【正文】 第一篇：細(xì)胞實(shí)驗(yàn)教案1（最終版）細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教案實(shí)驗(yàn)一細(xì)胞核與線粒體的分級(jí)分離一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私獠钏匐x心法分離細(xì)胞器的原理，以及練習(xí)使用差速離心法分離哺乳動(dòng)物的細(xì)胞核與線粒體。二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞內(nèi)不同結(jié)構(gòu)的比重和大小都不相同，在同一離心場(chǎng)內(nèi)的沉降速度也不相同，根據(jù)這一原理，常用不同轉(zhuǎn)速的離心法，將細(xì)胞內(nèi)各種組分分級(jí)分離出來(lái)。分離細(xì)胞器最常用的方法是將組織制成勻漿，在均勻的懸浮介質(zhì)中用差速離心法進(jìn)行分離，其過(guò)程包括組織細(xì)胞勻漿、分級(jí)分離和分析三步，這種方法已成為研究亞細(xì)胞成分的化學(xué)組成、理化特性及其功能的主要手段。勻漿(Homogenization)低溫條件下，將組織放在勻漿器中，加入等滲勻漿介質(zhì)(／／L氯化鈣)進(jìn)行破碎細(xì)胞使之成為各種細(xì)胞器及其包含物的勻漿。分級(jí)分離(Fractionation)由低速到高速離心逐漸沉降。先用低速使較大的顆粒沉淀，再用較高的轉(zhuǎn)速，將浮在上清液中的顆粒沉淀下來(lái)，從而使各種細(xì)胞結(jié)構(gòu)，如細(xì)胞核、線粒體等得以分離。由于樣品中各種大小和密度不同的顆粒在離心開(kāi)始時(shí)均勻分布在整個(gè)離心管中，所以每級(jí)離心得到的第一次沈淀必然不是純的最重的顆粒，須經(jīng)反復(fù)懸浮和離心加以純化。分析 分級(jí)分離得到的組分，可用細(xì)胞化學(xué)和生化方法進(jìn)行形態(tài)和功能鑒定。三、細(xì)胞核的分離提取(一)操作步驟1．用頸椎脫位的方法處死小白鼠后，迅速剖開(kāi)腹部取出肝臟，剪成小塊(去除結(jié)締組織)％NaCl的燒杯中，反復(fù)洗滌，盡量除去血污，用濾紙吸去表面的液體。2．將濕重約1g的肝組織放在小平皿中，／／L氯化鈣溶液，先加少量該溶液于平皿中，盡量剪碎肝組織后，再全部加入。3．剪碎的肝組織倒入勻漿管中，使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中，左手持之，右手將勻漿搗桿垂直插入管中，上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨3～5次，用3層紗布過(guò)濾勻漿液于離心管中，然后制備一張涂片①，做好標(biāo)記，自然干燥。4．將裝有濾液的離心管配平后，放入普通離心機(jī)，以2500rpm，離心15分鐘；(1)緩緩取上清液，移入高速離心管中，保存于有冰塊的燒杯中，待分離線粒體用；(2)同時(shí)涂一張上清液片②做好標(biāo)記，自然干燥；(3)余下的沉淀物進(jìn)行下一步驟。5．／L氯化鈣溶液懸浮沉淀物，以2500rpm離心15分鐘棄上清，將殘留液體用吸管吹打成懸液，滴一滴于干凈的載玻片上，涂片③，自然干燥。6．將①、②、③涂片用l％甲苯胺蘭染色后蓋片即可觀察。(二)結(jié)果分別于高倍鏡下觀察三張涂片，描述鏡下所見(jiàn)。四、高速離心分離提取線粒體(一)操作步驟1．將裝有上清液的高速離心管，從裝有冰塊的燒杯中取出，配平后，以17000rpm離心20分鐘，棄上清，留取沉淀物。2．加入0．25mol／L蔗糖一0．003mol／L氯化鈣液lml，用吸管吹打成懸液，以17000rpm離心20分鐘，將上清吸入另一試管中，留取沉淀物， 0．25mol／／L氯化鈣溶液混勻成懸液(可用牙簽)。3．取上清液和沉淀物懸液，分別滴一滴于干凈載玻片上(分別標(biāo)記④、⑤涂片)，％詹納斯綠B染液蓋上蓋片染20分鐘。(二)結(jié)果油鏡下觀察，顆粒狀的線粒體被詹納斯綠B染成藍(lán)綠色。作業(yè)光鏡或油鏡下觀察制備的細(xì)胞核與線粒體樣本。實(shí)驗(yàn)二細(xì)胞膜的通透性觀一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?。、脂溶性大小、電解質(zhì)和非電解質(zhì)對(duì)細(xì)胞膜通透性的影響。二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞膜在不斷變化的環(huán)境中必須保持自身的穩(wěn)定狀態(tài)才有生存。細(xì)胞膜允許一些物質(zhì)通透，又能降低甚至阻止另一些物質(zhì)的通透，所以細(xì)胞膜具有選擇通透性。水是生物界最普遍的溶劑，水分子可以按照物質(zhì)濃度梯度從滲透壓低的一側(cè)通過(guò)細(xì)胞膜向滲透壓高的一側(cè)擴(kuò)散，這種現(xiàn)象就是滲透。將紅細(xì)胞放在低滲鹽溶液中，水分子大量滲到細(xì)胞內(nèi)，可使細(xì)胞脹破，血紅蛋白釋放到介質(zhì)中，由不透明的紅細(xì)胞懸液變?yōu)榧t色透明的血紅蛋白溶液，這種現(xiàn)象稱(chēng)為溶血。將紅細(xì)胞放在某些等滲鹽溶液中，由于紅細(xì)胞膜對(duì)各種溶質(zhì)的通透性不同，膜兩側(cè)的滲透壓平衡會(huì)發(fā)生改變，也會(huì)發(fā)生溶血現(xiàn)象。在不同相對(duì)分子量、脂溶性大小以及電解質(zhì)和非電解質(zhì)等各種溶液中，紅細(xì)胞質(zhì)膜對(duì)各種溶質(zhì)的滲透性不同。由于溶質(zhì)透入速度不同，溶血時(shí)間也不同。因此，發(fā)生溶血現(xiàn)象所需時(shí)間長(zhǎng)短可作為測(cè)量物質(zhì)進(jìn)入紅細(xì)胞速度的一種指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察紅細(xì)胞溶血現(xiàn)象時(shí)間的不同來(lái)記錄滲入速度，從而測(cè)量各種物質(zhì)通透性的差別。三、實(shí)驗(yàn)用品血液（兔血或雞血，含適量肝素）50mL燒杯、10ml試管、試管架、移液槍及槍尖，標(biāo)簽紙、吸水紙等。 mol/L氯化鈉 mol/L氯化銨 mol/L醋酸銨 mol/L硝酸鈉 mol/L草酸銨 mol/L硫酸鈉 mol/L葡萄糖 mol/L甘油 mol/L乙醇 蒸餾水四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟%血紅細(xì)胞懸液：（不透明的紅色液體）。：，晃動(dòng)試管使之混合均勻，注意觀察溶液的顏色變化，溶液由不透明 的紅色變?yōu)橥该鞯募t色，紅細(xì)胞發(fā)生破裂，造成100%紅細(xì)胞溶血，使光線比較容易透過(guò)溶液。記錄發(fā)生溶血（可以通過(guò)試管壁看清實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)上的字為標(biāo)準(zhǔn)）的時(shí)間（自加入稀釋血液到溶液變成紅色透明澄清所需的時(shí)間）。：取10支試管，分別加入3ml不同的等滲溶液，做好標(biāo)記后，輕輕振蕩，仔細(xì)觀察是否發(fā)生溶血并記錄發(fā)生溶血的時(shí)間。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果將不同等滲溶液下的溶血現(xiàn)象列表，分析（是否發(fā)生溶血以及溶血發(fā)生的時(shí)間、原因）。六、思考脂溶性與水溶性、小分子與大分子、極性與非極性、帶電荷與不帶電荷物質(zhì)，分別是哪一種更容易穿過(guò)質(zhì)膜？七、注意事項(xiàng)，能夠清楚地透過(guò)溶液看到溶液后方紙上清晰的字跡時(shí)，為完全溶血。，所以將溶血時(shí)間適當(dāng)?shù)匮娱L(zhǎng)至15min，15min時(shí)仍然不溶即判斷為不溶血。，尤其滴加血液的操作要迅速。，不要強(qiáng)力搖晃，以免造成人為的紅細(xì)胞破裂。，血量也要一致。實(shí)驗(yàn)三 細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)與幾種細(xì)胞器的觀察一,實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谄胀ü鈱W(xué)顯微鏡下識(shí)別細(xì)胞和細(xì)胞器的形態(tài)結(jié)構(gòu),實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞在形態(tài)上是多種多樣的,有球形,橢圓形,扁平形,立方形,梭形,但是它們卻有共同的基本結(jié)構(gòu)特點(diǎn),都由細(xì)胞膜(動(dòng)物),細(xì)胞壁(植物),如線粒體,高爾基體,中心體,核仁,染色體等,一般經(jīng)過(guò)一