標(biāo)記物及其與抗原抗體的結(jié)合物制備-wenkub
2023-02-02 20:29:05 本頁面
【正文】 化學(xué)合成法 。 量子點(diǎn)的光學(xué)特性 熒光強(qiáng)度高，穩(wěn)定性好，抗漂白能力強(qiáng) 所謂光漂白是指由光激發(fā)引起發(fā)光物質(zhì)分解而使熒光強(qiáng)度降低的現(xiàn)象。 特點(diǎn)：①反應(yīng)在電極進(jìn)行； ②電子供體為：三丙胺（ TPA） ③化學(xué)發(fā)光劑：三聯(lián)毗啶釕 三聯(lián)毗啶釕 分子結(jié)構(gòu)圖 NNNN NNR uOONOO電化學(xué)發(fā)光劑 酶促反應(yīng)發(fā)光劑 酶促反應(yīng)發(fā)光劑： 是利用標(biāo)記酶的催化作用，使發(fā)光劑（底物）發(fā)光，這一類需酶催化后發(fā)光的發(fā)光劑稱為酶促反應(yīng)發(fā)光劑。 AE特性 化學(xué)發(fā)光反應(yīng)簡單，無需催化劑，背景噪聲低 。 四、化學(xué)發(fā)光劑 在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中參與能量轉(zhuǎn)移并最終以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物，稱為 化學(xué)發(fā)光劑或發(fā)光底物 。 ALP的 底物 對(duì) 硝基苯磷酸酯（ pNPP ） 經(jīng) AP作用后的產(chǎn)物為黃色對(duì)硝基酚，最大吸收峰波長為405 nm。不穩(wěn)定，致癌性。 如 4甲基傘酮 β D半乳糖苷，受 β 半乳糖苷酶的作用后分解成 4甲基傘酮，可發(fā)出熒光，激發(fā)光波長為 360nm，發(fā)射光波長為 450nm。 稀土離子的 熒光特性 如下： 具有較大的 Stokes位移，發(fā)射光譜和激發(fā)光譜不會(huì)相互重疊。20227 目 錄 第一節(jié) 標(biāo)記物種類及特性 第二節(jié) 常見交聯(lián)劑的種類及特性 第三節(jié) 放射性核素與抗原抗體結(jié)合物制備 第四節(jié) 熒光素與抗原抗體結(jié)合物制備 第五節(jié) 酶與抗原抗體結(jié)合物制備 第六節(jié) 化學(xué)發(fā)光劑與抗原抗體的結(jié)合物制備 第七節(jié) 稀土離子與抗原抗體的結(jié)合物制備 第八節(jié) 量子點(diǎn)與抗原抗體的結(jié)合物制備 第九節(jié) 膠體金與抗原抗體的結(jié)合物制備 第一節(jié) 標(biāo)記物的種類及特性 重點(diǎn)提示 放射性核素 熒光物質(zhì) 酶和酶作用底物 化學(xué)發(fā)光劑 量子點(diǎn) 膠體金 第一節(jié) 標(biāo)記物的種類及特性 標(biāo)記 免疫技術(shù) = 免疫技術(shù) + 標(biāo)記技術(shù) 抗原抗體反應(yīng) 示蹤標(biāo)記物 高特異性 高靈敏性 精密儀器檢測(cè) 高精密性 既可以與抗原或抗體相結(jié)合 ，又可以被相應(yīng)的儀器所檢測(cè)的物質(zhì) ， 這就是標(biāo)記物 標(biāo)記物在免疫分析中的作用在于示蹤標(biāo)記并能夠被檢測(cè) 放射性核素 125I特點(diǎn) 化學(xué)性質(zhì)較活潑，標(biāo)記方法簡單，容易獲取高比活性的標(biāo) 記結(jié)合物； 衰變過程不產(chǎn)生電離輻射強(qiáng)的 β 射線，對(duì)標(biāo)記多肽，蛋白抗原分子的免疫活性影響??； 衰變過程中釋放 γ 射線，可用 γ 計(jì)數(shù)器測(cè)量，方法簡便，易推廣應(yīng)用； 半衰期 (60天 )適中、核素豐度 (95％ )及計(jì)數(shù)率相對(duì)較高。 二、 熒光物質(zhì) 有機(jī)化合物熒光素 稀土離子螯合物 熒光底物（酶作用后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)） 熒光素 異硫氰酸熒光素（ fluorescein isothiocyanate, FITC） 四乙基羅丹明（ rhodamine, RB200） 四甲基異硫氰酸羅丹明（ tetramethylrhodamine isothiocyanate, TRITC） 藻紅蛋白 (phycoerthrin, PE) 常用的熒光素特性 熒光物質(zhì) 最大吸收光譜 最大發(fā)射光譜 應(yīng)用 異硫氰酸熒光素 (FITC) 490～ 495nm 520～ 530nm （黃綠色） FAT、熒光偏振免疫測(cè)定 四乙基羅丹明 (RB200) 570～ 575nm 595～ 600nm（橙紅色） FITC的襯比染色或雙標(biāo)記 FAT 四甲基異硫氰酸羅丹明 (TRITC) 550nm 620nm（橙紅色） FITC的襯比染色或雙標(biāo)記 FAT 藻紅蛋白（ PE） 490560nm 595nm（紅色） 雙標(biāo)記 FAT、流式細(xì)胞術(shù) 稀土離子 鑭系元素屬于三價(jià)稀土離子，包括銪（ Eu3+）、釤（Sm3+）、鋱 (Tb3+)、釹（ Nd3+）、鏑（ Dy3+）和鈰 (Ce3+)等。 熒光壽命長，熒光半衰期介于 101000μ s之間。 其他如堿性磷酸酶的底物（ 4甲基傘酮磷酸鹽）和辣根過氧化物酶的底物（對(duì)羥基苯乙酸）等，都具有熒光底物的性質(zhì) 。 TMB反應(yīng)后顯藍(lán)色 ，加酸終止反應(yīng)后變?yōu)辄S色 ,測(cè)定波長450nm ，穩(wěn)定，無致癌性， ELISA中應(yīng)用最廣泛的底物。 常用底物 BCIP/ NBT常用于 ELISPOT中的 PVDF膜顯色，在 ALP的催化作用下， BCIP被水解生成強(qiáng)反應(yīng)性的產(chǎn)物，該產(chǎn)物與 NBT發(fā)生反應(yīng)，形成不溶性的深藍(lán)色至藍(lán)紫色沉淀 4MUP被 AP催化生成 4甲基傘形酮，在 360nm的激發(fā)光的作用下，發(fā)出 450nm的熒光，可用熒光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)量。 直接化學(xué)發(fā)光劑 酶促反應(yīng)發(fā)光劑 直接化學(xué)發(fā)光劑 直接化學(xué)發(fā)光劑 直接化學(xué)發(fā)光劑在發(fā)光免疫分析過程中不需酶的催化作用，直接參與發(fā)光反應(yīng)，它們?cè)诨瘜W(xué)結(jié)構(gòu)上有產(chǎn)生發(fā)光的特有基團(tuán)，可直接標(biāo)記抗原或抗體。 極其穩(wěn)定，如 2甲基吖啶酯，因其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)使其有效期長達(dá) 1 年甚至更久 。 魯米諾及其衍生物 AMPPD 魯米諾及其衍生物 魯米諾發(fā)光原理 魯米諾及其衍生物 魯米諾增強(qiáng)發(fā)光反應(yīng)原理 AMPPD AMPPD 〔 3(2’ 螺旋金剛烷 )4甲氧基 4(3” 磷酰氧基 )苯 1,2二氧雜環(huán)丁烷 〕〕 五、量子點(diǎn) 量子點(diǎn) QDs 量子點(diǎn) (quantimim dots, QDs)即半導(dǎo)體納米粒子，是指半徑小于或接近于激子玻爾半徑的半導(dǎo)體納米晶粒（110nm） 。有機(jī)熒光色素的光漂白速率很快，而量子點(diǎn)的光漂白作用則小得多 。 物理制備法 可制得粒徑易控的量子點(diǎn)，但所需實(shí)驗(yàn)設(shè)備昂貴，廣泛使用受限 。 量子點(diǎn)表面修飾 無機(jī)殼層修飾法和化學(xué)修飾法是兩種常用的量子點(diǎn)修飾方法 。 膠體金顆粒由一個(gè)基礎(chǔ)金核 (原子金 Au)及包圍在外的雙
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