抗原與抗體的相互作用及免疫學檢測-wenkub
2023-05-24 20:18:30 本頁面
【正文】 原與抗體的相互作用及免疫學檢測 ? 體液免疫的基礎是抗原和抗體分子的結(jié)合，這種結(jié)合可以是游離形式的，也可以結(jié)合在細胞表面?？乖贵w的結(jié)合并沒有共價鍵形成，而是由這些特定部位之間的短程分子力相互作用的結(jié)果。 ? 抗原抗體分子間的作用力，即親和力包括以下幾種： 鹽鍵（離子鍵） 范德華力 疏水作用 氫鍵 二、 抗原與抗體結(jié)合的可逆性 抗原抗體的結(jié)合反應是一個可逆的反應 Ab+Ag Ab:Ag 由于抗原抗體結(jié)合的可逆性，可利用親和層析法分離純化抗原或抗體；利用待測抗原和標準抗原與抗體的競爭結(jié)合，進行抗原或抗體的定量測定，如放免檢測法、酶聯(lián)免疫吸附法等 三、抗原與抗體反應中量的關系 當抗體與抗原結(jié)合時，如果是顆?？乖?，則出現(xiàn)凝集現(xiàn)象；如果是可溶性抗原，則產(chǎn)生沉淀作用。這一階段是抗原抗體網(wǎng)格生長的階段，速率要慢的多，且在很大程度上依賴于溫度、離子強度等外界條件，但更重要的是需要合適的抗原抗體分子比例。在這一免疫應答過程中，除依賴于抗原物質(zhì)有特定的化學結(jié)構(gòu)外，還依賴于動物機體的免疫應答能力。常用的動物有馬、羊、兔、鼠和豚鼠。 佐劑在抗血清制備中的作用： 由于佐劑有吸附和包埋抗原的 “ 儲藏所 ” 作用，延長了抗原在體內(nèi)的存留時間，便于抗原較長時間的、不間斷的刺激機體免疫系統(tǒng)，使初次反應與再次反應結(jié)合在一起，其免疫效果更為理想。 一、動物的免疫 抗原用量： 佐劑：弗氏佐劑 弗氏佐劑的成分和使用 免疫方法：淋巴結(jié)注射、腹部皮下注射、四足掌皮內(nèi)注射。 抗血清制備：血液室溫放置 12h或冰箱內(nèi) 4度過夜，血清便可充分析出，用滴管吸出或離心分離取得。 三、免疫球蛋白的純化 由于抗原抗體的結(jié)合具有高度的特異性，在免疫檢測中常常直接運用抗血清進行，而無需對抗體進行純化。 硫銨鹽析和 DEAE纖維素柱層析法純化 IgG 在 IgG帶正電，其他血清蛋白帶負電，因此陰離子交換劑 DEAE纖維素可以一次將 IgG提純到很高的純度 IgM的純化方法： 18%飽和度硫銨沉淀+DEAE纖維素柱層析法。
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