【正文】 定固定染色處理后,實(shí)驗(yàn)材料洋蔥根尖切片 小白鼠肝切片 兔神經(jīng)節(jié)切片 馬蛔蟲受精卵切片 四,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(1)洋蔥根尖切片細(xì)胞的觀察先用低倍鏡觀察根尖的縱切面,注意分生區(qū),伸長(zhǎng)區(qū),成熟區(qū)細(xì)胞的異同,然后再仔細(xì)觀察細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu),特別要注意細(xì)胞的形狀,大小,以及細(xì)胞壁,細(xì)胞核,核仁,細(xì)胞質(zhì),液泡的形態(tài)結(jié)構(gòu).(2)兔神經(jīng)節(jié)細(xì)胞切片高爾基體的觀察先在低倍鏡下找到兔神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,然后轉(zhuǎn)用高倍鏡觀察,可看到細(xì)胞內(nèi)淡黃色的背景上有黃褐色或者透明的細(xì)胞核,核的周圍分布著許多深褐色的(硝酸銀鍍?nèi)?高爾基體,呈彎曲的線狀,顆粒狀,少量分散在細(xì)胞質(zhì).(3)小白鼠肝細(xì)胞切片線粒體的觀察先用低倍鏡后用高倍鏡觀察,可見到許多肝小葉,每小葉有許多緊密排列成索狀的多角形的肝細(xì)胞,轉(zhuǎn)用油鏡觀察,可見到細(xì)胞質(zhì)內(nèi)分布著許多被蘇木精染成深紫色的線粒體,呈顆粒狀和線狀.(4)馬蛔蟲受精卵切片中心體的觀察取馬蛔蟲受精卵切片,在顯微鏡下找到充滿子宮腔的受精卵,每個(gè)馬蛔蟲受精卵外圍有一層較厚的卵膜,膜內(nèi)有寬大的圍卵腔,在細(xì)胞中央被染成藍(lán)色條狀或棒狀的結(jié)構(gòu),亦被染成藍(lán)色的小粒,圖一, 洋蔥根尖細(xì)胞圖圖二, 兔的神經(jīng)細(xì)胞中高爾基體 圖三, 小白鼠肝細(xì)胞切片示線粒體圖四, 馬蛔蟲受精卵切片示中心體生物繪圖應(yīng)注意的問題,先要把顯微鏡下的圖象觀察清楚,再根據(jù)繪圖的要求,安排好圖紙的布局,看到什么繪什么,不要隨意增多或減少,整齊,要用細(xì)的直線標(biāo)示在圖的右邊, ，并比較它們兩者有何不同。，掌握細(xì)胞有絲分裂前、中、后、末期的染色體形態(tài)變化特點(diǎn)。，比較植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞有絲分裂過程的不同點(diǎn)。：草履蟲無絲分裂裝片、洋蔥根尖切片、馬蛔蟲裝片，洋蔥根尖。：每組配備：眼科鑷和眼科剪各2把，皮頭吸管1支，5ml燒杯2個(gè)，載玻片（每人一片），蓋玻片，擦鏡紙，吸水紙，擦鏡液。：1mol/L HCl（60℃預(yù)熱），Carnoy固定液（甲醇3∶1冰醋酸），95%、85%、70%酒精。蒸餾水、改良苯酚品紅染液。(一)草履蟲無絲分裂切片觀察草履蟲可進(jìn)行無性生殖（無絲分裂）和有性生殖（接合生殖）。在無性生殖時(shí)，可在顯微鏡下看到草履蟲胞體被染成粉紅色，細(xì)胞核染成紫紅色。分裂時(shí)草履蟲大核向胞體兩端伸長(zhǎng)，進(jìn)而在核的中部向內(nèi)凹陷，呈啞鈴形。然后斷開形成兩個(gè)細(xì)胞核，同時(shí)胞體也隨之延伸，中部出現(xiàn)分裂溝，最后完全分裂成兩個(gè)子細(xì)胞。(二)洋蔥根尖有絲分裂觀察：待根長(zhǎng)達(dá)2厘米時(shí)，切下根尖，浸入Carnoy固定液中4h，分別在95%和85%酒精中各浸泡30 min，最后在70%酒精中保存。（此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備）：取出根尖放在載玻片上，滴加1mol/L HCl（60℃）于根尖上，水解8 min，蒸餾水水洗3次（將酒精洗去，以利于染色）。：切取根尖的乳白色的分生區(qū)，用鑷子輕輕地?fù)v碎，滴一滴改良苯酚品紅染液，染色20 min后，蓋上蓋玻片。：在蓋玻片上面覆蓋一張吸水紙，用拇指垂直壓下，再用鉛筆橡皮頭輕輕敲打，使細(xì)胞壓成均勻的薄層（敲打時(shí)，勿使蓋玻片移動(dòng)）。：先在低倍鏡下找出根尖末端，從根尖末端往上依次為根的根冠區(qū)、生長(zhǎng)區(qū)和伸長(zhǎng)區(qū)（圖181）。選擇生長(zhǎng)區(qū)的細(xì)胞觀察，可見這一部位的細(xì)胞染色較深，緊密排列成一行行的四方形。小心移動(dòng)標(biāo)本，選擇處于分裂狀態(tài)最多的部位轉(zhuǎn)高倍鏡觀察，便可見許多處于不同分裂時(shí)期的細(xì)胞。間期：間期細(xì)胞較小，可清晰看到染色均勻的細(xì)胞核，核內(nèi)有一個(gè)染色較深的圓形小體為核仁。前期：細(xì)胞從間期進(jìn)入前期時(shí)，細(xì)胞核膨大，染色質(zhì)逐漸螺旋形成細(xì)線狀的染色體。隨著染色體不斷螺旋縮短變粗，可見每條線狀的染色體是由兩條姐妹染色單體組成。前期末，核仁解體，紡綞絲出現(xiàn)，核膜、核仁完全消失。實(shí)驗(yàn) 雞血細(xì)胞的體外融合 【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹苛私庖叶迹≒EG）誘導(dǎo)體外細(xì)胞融合的基本原理。通過PEG誘導(dǎo)雞血細(xì)胞之間的融合實(shí)驗(yàn)，初步掌握細(xì)胞融合的基本方法?！緦?shí)驗(yàn)原理】 細(xì)胞融合（cell fusion）又稱體細(xì)胞雜交，是指用人工方法使兩個(gè)或兩個(gè)以上的體細(xì)胞融合成異核體細(xì)胞，隨后，異核體同步進(jìn)入有絲分裂，核膜崩潰，來自兩個(gè)親本細(xì)胞的基因組合在一起形成只含有一個(gè)細(xì)胞核的雜種細(xì)胞（hybrid cell）。細(xì)胞融合技術(shù)是研究細(xì)胞遺傳、基因定位、細(xì)胞免疫、病毒和腫瘤的重要手段。依據(jù)融合過程采用的助融劑不同，細(xì)胞融合可分為：①病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞融合，如仙臺(tái)病毒（hemagglutinating virus of Japan,HVJ）。②化學(xué)因子誘導(dǎo)的細(xì)胞融合，如聚乙二醇（polyethyleneglycol,PEG）。③電場(chǎng)誘導(dǎo)的細(xì)胞融合；④激光誘導(dǎo)的細(xì)胞融合。PEG是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子質(zhì)量的多聚體。PEG可改變各類細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)，是兩細(xì)胞接觸點(diǎn)處脂類分子發(fā)生疏散和重組，引發(fā)細(xì)胞融合。該方法應(yīng)用相對(duì)分子質(zhì)量為400～6000的PEG溶液引起細(xì)胞的聚集和粘連，產(chǎn)生高頻率的細(xì)胞融合。融合的頻率和活力與所用PEG的相對(duì)分子質(zhì)量、濃度、作用時(shí)間、細(xì)胞的生理狀態(tài)與密度等有關(guān)。【實(shí)驗(yàn)儀器、材料和試劑】?jī)x器、用具：注射器、刻度離心管、離心機(jī)、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、水浴鍋、滴管、顯微鏡、燒杯、容量瓶、凹面載玻片、蓋玻片、酒精燈等。材料：成年家雞。試劑1）%NaCl溶液。2）GKN液： NaCl， KCl， Na2HPO42H2O, NaH2PO4H2O, 葡萄糖， 酚紅，溶于1000ml重蒸水中。3）50%（m/V）PEG溶液：①取50g PEG(相對(duì)分子質(zhì)量=4000)放入100ml瓶中，高壓滅菌20min。②讓PEG冷卻至50～60℃，勿讓其凝固。③加入50ml預(yù)熱至50℃的GKN液，混勻，置37℃?zhèn)溆谩?）Hanks原液（10）：NaCl Na2HPO412H2O KCl KH2PO4 MgSO47H2O 葡萄糖 CaCl2 ，溶于30～50ml的重蒸水中。取1000ml的燒杯及容量瓶各一個(gè)，先放重蒸水800ml于燒杯中，然后按上述配方順序，逐一稱取藥品。必須在前一藥品完全溶解后，方可加入下一藥品，直到葡萄糖完全溶解后，再