微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教案(已修改)
2025-05-09 13:20 本頁(yè)面
【正文】 微 生 物 實(shí) 驗(yàn) 教 案實(shí)驗(yàn)一 顯微鏡油鏡的使用和細(xì)菌形態(tài)的觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊匀旧Ｆ瑸槔?，熟練掌握顯微鏡油鏡的使用方法。二、實(shí)驗(yàn)原理1 顯微鏡油鏡使用的原理1普通光學(xué)顯微鏡的基本構(gòu)造（1）光學(xué)部分: 接目鏡、接物鏡、照明裝置(聚光鏡、虹彩光圈、反光鏡等)。它使檢視物放大, 造成物象。（2）機(jī)械部分: 鏡座、鏡臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺(tái)、載物臺(tái)轉(zhuǎn)移器、粗調(diào)節(jié)器、細(xì)調(diào)節(jié)器等部件。它起著支持、調(diào)節(jié)、固定等作用。2顯微鏡的放大倍數(shù)和分辨率（1）放大倍數(shù)=接物鏡放大倍數(shù)接目鏡放大倍數(shù)（2）顯微鏡的分辨率：表示顯微鏡辨析物體（兩端）兩點(diǎn)之間距離的能力，可用公式表示為：D=λ/2nsin(α/2 ) 式中D：物鏡分辨出物體兩點(diǎn)間的最短距離。 λ：可見(jiàn)光的波長(zhǎng)（）n: 物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折射率。a：鏡口角（即入射角）。3油鏡使用的原理油鏡，即油浸接物鏡。當(dāng)光線由反光鏡通過(guò)玻片與鏡頭之間的空氣時(shí)，由于空氣與玻片的密度不同，使光線受到曲折，發(fā)生散射，降低了視野的照明度。若中間的介質(zhì)是一層油（其折射率與玻片的相近），則幾乎不發(fā)生折射，增加了視野的進(jìn)光量，從而使物象更加清晰。三、實(shí)驗(yàn)材料 1顯微鏡、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、鑷子、酒精燈、火柴、玻璃鉛筆、蒸餾水等。2枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌的玻片染色標(biāo)本。四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟（1）用前檢查：零件是否齊全，鏡頭是否清潔。（2）調(diào)節(jié)光亮度。（3）低倍鏡觀察：先粗調(diào)再微調(diào)至物象清晰。（4）轉(zhuǎn)入中倍、高倍觀察，每一不只需調(diào)微調(diào)旋紐即可看到清晰的物象。（5）油鏡觀察：高倍鏡下找到清晰的物象后，旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)換器，在標(biāo)本中央滴一滴香柏油，使油鏡鏡頭浸入香柏油中，細(xì)調(diào)至看清物象為止。（6）繪出所觀察到的細(xì)菌形態(tài)圖像。（7）、換片：另?yè)Q新片觀察，必須從（3）步開(kāi)始操作。（8）、用后復(fù)原：觀察完畢，上懸鏡筒，先用擦鏡紙擦去油鏡頭上的香柏油，然后再用擦鏡紙沾取少量二甲苯擦去殘留的油，最后用擦鏡紙擦去殘留的二甲苯，后將鏡體全部復(fù)原。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告油鏡使用的原理 繪制細(xì)菌形態(tài)六、思考題1油鏡與普通物鏡在使用方法上有何不同？應(yīng)特別注意些什么？2使用油鏡時(shí)，為什么必須用鏡頭油？七、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1不準(zhǔn)擅自拆卸顯微鏡的任何部件,以免損壞。2鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證光潔度。3觀察標(biāo)本時(shí)，必須依次用低、中、高倍鏡，最后用油鏡。當(dāng)目視接目鏡時(shí)，特別在使用油鏡時(shí)，切不可使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。4觀察時(shí)，兩眼睜開(kāi)，養(yǎng)成兩眼能夠輪換觀察的習(xí)慣，以免眼睛疲勞，并且能夠在左眼觀察時(shí)，右眼注視繪圖。5拿顯微鏡時(shí)，一定要右手拿鏡臂，左手托鏡座，不可單手拿，更不可傾斜拿。6顯微鏡應(yīng)存放在陰涼干燥處，以免鏡片滋生霉菌而腐蝕鏡片。八、教學(xué)反饋實(shí)驗(yàn)二 細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖炀氄莆诊@微鏡油鏡的使用方法。學(xué)習(xí)染色的基本技術(shù)，二、實(shí)驗(yàn)原理簡(jiǎn)單染色的原理大多數(shù)微生物細(xì)胞質(zhì)是帶負(fù)電荷，簡(jiǎn)單染色時(shí)采用已知的、帶正電荷的堿性染料。染料適用于熱固定的涂片，染料與菌體細(xì)胞質(zhì)黏附使菌體著色。經(jīng)染色后的細(xì)菌細(xì)胞與背景形成鮮明對(duì)比。三、實(shí)驗(yàn)材料 1顯微鏡、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、鑷子、酒精燈、火柴、玻璃鉛筆、蒸餾水等。培養(yǎng)1218h的枯草芽孢桿菌和大腸桿菌以及金黃色葡萄球菌。簡(jiǎn)單染色液（美藍(lán)染色液、黑色素液或炭素墨水）四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟活菌制片觀察取一張干凈的載玻片，在其中央滴上一滴干凈的蒸餾水，取培養(yǎng)1218h的枯草芽孢桿菌一小環(huán)，在水滴上反復(fù)涂抹至菌體充分分散，蓋上蓋玻片，用吸水紙吸去多余的水分，按照油鏡的使用步驟，觀察草芽孢桿菌形態(tài)，邊觀察邊繪圖。簡(jiǎn)單染色(1) 涂片:取兩塊干凈的載玻片，各滴一小滴生理鹽水于載玻片中央，用無(wú)菌操作分別挑取金黃色葡萄球菌和大腸桿菌于二載玻片的水滴中（每一種菌制一片），調(diào)勻并涂成薄膜。注意滴生理鹽水時(shí)不宜過(guò)多，涂片必須均勻。(2) 干燥：自然氣干或酒精燈高處微微加熱。(3) 固定:于火焰上通過(guò)2—3次。(4) 染色：在整個(gè)涂面上滴加齊氏石炭酸復(fù)紅，染色１分鐘。（5）水洗：傾去染液，用自來(lái)水細(xì)流沖洗至流下的水中無(wú)染料顏色為止。（6）干燥：空氣中自然干燥或在酒精燈高處微微加熱。（7）鏡檢：在油鏡下觀察細(xì)菌形態(tài)。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告油鏡使用的原理 繪制細(xì)菌形態(tài)六、思考題1鏡檢標(biāo)本時(shí)，為什么先用低倍鏡觀察，而不是直接用高倍鏡或油鏡觀察？2根據(jù)實(shí)驗(yàn)體會(huì)，你認(rèn)為制備染色標(biāo)本時(shí)，應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？七、教學(xué)反饋 實(shí)驗(yàn)三 細(xì)菌的革蘭氏染色一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握革蘭氏染色。2了解革蘭氏染色法的原理及其在細(xì)菌分類鑒定中的重要性。二、實(shí)驗(yàn)原理1 革蘭氏染色的原理革蘭氏陽(yáng)性菌的細(xì)胞壁主要有肽聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成，在染色過(guò)程中，當(dāng)用95%乙醇處理時(shí)，由于脫水而引起網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中的孔徑變小，細(xì)胞壁的通透性降低，使結(jié)晶紫碘復(fù)合物被保留在細(xì)胞壁內(nèi)而不易脫色，因此呈藍(lán)紫色。革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁中肽聚糖含量低，脂類物質(zhì)含量高，當(dāng)用乙醇處理時(shí)，脂類物質(zhì)溶解，細(xì)胞壁的通透性增加，使結(jié)晶紫碘復(fù)合物容易被乙醇抽提出來(lái)而脫色，然后又被染上了復(fù)染劑的顏色，因此呈現(xiàn)紅色。三、實(shí)驗(yàn)材料1大腸桿菌24h的斜面培養(yǎng)物。2葡萄球菌24h的斜面培養(yǎng)物。4革蘭氏染色液
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