【正文】 個(gè)復(fù)制起點(diǎn)；③具有操縱子結(jié)構(gòu)；④絕大部分為單拷貝；⑤可表達(dá)基因約50%，大于真核生物小于病毒；⑥基因一般是連續(xù)的，無內(nèi)含子；⑦重復(fù)序列很少。（二）、乳糖操縱子的作用機(jī)制？答:乳糖操縱子的組成:大腸桿菌乳糖操縱子含Z、Y、A三個(gè)結(jié)構(gòu)基因，分別編碼半乳糖苷酶、透酶和半乳糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶，此外還有一個(gè)操縱序列O，一個(gè)啟動(dòng)子P和一個(gè)調(diào)節(jié)基因I。所以，乳糖操縱子的這種調(diào)控機(jī)制為可誘導(dǎo)的負(fù)調(diào)控。協(xié)調(diào)調(diào)節(jié):乳糖操縱子中的I基因編碼的阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控與CAP的正調(diào)控兩種機(jī)制，互相協(xié)調(diào)、互相制約。 轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成:真核生物RNA聚合酶識(shí)別的是由通用轉(zhuǎn)錄因子與DNA形成的蛋白質(zhì)DNA復(fù)合物，只有當(dāng)一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到DNA上，形成有功能的啟動(dòng)子，才能被RNA聚合酶所識(shí)別并結(jié)合。在這個(gè)過程中，反式作用因子的作用是:促進(jìn)或抑制TFⅡD與TATA盒結(jié)合；促進(jìn)或抑制RNA聚合酶與TFⅡDDNA復(fù)合物的結(jié) 合；促進(jìn)或抑制轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成。轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控:⑴反式作用因子的活性調(diào)節(jié):①表達(dá)式調(diào)節(jié)——反式作用因子合成出來就具有活性；②共價(jià)修飾——磷酸化和去磷酸化，糖基化；③配體結(jié)合——許多激素受體是反式作用因子；④蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用——蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)復(fù)合物的解離與形成。⑶反式作用因子的作用方式——成環(huán)、扭曲、滑動(dòng)、Oozing。（四）、真核生物轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控機(jī)制？答:（1）、5，端加帽和3，端多聚腺苷酸化的調(diào)控意義:5，端加帽和3，端多聚腺苷酸化是保持mRNA穩(wěn)定的一個(gè)重要因素，它至少保證mRNA在轉(zhuǎn)錄過程中不被降解。 （2）、mRNA選擇性剪接對(duì)基因表達(dá)調(diào)控的作用 募集接頭蛋白Grb2:表皮生長(zhǎng)因子受體自身被磷酸化后，不僅其激酶活性增強(qiáng)，而且其構(gòu)象發(fā)生變化，從而適合與含SH2結(jié)構(gòu)域的蛋白分子相結(jié)合。 調(diào)控分子SOS的活化:SOS含有可與SH3結(jié)構(gòu)域相結(jié)合的富含脯氨酸基序，當(dāng)Grb2結(jié)合到磷酸化的表皮生長(zhǎng)因子受體后，它的兩個(gè)SH3結(jié)構(gòu)域即可結(jié)合SOS，使之活化?；罨腞as作用其下游分子Raf，使之活化。MAPK的級(jí)聯(lián)激活:Raf是一種MAPKKK，它作用于MEK，使之磷酸化而激活，活化的MEK在作用于MAPK家族的ERK1，使之磷酸化激活由此完成了三級(jí)激活。（七）、cAMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑？答:組成:胞外信息分子（主要是胰高血糖素、腎上腺素和促腎上腺皮質(zhì)激素），受體，G蛋白，AC，cAMP , PKA。 v信號(hào)分子與受體結(jié)合，引起受體構(gòu)象變化 活化后的G蛋白激活腺苷酸環(huán)化酶（AC） vAC催化ATP生成cAMP cAMP活化PKA，PKA使目標(biāo)蛋白磷酸化，調(diào)節(jié)代謝酶的活性或調(diào)節(jié)基因的表達(dá)v（八）、IP3Ca2+信號(hào)途徑: Ca2+與CaM結(jié)合，激活Ca2+CaM依賴的蛋白激酶v Ca2+CaM依賴的蛋白激酶使目標(biāo)蛋白磷酸化。DNA連接酶:將兩段DNA分子拼接起來的酶。逆轉(zhuǎn)錄酶:依賴于RNA的DNA聚合酶，這是一種有效的轉(zhuǎn)錄RNA成為DNA的酶，產(chǎn)物DNA又稱互補(bǔ)DNA。堿性磷酸酶:催化去除DNA、RNA等的5磷酸基團(tuán)。 必須有自身的復(fù)制子；載體分子上必須有限制性核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)，即多克隆位點(diǎn)，以供外源DNA插入；載體應(yīng)具有可供選擇的遺傳標(biāo)志，以區(qū) 別陽(yáng)性重組子和陰性重組子；載體分子必須有足夠的容量；可通過特定的方法導(dǎo)入細(xì)胞；對(duì)于表達(dá)載體還應(yīng)具備與宿主細(xì)胞相適應(yīng)的啟動(dòng)子、前導(dǎo)順 序、增強(qiáng)子、加尾信號(hào)等DNA調(diào)控元件。這些位點(diǎn)上如果沒有克隆外源性DNA片段，在質(zhì)粒被導(dǎo)入lac的大腸桿菌后，質(zhì)粒攜帶的半 乳糖苷酶基因?qū)⒄１磉_(dá)，與大腸桿菌的半乳糖苷酶基因互補(bǔ)，產(chǎn)生有活性的半乳糖苷酶，加入人工底物Xgal和誘導(dǎo)劑IPTG后，出現(xiàn)藍(lán)色的菌落。由于這種顏色標(biāo)志，重組克隆和非重組克隆的區(qū)分一目了然。2’,3’ddNTP與普通dNTP不同，它們?cè)诿撗鹾颂堑?’位置缺少一個(gè)羥基。在DNA合成反應(yīng)混合物的4種普通 dNTP中加入少量的一種ddNTP，鏈延伸將與偶然發(fā)生但卻十分特異的鏈終止競(jìng)爭(zhēng)，產(chǎn)物是一系列的核苷酸鏈，其長(zhǎng)度取決于引物末端到出現(xiàn)過早鏈終止位置 間的距離。（十二）、核酸分子雜交的原理？答:具有互補(bǔ)序列的兩條單鏈核酸分子在一定的條件下（適宜的溫度及離子強(qiáng)度等）堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，重新形成雙鏈；在這一過程中，核酸分子經(jīng)歷了變性和復(fù)性的變化，以及在復(fù)性過程中個(gè)分子間鍵的形成和斷裂。（十三）、影響雜交的因素？答:核酸分子的濃度和長(zhǎng)度:核酸濃度越大，復(fù)性速度越快。高濃度的鹽使堿基錯(cuò)配的雜交體更穩(wěn)定，所以進(jìn)行序列不完全同源的核酸分子雜交時(shí)必須維持雜交反應(yīng)液中的鹽濃度和洗膜液中的鹽濃度。 雜交液中的甲酰胺:甲酰胺能降低核酸雜交的TM值。兩個(gè)不同基因組DNA變性后的相對(duì)雜交速率取決于樣品濃度絕對(duì)一致時(shí)的相對(duì)復(fù)雜性（即DNA中的堿基數(shù)）。 非特異性雜交反應(yīng):在雜交前應(yīng)對(duì)非特異性雜交反應(yīng)位點(diǎn)進(jìn)行封閉，以減少其對(duì)探針的非特異性吸附作用。提取質(zhì)粒后分離純化作為探針使用?；蚪M探針:從基因組文庫(kù)里篩選得到一個(gè)特定的基因或基因片段的克隆后，大量擴(kuò)增、純化，切取插入片段，分離純化為探針。RNA探針:采用基因克隆和體外轉(zhuǎn)錄的方法可以得到RNA或反義RNA作為探針。切口處產(chǎn)生一個(gè)5末端和3末端，3末端就可以作為引物，在大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的催化下，以互補(bǔ)的DNA 單鏈為摸板，依次將dNTP連接到切口的3末端的羥基上，合成新的DNA單鏈；同時(shí)DNA聚合酶Ⅰ的5→3的核酸外切酶活性在切口處將舊鏈從5末端逐步切 除，新合成鏈不斷延伸，從而使原DNA分子上的部分核苷酸殘基被標(biāo)記的核苷酸所取代。對(duì)于任何一個(gè)用作探針的DNA片段，隨機(jī)引物混合物中都會(huì)有一些六核苷酸片段可以與之結(jié)合，起到DNA合成引物的作用。PCR標(biāo)記法:在PCR反應(yīng)底物中，將一種dNTP換成標(biāo)記物標(biāo)記的dNTP， 這樣標(biāo)記的dNTP就在PCR反應(yīng)的同時(shí)摻入到新合成的DNA鏈上。（十六）、PCR的基本原理？答PCR 是在試管中進(jìn)行的DNA復(fù)制反應(yīng)，基本原理是依據(jù)細(xì)胞內(nèi)DNA半保留復(fù)制的機(jī)理，以及體外DNA分子于不同溫度下雙鏈和單鏈可以互相轉(zhuǎn)變的性質(zhì)，人為地控 制體外合成系統(tǒng)的溫度，以促使雙鏈DNA變成單鏈，單鏈DNA與人工合成的引物退