標記物及其與抗原抗體的結合物制備-展示頁
2025-01-27 20:29本頁面
【正文】 素（輔基） 主酶與酶活性無關 輔基是酶的活性中心 RZ值： 403nm （輔基） 與 275nm（主酶） OD值之比 RZ值與酶活性無關，酶活性單位比 RZ值更為重要 ELISA中應用最為廣泛的標記用酶 堿性磷酸酶 ALP及 β 半乳糖苷酶 堿性磷酸酶（ AP） 菌源性 AP 腸粘膜 AP β –半乳糖苷酶（ β Gal） 用于均相酶 免疫測定 HRP底物 HRP的底物 DH2+H2O2→ → → D+2H 2O HRP 供氫體 DH2習慣上被稱為底物，底物有多種 H2O2為受氫體， HRP對受氫體的專一性很高 HRP的常見底物 鄰苯二胺 OPD 四甲基聯(lián)苯胺 TMB 5氨基水楊酸 5ASA 2,2′ 氨基 二 (3乙基 苯并噻唑啉磺酸 6)銨鹽 ABTS 常用底物 OPD反應后顯橙黃色，加酸終止反應后呈棕黃色，測定波長 492nm。 其他如堿性磷酸酶的底物（ 4甲基傘酮磷酸鹽）和辣根過氧化物酶的底物（對羥基苯乙酸）等，都具有熒光底物的性質 。 其他熒光物質 某些化合物本身無熒光效應，但經(jīng)酶催化后便具有強熒光 。 熒光壽命長，熒光半衰期介于 101000μ s之間。 游離的稀土離子熒光比較弱，但與適當?shù)尿蟿┤?β 萘甲酰三氟丙酮（ β NTA）、三甲基乙酰三氟丙酮（ PTA）等形成螯合物后，可使熒光得到增強 。 二、 熒光物質 有機化合物熒光素 稀土離子螯合物 熒光底物（酶作用后產(chǎn)生熒光的物質） 熒光素 異硫氰酸熒光素（ fluorescein isothiocyanate, FITC） 四乙基羅丹明（ rhodamine, RB200） 四甲基異硫氰酸羅丹明（ tetramethylrhodamine isothiocyanate, TRITC） 藻紅蛋白 (phycoerthrin, PE) 常用的熒光素特性 熒光物質 最大吸收光譜 最大發(fā)射光譜 應用 異硫氰酸熒光素 (FITC) 490～ 495nm 520～ 530nm （黃綠色） FAT、熒光偏振免疫測定 四乙基羅丹明 (RB200) 570～ 575nm 595～ 600nm（橙紅色） FITC的襯比染色或雙標記 FAT 四甲基異硫氰酸羅丹明 (TRITC) 550nm 620nm（橙紅色） FITC的襯比染色或雙標記 FAT 藻紅蛋白（ PE） 490560nm 595nm（紅色） 雙標記 FAT、流式細胞術 稀土離子 鑭系元素屬于三價稀土離子，包括銪（ Eu3+）、釤（Sm3+）、鋱 (Tb3+)、釹（ Nd3+）、鏑（ Dy3+）和鈰 (Ce3+)等。第一章 血液標本采集與處理 臨床免疫學檢驗技術 第四章 標記物及其與抗原抗體的結合物制備 汪 付 兵 /R20227 目 錄 第一節(jié) 標記物種類及特性 第二節(jié) 常見交聯(lián)劑的種類及特性 第三節(jié) 放射性核素與抗原抗體結合物制備 第四節(jié) 熒光素與抗原抗體結合物制備 第五節(jié) 酶與抗原抗體結合物制備 第六節(jié) 化學發(fā)光劑與抗原抗體的結合物制備 第七節(jié) 稀土離子與抗原抗體的結合物制備 第八節(jié) 量子點與抗原抗體的結合物制備 第九節(jié) 膠體金與抗原抗體的結合物制備 第一節(jié) 標記物的種類及特性 重點提示 放射性核素 熒光物質 酶和酶作用底物 化學發(fā)光劑 量子點 膠體金 第一節(jié) 標記物的種類及特性 標記 免疫技術 = 免疫技術 + 標記技術 抗原抗體反應 示蹤標記物 高特異性 高靈敏性 精密儀器檢測 高精密性 既可以與抗原或抗體相結合 ，又可以被相應的儀器所檢測的物質 ， 這就是標記物 標記物在免疫分析中的作用在于示蹤標記并能夠被檢測 放射性核素 125I特點 化學性質較活潑，標記方法簡單，容易獲取高比活性的標 記結合物； 衰變過程不產(chǎn)生電離輻射強的 β 射線，對標記多肽，蛋白抗原分子的免疫活性影響小； 衰變過程中釋放 γ 射線，可用 γ 計數(shù)器測量，方法簡便，易推廣應用； 半衰期 (60天 )適中、核素豐度 (95％ )及計數(shù)率相對較高。 銪是標記抗原抗體應用最廣的元素 。 稀土離子的 熒光特性 如下： 具有較大的 Stokes位移，發(fā)射光譜和激發(fā)光譜不會相互重疊。 激發(fā)光波長范圍寬，發(fā)射光譜帶很窄，甚至不到 10nm。 如 4甲基傘酮 β D半乳糖苷，受 β 半乳糖苷酶的作用后分解成 4甲基傘酮，可發(fā)出熒光，激發(fā)光波長為 360nm，發(fā)射光波長為 450nm。 三、酶和酶作用底物 常用的酶標記物有 辣根過氧化物酶 (horseradish peroxidase, HRP) 堿性磷酸酶 (alkaline phosphatase, ALP) β 半乳糖苷酶 (β galactosidase, β Gal) 每種酶可與相應的顯色或發(fā)光底物作用，產(chǎn)生典型的有色反應物或化學發(fā)光反應，通過反應的顏色或發(fā)光強度對被檢物進行定性、定量分析 。不穩(wěn)定，致癌性。 HRP的常見底物 對羥基苯乙酸（ 4hydroxyphenylacetic acid， HPA） HPA具有熒光底物性質，在 H2O2存在下被 HRP氧化成二聚體（熒光物質），在 350nm激發(fā)光作用下，發(fā)出 450nm波長的熒光 。 ALP的 底物 對 硝基苯磷酸酯（ pNPP ） 經(jīng) AP作用后的產(chǎn)物為黃色對硝基酚，最大吸收峰波長為405 nm。 熒光 AP 360nm 激發(fā)光 H3PO4 + β Gal 熒光底物 β Gal 的底物 4甲基
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