【正文】 發(fā)改變導(dǎo)致DNA損傷：如互變異構(gòu)移位、脫氨基、堿基丟失。 1）真核生物基因組遠(yuǎn)大于原核生物基因組，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，基因數(shù)龐大，有多個(gè)復(fù)制起點(diǎn)； 2）由染色體DNA和線粒體DNA組成； 3）非編碼序列多于編碼序列，編碼序列僅占3％左右； 4）存在大量重復(fù)序列； 5）結(jié)構(gòu)基因多為斷裂基因，有內(nèi)含子和外顯子組成； 6）轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順?lè)醋樱?7）存在多基因家族和假基因； 8）體細(xì)胞為雙倍體，而精子和卵子為單倍體。 70. 基因治療：一般是指將限定的遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)入患者特定的靶細(xì)胞，以最終達(dá)到預(yù)防或改變特殊疾病狀態(tài)為目的的治療方法。 68. 粘粒（cosmid）：是由大部分質(zhì)粒序列包括復(fù)制原點(diǎn)、抗性標(biāo)記等和噬菌體的cos粘端序列構(gòu)建而成，可攜帶較長(zhǎng)的DNA插入片段（40～50kb）。受體可分為膜受體和細(xì)胞內(nèi)受體，其作用特點(diǎn)是：高度特異性，高親和力，可飽和性，可逆性，放大效應(yīng) 66. G蛋白：即鳥(niǎo)苷酸結(jié)合蛋白，是由α、β、γ三個(gè)亞基構(gòu)成的異源三聚體，另一類G蛋白為小分子單體G蛋白。 64. 信息分子：攜帶生物信號(hào)，在細(xì)胞之間進(jìn)行傳遞的小分子化學(xué)物質(zhì)。 60. DNA芯片技術(shù)：在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接將大量DNA探針以顯微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后與標(biāo)記的樣品雜交，通過(guò)對(duì)雜交信號(hào)的檢測(cè)分析，即可得出樣品的遺傳信息（基因序列及表達(dá)的信息）的技術(shù)，常用計(jì)算機(jī)硅芯片作為固相支持物。 57. 基因診斷：以DNA和RNA為診斷材料，利用現(xiàn)代分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)的技術(shù)和方法，直接監(jiān)測(cè)基因結(jié)構(gòu)及其表達(dá)水平是否正常，從而對(duì)疾病作出診斷的方法。 54. 核酶：是一種可以催化RNA切割和RNA剪接反應(yīng)的由RNA組成的酶。 52. 蛋白磷酸酶：具有催化已經(jīng)磷酸化蛋白發(fā)生去磷酸化反應(yīng)的一類酶分子，與蛋白激酶相對(duì)應(yīng)存在，共同構(gòu)成磷酸化與去磷酸化這一重要的蛋白質(zhì)活性的開(kāi)關(guān)系統(tǒng)。 48. 亮氨酸拉鏈（leucine zipper）：有些反式作用因子結(jié)合DNA結(jié)構(gòu)域中有一段約30個(gè)氨基酸組成的核心序列，每個(gè)6個(gè)氨基酸殘基有規(guī)律的出現(xiàn)1個(gè)亮氨酸殘基，能夠形成兩性α螺旋，一端為富含堿性氨基酸的親水的堿性區(qū)域，一端為成行亮氨酸構(gòu)成的疏水區(qū)（亮氨酸拉鏈區(qū)），兩個(gè)具有亮氨酸拉鏈區(qū)的單體以疏水力相互作用就形成了亮氨酸拉鏈。） 46. 順式作用元件（cisacting element）：是指那些與結(jié)構(gòu)基因串聯(lián)在一起，與結(jié)構(gòu)基因表達(dá)調(diào)控相關(guān)，能夠被基因調(diào)控蛋白特異識(shí)別和結(jié)合的DNA序列。 44. 端粒（telomere）：是位于真核生物染色體末端的，由DNA和蛋白質(zhì)組成的一膨出結(jié)構(gòu)。 41. 感染：以噬菌體、粘粒和真核細(xì)胞病毒為載體的重組DNA分子，在體外包裝成具有感染能力的病毒或噬菌體顆粒，進(jìn)而感染適當(dāng)細(xì)胞并在其內(nèi)擴(kuò)增的過(guò)程。CDKI分為CIP/KIP家族和INK家族。 36. 周期蛋白依賴性蛋白激酶（CDK）：是一類可以與周期蛋白結(jié)合，并將周期蛋白作為其調(diào)節(jié)亞單位，進(jìn)而表現(xiàn)出蛋白激酶活性的蛋白質(zhì)。 33. 抑癌基因：存在于正常細(xì)胞內(nèi)的一大類抑制細(xì)胞生長(zhǎng)并具有潛在抑癌作用的基因。在正常細(xì)胞內(nèi)未激活的癌基因叫原癌基因，當(dāng)其受到某些條件激活時(shí)，結(jié)構(gòu)和表達(dá)發(fā)生異常，能使細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。 30. 癌基因：是細(xì)胞內(nèi)控制細(xì)胞生長(zhǎng)的基因，具有潛在的誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的特性。該序列能與核糖體30s小亞基中16s rRNA 3’端 2 分子生物學(xué)考試寶典（私房版） 富含…UCCU…序列互補(bǔ)，是核糖體特異識(shí)別和結(jié)合的部位。其兩端側(cè)翼序列是兩個(gè)反向重復(fù)序列（IS）。 22. 衰減子（attenuator）：位于一些操縱子中第一個(gè)結(jié)構(gòu)基因之前的一段能夠減弱轉(zhuǎn)錄作用的DNA序列。 19. 操縱元件：是一段能夠被不同基因表達(dá)調(diào)控蛋白識(shí)別和結(jié)合的DNA序列，是決定基因表達(dá)效率的關(guān)鍵元件。 16. 功能基因組學(xué)：研究基因組中的所有基因功能的學(xué)科，是從基因整體水平上對(duì)基因的活動(dòng)規(guī)律進(jìn)行探討。 12. 分子克?。涸隗w外對(duì)DNA分子按照既定目的和方案進(jìn)行人工重組，將重組分子導(dǎo)入宿主，使其在宿主中擴(kuò)增和繁殖，以獲得該DNA分子的大量拷貝。 10. 反向重復(fù)序列：是指兩個(gè)順序相同的拷貝在DNA鏈上呈反向排列。 8. 微衛(wèi)星DNA：又稱為短串聯(lián)重復(fù)（STR），是一類更為簡(jiǎn)單的寡核苷酸串聯(lián)重復(fù)序列，其重復(fù)單位為2～6bp，重復(fù)次數(shù)10～60次左右，其總長(zhǎng)度通常小于150bp，分布在所有的染色體。 6. 非編碼區(qū)（UTR）：是位于開(kāi)放閱讀框的5’端上游和3’端下游的沒(méi)有編碼功能的核苷酸序列。 2. 基因組：細(xì)胞或生物體內(nèi)一套完整單倍體的遺傳物質(zhì)的總和。 3. 結(jié)構(gòu)基因：基因中編碼RNA或蛋白質(zhì)的DNA序列，包括模板鏈和編碼鏈。其主要功能是參與翻譯起始調(diào)控，是翻譯的必需序列。微衛(wèi)星DNA因?yàn)橹貜?fù)單位的重復(fù)次數(shù)不同而具有高度的遺傳多態(tài)性，并且按照孟德?tīng)栠z傳規(guī)律，可以作為很好的遺傳標(biāo)記。兩個(gè)反向序列間可以有間隔序列，也可以串聯(lián)在一起（回文結(jié)構(gòu)）。 13. 基因工程：有目的地通過(guò)分子克隆技術(shù)，利用克隆基因表達(dá)、制備特定的蛋白質(zhì)或多肽產(chǎn)物，或定向改造基因結(jié)構(gòu)的系列過(guò)程。研究?jī)?nèi)容包括：基因組的表達(dá)，蛋白質(zhì)產(chǎn)物的功能，基因組多樣性的研究，基因組功能注釋。 20. 啟動(dòng)子：是RNA聚合酶特異識(shí)別和結(jié)合并啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的DNA序列。 23. CAP：是大腸桿菌分解代謝物基因活化蛋白?？稍诩?xì)菌染色體、質(zhì)粒和噬菌體基因組之間轉(zhuǎn)移，是細(xì)菌耐藥基因播散的機(jī)制。 27. 管家基因：在生物體生命全過(guò)程都是必須的，且在一個(gè)生物個(gè)體幾乎所有細(xì)胞都持續(xù)表達(dá)的基因。當(dāng)癌基因結(jié)構(gòu)或表達(dá)發(fā)生異常時(shí)，其產(chǎn)物可以使細(xì)胞無(wú)限制增殖，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。特點(diǎn)：1）存在廣泛；2）高度保守；3）原癌基因是必需基因，產(chǎn)物有重要功能；4）在某些因素作用下可發(fā)生突變，成為癌基因。當(dāng)這類基因發(fā)生突變、缺失或失活時(shí)，可以引起細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。 37. 周期蛋白依賴性蛋白激酶抑制蛋白（CDKI）：是對(duì)CDK激酶起負(fù)性調(diào)控作用的蛋白質(zhì)。 38. 轉(zhuǎn)化（transformation）：質(zhì)粒DNA或以它為載體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入細(xì)菌的過(guò)程。 42. DNA變性：在理化因素作用下DNA分子由穩(wěn)定的雙螺旋結(jié)構(gòu)松解為無(wú)規(guī)則線性結(jié)構(gòu)的現(xiàn)象。端粒DNA由短的高度重復(fù)序列組成，重復(fù)序列在DNA復(fù)制過(guò)程中正常復(fù)制，部分由端粒酶延伸。包括：?jiǎn)?dòng)子、上游啟動(dòng)元件、增強(qiáng)子、加尾信號(hào)和一些反應(yīng)元件等。 49. 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物：是指基因組中整合有人工導(dǎo)入的外源基因、外源基因能夠表達(dá)并按孟德?tīng)柖蛇z傳的一類動(dòng)物。對(duì)蛋白質(zhì)激酶所引起的變化產(chǎn)生衰減信號(hào)?？梢宰鳛榛虮磉_(dá)和病毒復(fù)制的抑制劑。 58. 核酸分子雜交：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下按堿基互補(bǔ)原則退火形成雙鏈。 61. PCR/單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析（SSCP）：PCR產(chǎn)物變性后，經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳，正常基因和變異基因的由于構(gòu)象的不同因而遷移位置不同，借此可分析確定致病基因的存在，常用于點(diǎn)突變的檢測(cè)。又稱為第一信使。G蛋白具有結(jié)合GDP或GTP的能力，并有催化GTP成GDP的活性，廣泛存在各種組織細(xì)胞膜上，在受體和效應(yīng)蛋白間起傳遞信息的作用。粘?？梢韵袷删w一樣被包裝成λ粒子。 6 分子生物學(xué)考試寶典（私房版） 問(wèn)答題 一、病毒、原核、真核基因組的特點(diǎn) 1）病毒基因組較小，是單倍體； 2）形式多樣：病毒基因組有的是DNA，有的是RNA，但只含一種核酸。 7 分子生物學(xué)考試寶典（私房版） 二、DNA損傷因素及機(jī)制 1）形成胸腺嘧啶二聚體，影響雙螺旋結(jié)構(gòu)，使復(fù)制和轉(zhuǎn)錄受阻； 2）引起DNA間交聯(lián)，DNA與蛋白質(zhì)交聯(lián)，甚至DNA鏈斷裂。 ：如吖啶類化合物的插入，生物氧化的自由基與DNA發(fā)生加成和小自由基反應(yīng)等。包括同源重組和非同源重組。 1）錯(cuò)義突變：因?yàn)镈NA分子中堿基的取代，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄翻譯后蛋白質(zhì)氨基酸組成和排列順序發(fā)生改變。如果插入或缺失核苷酸是3的整數(shù)倍，合成多肽鏈就會(huì)增加或減少一個(gè)或數(shù)個(gè)氨基酸。 六、乳糖操縱子的作用機(jī)制 乳糖操縱子（lac operon）含Z、Y、A三個(gè)結(jié)構(gòu)基因，分別編碼β半乳糖苷酶、透酶、乙?；D(zhuǎn)移酶。 在乳糖存在時(shí)，乳糖經(jīng)透酶作用進(jìn)入細(xì)胞，在由β半乳糖苷酶催化生成半乳糖。 七、色氨酸操縱子的作用機(jī)制 色氨酸操縱子（trp operon）是一種阻遏型操縱子，含E、D、C、B、A五個(gè)結(jié)構(gòu)基因，編碼色氨酸合成相關(guān)酶。衰減子位于結(jié)構(gòu)基因E和操縱元件之間的L基因中。由于細(xì)菌轉(zhuǎn)錄翻譯偶聯(lián)，當(dāng)細(xì)胞中有色氨酸時(shí)可以形成色氨酰tRNA，核糖體可迅速通過(guò)相鄰兩個(gè)色氨酸位點(diǎn)，封閉片段2，致使片段4 10 分子生物學(xué)考試寶典（私房版） 形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，終止轉(zhuǎn)錄。具有鋅指結(jié)構(gòu)的反式作用因子都含有幾個(gè)相同的鋅指結(jié)構(gòu)，每個(gè)指結(jié)構(gòu)的指尖部分可以進(jìn)入DNA雙螺旋的大溝或小溝。緊靠螺旋區(qū)N端有一段富含堿性氨基酸的序列可與DNA結(jié)合。 ：真核生物RNA聚合酶識(shí)別的是由通用轉(zhuǎn)錄因子與DNA形成的蛋白質(zhì)DNA復(fù)合物，只有當(dāng)一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到DNA上，形成有功能的啟動(dòng)子，才能被RNA聚合酶所識(shí)別并結(jié)合。 ： 1）反式作用因子活性的調(diào)節(jié)：①表達(dá)調(diào)節(jié)－合成出來(lái)就有活性；②共價(jià)修飾－磷酸化、去磷酸化、糖基化；③配體結(jié)合－許多激素受體是反式作用因子；④蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用－復(fù)合物的解離與形成。 十、真核生物轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控機(jī)制 ’端加帽和3’端多聚腺苷酸化：是保持mRNA轉(zhuǎn)錄過(guò)程穩(wěn)定，不被降解的重要因素。 ：高度特異性、高親和力、可飽和性、可逆性、放大效應(yīng)。主要與細(xì)胞增殖、分裂、分化及癌變有關(guān)。 同時(shí)，α亞基水解GTP為GDP，然后α亞基GDP復(fù)合物重新與βγ亞基結(jié)合形成無(wú)活性的三聚體，完成一次信息傳導(dǎo)。 3）在Mg2+存在下，GTP取代GDP使α亞基暴露與AC結(jié)合位點(diǎn)，結(jié)合并激活A(yù)C。 當(dāng)生長(zhǎng)激素抑制素等與相應(yīng)受體結(jié)合可結(jié)合偶聯(lián)αiG蛋白，αi亞基可直接抑制AC活性，同時(shí)游離的βγ亞基可與αs亞基結(jié)合抑制對(duì)AC的活化作用，使AC活性下降。 4）活化的Ras進(jìn)而活化Raf，Raf是一種MAPKKK,可逐步激活MEK（MAPKK）→ERK1（MAPK），完成MAPK的級(jí)聯(lián)活化； 5）活化的ERK1轉(zhuǎn)位至核內(nèi)，作用于一些轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，影響基因的表達(dá)。 十六、細(xì)胞周期的調(diào)控 細(xì)胞周期的調(diào)控主要是多蛋白參與的，針對(duì)細(xì)胞周期四個(gè)主要關(guān)卡的調(diào)控過(guò)程。細(xì)胞受到生長(zhǎng)因子刺激→在G1中期表達(dá)cyclin D，G1晚期期表達(dá)cyclin E分別與Cdk4/6 和Cdk2形成復(fù)合物→復(fù)合物使Rb蛋白磷酸化而釋放轉(zhuǎn)錄因子E2F靶基因表達(dá)，不再依賴生長(zhǎng)因子→通過(guò)限制點(diǎn)。P53可通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞周期抑制物p21蛋白的表達(dá)，阻止受損細(xì)胞通過(guò)G1S關(guān)卡。 ①G1后期開(kāi)始表達(dá)cyclin B，cyclin B與Cdk1結(jié)合，在G2M轉(zhuǎn)折處，Cdk1被磷酸酶Cdc25C 去磷酸化而活化cyclinBCdk1,導(dǎo)致底物蛋白（組蛋白核纖層蛋白等）的磷酸化，細(xì)胞通過(guò)G2M關(guān)卡。M期的cyclinA/BCdk1可使結(jié)合在紡錘體處的APC磷酸化而活化，最終導(dǎo)致連接染色體的蛋白質(zhì)降解。在G1中期及晚期，Cyclin DCdk4/6和Cyclin ECdk2先后磷酸化RB。 : p53蛋白是核內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子，其一個(gè)重要的靶基因編碼p21蛋白。P53通過(guò)上述兩種途徑使細(xì)胞周期停滯，起著穩(wěn)定基因組和抑制突變細(xì)胞產(chǎn)生的作用，從而抑制腫瘤的發(fā)生。 （線粒體釋放細(xì)胞色素C的3種模式：①Bax和Bak在線粒體