微生物學(xué)實驗教案(已修改)
2025-05-09 13:20 本頁面
【正文】 微 生 物 實 驗 教 案實驗一 顯微鏡油鏡的使用和細菌形態(tài)的觀察一、實驗?zāi)康囊匀旧Ｆ瑸槔?，熟練掌握顯微鏡油鏡的使用方法。二、實驗原理1 顯微鏡油鏡使用的原理1普通光學(xué)顯微鏡的基本構(gòu)造（1）光學(xué)部分: 接目鏡、接物鏡、照明裝置(聚光鏡、虹彩光圈、反光鏡等)。它使檢視物放大, 造成物象。（2）機械部分: 鏡座、鏡臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺、載物臺轉(zhuǎn)移器、粗調(diào)節(jié)器、細調(diào)節(jié)器等部件。它起著支持、調(diào)節(jié)、固定等作用。2顯微鏡的放大倍數(shù)和分辨率（1）放大倍數(shù)=接物鏡放大倍數(shù)接目鏡放大倍數(shù)（2）顯微鏡的分辨率：表示顯微鏡辨析物體（兩端）兩點之間距離的能力，可用公式表示為：D=λ/2nsin(α/2 ) 式中D：物鏡分辨出物體兩點間的最短距離。 λ：可見光的波長（）n: 物鏡和被檢標本間介質(zhì)的折射率。a：鏡口角（即入射角）。3油鏡使用的原理油鏡，即油浸接物鏡。當光線由反光鏡通過玻片與鏡頭之間的空氣時，由于空氣與玻片的密度不同，使光線受到曲折，發(fā)生散射，降低了視野的照明度。若中間的介質(zhì)是一層油（其折射率與玻片的相近），則幾乎不發(fā)生折射，增加了視野的進光量，從而使物象更加清晰。三、實驗材料 1顯微鏡、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、鑷子、酒精燈、火柴、玻璃鉛筆、蒸餾水等。2枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌的玻片染色標本。四、實驗方法與步驟（1）用前檢查：零件是否齊全，鏡頭是否清潔。（2）調(diào)節(jié)光亮度。（3）低倍鏡觀察：先粗調(diào)再微調(diào)至物象清晰。（4）轉(zhuǎn)入中倍、高倍觀察，每一不只需調(diào)微調(diào)旋紐即可看到清晰的物象。（5）油鏡觀察：高倍鏡下找到清晰的物象后，旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)換器，在標本中央滴一滴香柏油，使油鏡鏡頭浸入香柏油中，細調(diào)至看清物象為止。（6）繪出所觀察到的細菌形態(tài)圖像。（7）、換片：另換新片觀察，必須從（3）步開始操作。（8）、用后復(fù)原：觀察完畢，上懸鏡筒，先用擦鏡紙擦去油鏡頭上的香柏油，然后再用擦鏡紙沾取少量二甲苯擦去殘留的油，最后用擦鏡紙擦去殘留的二甲苯，后將鏡體全部復(fù)原。五、實驗報告油鏡使用的原理 繪制細菌形態(tài)六、思考題1油鏡與普通物鏡在使用方法上有何不同？應(yīng)特別注意些什么？2使用油鏡時，為什么必須用鏡頭油？七、實驗注意事項1不準擅自拆卸顯微鏡的任何部件,以免損壞。2鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證光潔度。3觀察標本時，必須依次用低、中、高倍鏡，最后用油鏡。當目視接目鏡時，特別在使用油鏡時，切不可使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。4觀察時，兩眼睜開，養(yǎng)成兩眼能夠輪換觀察的習(xí)慣，以免眼睛疲勞，并且能夠在左眼觀察時，右眼注視繪圖。5拿顯微鏡時，一定要右手拿鏡臂，左手托鏡座，不可單手拿，更不可傾斜拿。6顯微鏡應(yīng)存放在陰涼干燥處，以免鏡片滋生霉菌而腐蝕鏡片。八、教學(xué)反饋實驗二 細菌的簡單染色一、實驗?zāi)康氖炀氄莆诊@微鏡油鏡的使用方法。學(xué)習(xí)染色的基本技術(shù)，二、實驗原理簡單染色的原理大多數(shù)微生物細胞質(zhì)是帶負電荷，簡單染色時采用已知的、帶正電荷的堿性染料。染料適用于熱固定的涂片，染料與菌體細胞質(zhì)黏附使菌體著色。經(jīng)染色后的細菌細胞與背景形成鮮明對比。三、實驗材料 1顯微鏡、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、鑷子、酒精燈、火柴、玻璃鉛筆、蒸餾水等。培養(yǎng)1218h的枯草芽孢桿菌和大腸桿菌以及金黃色葡萄球菌。簡單染色液（美藍染色液、黑色素液或炭素墨水）四、實驗方法與步驟活菌制片觀察取一張干凈的載玻片，在其中央滴上一滴干凈的蒸餾水，取培養(yǎng)1218h的枯草芽孢桿菌一小環(huán)，在水滴上反復(fù)涂抹至菌體充分分散，蓋上蓋玻片，用吸水紙吸去多余的水分，按照油鏡的使用步驟，觀察草芽孢桿菌形態(tài)，邊觀察邊繪圖。簡單染色(1) 涂片:取兩塊干凈的載玻片，各滴一小滴生理鹽水于載玻片中央，用無菌操作分別挑取金黃色葡萄球菌和大腸桿菌于二載玻片的水滴中（每一種菌制一片），調(diào)勻并涂成薄膜。注意滴生理鹽水時不宜過多，涂片必須均勻。(2) 干燥：自然氣干或酒精燈高處微微加熱。(3) 固定:于火焰上通過2—3次。(4) 染色：在整個涂面上滴加齊氏石炭酸復(fù)紅，染色１分鐘。（5）水洗：傾去染液，用自來水細流沖洗至流下的水中無染料顏色為止。（6）干燥：空氣中自然干燥或在酒精燈高處微微加熱。（7）鏡檢：在油鏡下觀察細菌形態(tài)。五、實驗報告油鏡使用的原理 繪制細菌形態(tài)六、思考題1鏡檢標本時，為什么先用低倍鏡觀察，而不是直接用高倍鏡或油鏡觀察？2根據(jù)實驗體會，你認為制備染色標本時，應(yīng)注意哪些事項？七、教學(xué)反饋 實驗三 細菌的革蘭氏染色一、實驗?zāi)康?掌握革蘭氏染色。2了解革蘭氏染色法的原理及其在細菌分類鑒定中的重要性。二、實驗原理1 革蘭氏染色的原理革蘭氏陽性菌的細胞壁主要有肽聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成，在染色過程中，當用95%乙醇處理時，由于脫水而引起網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中的孔徑變小，細胞壁的通透性降低，使結(jié)晶紫碘復(fù)合物被保留在細胞壁內(nèi)而不易脫色，因此呈藍紫色。革蘭氏陰性菌的細胞壁中肽聚糖含量低，脂類物質(zhì)含量高，當用乙醇處理時，脂類物質(zhì)溶解，細胞壁的通透性增加，使結(jié)晶紫碘復(fù)合物容易被乙醇抽提出來而脫色，然后又被染上了復(fù)染劑的顏色，因此呈現(xiàn)紅色。三、實驗材料1大腸桿菌24h的斜面培養(yǎng)物。2葡萄球菌24h的斜面培養(yǎng)物。4革蘭氏染色液
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