【正文】 體可以激活JALSTAT系統(tǒng)，后者將干擾素刺激信號(hào)傳入核內(nèi)。34 表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑EGFR——Ras——MAPK（1）A亞基結(jié)合了GTP后即與BR亞基發(fā)生解離，成為活化狀態(tài)的A亞基。 具體表現(xiàn)為各自的逐級(jí)磷酸化，MAPK被激活以后，可轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核內(nèi)。27 細(xì)胞通訊方式：（1）細(xì)胞間隙連接（2）膜表面分子接觸通訊（3）化學(xué)信號(hào)通訊。（3）對(duì)基因表達(dá)有正性和負(fù)性調(diào)控作用，即渡海和阻遏基因的表達(dá)。當(dāng)葡萄糖耗盡時(shí)，細(xì)胞內(nèi)cAMP水平升高，即可通過CAP調(diào)控其它操縱子的表達(dá)。21 核糖體在蛋白質(zhì)生物合成中的作用：（1）容納mRNA的通道，（2）能夠結(jié)合起始因子，延長(zhǎng)因子及終止因子等參與蛋白質(zhì)生物合成的因子；（3）具有結(jié)合氨酰tRNA的部位（A位或P位）；（4）具有轉(zhuǎn)達(dá)肽酶活性，催化肽鍵形成；（5）大亞基上具有延長(zhǎng)因子依賴的GTP酶活性，它可能為肽提供能量。１７　大腸桿菌的一種需糖基化酶的切除修復(fù)過程：（１）ＤＮＡ糖基化酶識(shí)別受損的或錯(cuò)誤的堿基，水解糖苷鍵，釋出游離堿基，在ＤＮＡ單鏈上形成無嘌呤或嘧啶的空位，稱為ＡＰ部位；（２）特異的ＡＰ內(nèi)切核酸酶在ＡＰ部位切開磷酸二酯鍵，再由外切核酸酶切下ＡＰ部位的核苷酸；（３）ＤＮＡ聚合酶Ｉ修補(bǔ)缺口；（４）ＤＮＡ連接酶封口，完成修復(fù)過程。14 DＮＡ的損傷方式：（１）轉(zhuǎn)換：由一種嘧啶變成另一種嘧啶，或種嘌呤變成另一種嘌呤；（２）顛換：嘧呤與嘌呤互換。（6）真核基因是斷裂基因，（7）功能相關(guān)的基因構(gòu)成各種基因家族，它們可串聯(lián)在一起，亦可相距很遠(yuǎn)，但即使串聯(lián)在一起的成簇的基因也是分別轉(zhuǎn)錄的。（2）真核基因組遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于原核生物的基因組，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，基因數(shù)龐大。（10）在DNA分子中具有多種功能的識(shí)別區(qū)域。（5）基因是連續(xù)的，無內(nèi)含子，因此轉(zhuǎn)錄后不需要剪切。10 原核生物基因組的結(jié)構(gòu)的功能特點(diǎn)：（1）基因組通常僅由一條環(huán)狀雙鏈DNA分子組成。7 反義RNA及其功能：堿基序列正好 與有意義mRNA互補(bǔ)的RNA稱為反意義或反義RNA，又稱調(diào)節(jié)RNA，這類RNA是單鏈RNA，可與mRNA配對(duì)結(jié)合形成雙鏈，最終抑制mRNA作為模板進(jìn)行翻譯。（5）分子中約半數(shù)的堿基通過鏈內(nèi)堿基配對(duì)互相結(jié)合，開成雙螺旋，從而構(gòu)成其二級(jí)結(jié)構(gòu)，開頭類似三葉草。4 tRNA的共同特征：（?。﹩捂溞》肿?，含7393個(gè)核苷酸。（2）5端無帽子結(jié)構(gòu)，3端一般無多聚A尾巴。問答題：1 衰老與基因的結(jié)構(gòu)與功能的變化有關(guān)，涉及到：（1）生長(zhǎng)停滯；（2）端?？s短現(xiàn)象；（3）DNA損傷的累積與修復(fù)能力減退；（4）基因調(diào)控能力減退。（3）一般沒有修飾堿基，即這類mRNA分子鏈完全不被修飾。（2）含有很多稀有堿基或修飾堿基。（6）三級(jí)結(jié)構(gòu)是倒L型。這是其主要調(diào)控功能，還可作為DNA復(fù)制的抑制因子，與引物RNA互補(bǔ)結(jié)合抑制DNA的復(fù)制，以及在轉(zhuǎn)錄水平上與mRNA5末端互補(bǔ)，阻止RNA合成轉(zhuǎn)錄。（2）基因組中只有1個(gè)復(fù)制起點(diǎn)。（6）編碼區(qū)在基因組中所占的比例（約占50%）遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于真核基因組，但又遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于病毒基因組。11（3）都由一個(gè)結(jié)構(gòu)基因與相關(guān)的調(diào)控區(qū)組成，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子。（8）真核生物基因組中也存在一些可移動(dòng)的遺傳因素，這些DNA順序并無明顯生物學(xué)功能，似乎為自己的目的而組織，故有自私DNA之稱。轉(zhuǎn)換和顛換只引起ＤＮＡ局部的改變，而ＤＮＡ其它部分的結(jié)構(gòu)不受影響，故稱為點(diǎn)突變。１８逆轉(zhuǎn)錄酶功能：（１）具有ＲＮＡ指導(dǎo)的ＤＮＡ聚合酶活性，能和其它ＤＮＡ聚合酶一樣沿５－３方向合成ＤＮＡ，并需要引物提供３－ＯＨ；（２）具有ＲＮＡ酶Ｈ活性，能特異性水解ＲＮＡ－ＤＮＡ雜交體上的ＲＮＡ；（３）具有ＤＮＡ指導(dǎo)的ＤＮＡ聚合酶活性，以逆轉(zhuǎn)錄合成的單鏈ＤＮＡ為模板合成互補(bǔ)ＤＮＡ鏈。22 嚴(yán)謹(jǐn)反應(yīng)機(jī)制：在氨基酸缺乏時(shí)，游離核糖體與空載的tRNA增加，在ATP存在下，產(chǎn)生pppGpp（鳥苷5磷酸）和ppGpp(鳥苷4磷酸)。23真核生物基因表達(dá)在DNA水平的調(diào)控方式：（1）染色質(zhì)丟失（2）基因擴(kuò)增（3）基因重排（4）DNA甲基化（5）染色質(zhì)結(jié)構(gòu)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控作用。25反式作用因子的激活方式及作用方式：激活方式（1）表達(dá)式調(diào)節(jié)；（2）共價(jià)修飾；（3）配體結(jié)合（4）蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用。28 受體發(fā)揮其識(shí)別和信號(hào)轉(zhuǎn)換作用時(shí)特點(diǎn) ：（1）高度特異性（2）高親和力（3）可飽合性（4）可逆性。在核內(nèi)，它可使一些轉(zhuǎn)錄因子發(fā)生磷酸化，從而改變細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)的狀態(tài)。小分子信使?jié)舛然蚍植甲兓庠葱盘?hào)—受體—大分子信使 化學(xué)修飾配體與受體結(jié)合；（2）受體激活G蛋白（3）G蛋白激活或抑抑細(xì)胞中的效應(yīng)分子；（4）效應(yīng)分子改變細(xì)胞內(nèi)小分子信使的含量與分布；（5）細(xì)胞內(nèi)小分子信使作用于相應(yīng)的靶分子，使之構(gòu)象改變，從而改變細(xì)胞的代謝過程及基因表達(dá)等功能?；罨说腁亞基此時(shí)可以作用于下游的各種效應(yīng)分子。JAK為一種存在于胞漿中的蛋白酪氨酸激酶，它活化后可使干擾素受體磷酸化。（4）DNA序列分析。廣泛用于mRNA為模板合成cDNA，構(gòu)建cDNA文庫。（6）TaqDNA聚合酶和其它耐熱DNA聚合酶。40 M31噬菌體的優(yōu)點(diǎn)：（1）噬菌體顆粒中所含有的是單鏈DNA，該單鏈DNA可作為模板用于DNA序列分析；（2）利用單鏈M13克隆可制備成單鏈DNA探針用于雜交分析，檢測(cè)DNA或RNA，或者作為基因定點(diǎn)誘變的載體。過程：（1）制備目的基因和相關(guān)載體（2）將目的基因和有關(guān)載體進(jìn)行連接（3）將重組的DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞（4）DNA重組體的篩選和鑒定（5）DNA重組體的擴(kuò)增、表達(dá)和其它研究。44 目的基因的篩選與鑒定：首先篩選出轉(zhuǎn)化菌；然后篩選出帶有重組體的克??；最后是對(duì)DNA重組體進(jìn)行鑒定。（3）所用表達(dá)載體必須是大腸桿菌表達(dá)載體。48 雙脫氧鏈終止法基本原理：和模板互補(bǔ)結(jié)合的引物在DNA聚合酶作用下發(fā)生互補(bǔ)鏈的延伸反應(yīng)，反應(yīng)體系中的2，3雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）與底物脫氧核苷三磷酸競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合于延伸互補(bǔ)鏈末端，造成延伸終止。MaxamGilbert法基本原理：采用化學(xué)試劑處理末端放射標(biāo)記的DNＡ單鏈片段，造成堿基特異性切割，由此產(chǎn)生一組具不同長(zhǎng)度的ＤＮＡ鏈的反應(yīng)混合物，經(jīng)凝膠電泳按分子大小分離和放射自顯影，直接讀出待測(cè)ＤＮＡ的核苷酸順序。但在更高溫度情況下，雙鏈分子逐漸趨向解鏈，當(dāng)溫度達(dá)到Ｔm－５度時(shí)雜交率即非常低。靶核酸：Ｎ所檢測(cè)的靶核酸是ＲＮＡ，Ｓ是ＤＮＡ（２）ＲＮＡ電泳：ＲＮＡ樣品依其分子量大小在變性膠中進(jìn)行分離，凝膠中需加入變性劑，防止ＲＮＡ分子形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，維持其單鏈線性狀態(tài)。標(biāo)記物：（１）核素標(biāo)記物（２）非核素標(biāo)記物：半抗原、配體、熒光素、化學(xué)發(fā)光探針。切口處產(chǎn)生一個(gè)５末端和一個(gè)３末端，３末端即可作為引物，在大腸桿菌ＤＮＡ聚合酶Ｉ的５－３ＤＮＡ聚合酶活性的催化下，以互補(bǔ)的ＤＮＡ單鏈為模板，依次將dNTP連接到切口的３端羥基上，合成新的ＤＮＡ單鏈；同時(shí)ＤＮＡ聚合酶Ｉ的５－３核酸外切酶活性在切口處將舊鏈人５末端逐步切除，新合成鏈不斷延伸，從而使原ＤＮＡ分子上的部分核苷酸殘基被標(biāo)記的核苷酸所取代。５９?。校茫乙镌O(shè)計(jì)的基本要求：（１）引物長(zhǎng)度一般為１５－３０個(gè)核苷酸。（５）引物與非特異擴(kuò)增區(qū)的序列的同源性不要超過７０％，引物３末端連續(xù)８?jìng)€(gè)堿基在待擴(kuò)增區(qū)以外不能有完全互補(bǔ)序列，否則易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增（６）引物３端堿基是引發(fā)延伸的起點(diǎn)，因此一定要與模板ＤＮＡ配對(duì)（７）引物與模板結(jié)合時(shí)，引物的５端最多可以游離十幾個(gè)堿基而不影響ＰＣＲ反應(yīng)的進(jìn)行。基本原理：將目的基因（或基因組片段）用顯微注射等方法注入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的受精卵或著床前的胚胎細(xì)胞中，使目的基因整合到基因組中，然后將此受精卵或著床前的胚胎細(xì)胞再植入受體動(dòng)物園的輸卵管（或子宮）中，使其發(fā)育成攜帶有外源基因的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。６３　轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的應(yīng)用：（１）對(duì)基因組織或階段特異表達(dá)的研究（２）通過研究轉(zhuǎn)入外源基因后的新表型，可以發(fā)現(xiàn)基因的新功能；（３）導(dǎo)入外源基因后，由于基因的隨機(jī)插入，可能會(huì)導(dǎo)致內(nèi)源基因的突變，對(duì)這些突變表型進(jìn)行分析，可以發(fā)現(xiàn)新的基因（４）可用于只在胚胎期才表達(dá)的基因的結(jié)構(gòu)和功能的研究（５）建立研究外源基因表達(dá)、調(diào)控的動(dòng)物模型（６）對(duì)遺傳性疾病的研究（７）建立人類疾病的動(dòng)物模型，（８）動(dòng)物新品種的培育（９）基因產(chǎn)品的制備（１０）在免疫學(xué)中，可用于對(duì)免疫機(jī)制、免疫相關(guān)疾病的研究及建立免疫性疾病動(dòng)物模型等。６６基因打靶的必備條件：（１）胚胎干細(xì)胞：ＥＳ細(xì)胞的特點(diǎn)：能在體外培養(yǎng)，并保留發(fā)育的全能性。７０　突變類型：點(diǎn)突變（轉(zhuǎn)換和顛換）、缺失（一個(gè)堿基或一段核苷酸鏈從ＤＮＡ大分子上消失）、插入（一個(gè)原來沒有的堿基或一段原來沒有的核苷酸鏈插入ＤＮＡ大分子中間）、倒位（ＤＮＡ鏈內(nèi)重組，使其中一段方向反置）７１　突變所引起的遺傳效應(yīng)包括：（１）遺傳密碼的改變：錯(cuò)義突變、無義突變、同義突變、移碼突變；（２）對(duì)mRNA剪接的影響（3）蛋白質(zhì)肽鏈中的片段缺失。（2）病毒癌基因沒有內(nèi)含子，而細(xì)胞癌基因中通常含有內(nèi)含子或插入序列。75 P53抑制細(xì)胞生長(zhǎng)機(jī)制：（1）P53蛋白可抑制cyclinA的表達(dá)，故P53基因的變異或缺失，可使cyclinA過量表達(dá)而促進(jìn)細(xì)胞在DNA復(fù)制不完全時(shí)即進(jìn)入M期而致癌，（2）P53能阻礙DNA聚合