，但由于沒有3’羥基，不能同后續(xù)的dNTP形成磷酸二酯鍵，因此，正在延伸的DNA鏈不能繼續(xù)延伸。雜交的雙方是待測(cè)核酸和已
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