微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教案-閱讀頁(yè)
2025-05-12 13:20本頁(yè)面
【正文】 與初發(fā)酵實(shí)驗(yàn)相同，經(jīng)24小時(shí)培養(yǎng)產(chǎn)酸又產(chǎn)氣的，最后確定為大腸菌群陽(yáng)性結(jié)果。2)器材：滅菌三角瓶，滅菌的具塞三角瓶，滅菌平皿，滅菌吸管，滅菌試管等。四、實(shí)驗(yàn)方法1)自來(lái)水：先將自來(lái)水龍頭用酒精燈火焰灼燒滅菌，再開放水龍頭使水流5min，以滅菌三角瓶接取水樣以備分析。 2)池水、河水、湖水等地面水源水：在距岸邊5m處，取距水面1015cm的深層水樣，先將滅菌的具塞三角瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛滿后，將瓶塞蓋好，再?gòu)乃腥〕觥?1)水樣稀釋及培養(yǎng)： ⑦根據(jù)對(duì)水樣污染情況的估計(jì)，選擇23個(gè)適宜稀釋度(飲用水如自來(lái)水、深井水等，一般選擇1:10兩種濃度；水源水如河水等，比較清潔的可選擇1:1:100、1:1000三種稀釋度；污染水—被選擇1:100、1:1000、1:10000三種稀釋度)，吸取1mL稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度作3個(gè)重復(fù)。 ③將熔化后保溫度45℃的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基倒平皿，每皿約15mL，并趁熱轉(zhuǎn)動(dòng)平皿混合均勻。 ④待瓊脂凝固后，將平皿倒置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24177。 作平板計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。①平板菌落數(shù)的選擇：一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)重復(fù)時(shí)，應(yīng)選取兩個(gè)平板的平均數(shù)。若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，可計(jì)算半個(gè)平板后乘2以代表整個(gè)平板的菌落數(shù)。 ②稀釋度的選擇：a. 應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30300之間的稀釋度，乘以該稀釋倍數(shù)報(bào)告之(表1例1)。 b．若有兩個(gè)稀釋度，其生長(zhǎng)的菌落數(shù)均在30300之間，則視二者之比如何來(lái)決定。c．若所有稀釋度的平均菌落均大于300，則應(yīng)按稀釋倍數(shù)最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(l例4)。e. 若所有稀釋度均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之（表1例6)。 f. 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30300之間，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以該稀釋倍數(shù)報(bào)告之(表l例7)。 ③細(xì)菌總數(shù)的報(bào)告：為了縮短數(shù)字后面的0的個(gè)數(shù)，可用10的指數(shù)來(lái)表示，如表1“報(bào)告方式”一欄所示。搖勻后，37℃下培養(yǎng)24小時(shí)，24小時(shí)未產(chǎn)氣的繼續(xù)培養(yǎng)至48小時(shí)。⑴深紫黑色、有金屬光澤。 復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn) 經(jīng)涂片、染色、鏡檢，如為革蘭氏染色陰性無(wú)芽孢桿菌，則挑取該菌落的另一部分，重新接種于普通濃度的乳糖蛋白胨發(fā)酵管中，每管可接種來(lái)自同一初發(fā)酵管的同類型菌落13個(gè)，37℃下培養(yǎng)24小時(shí)，結(jié)果若產(chǎn)酸又產(chǎn)氣，即證實(shí)有大腸菌群存在。 表一 接種水樣總量300ml(100ml2份、10ml10份) 100ml水量陽(yáng)性管數(shù)10ml水量陽(yáng)性管數(shù) 0 1 2每升水樣中大腸菌群數(shù)每升水樣中大腸菌群數(shù)每升水樣中大腸菌群數(shù)03411138182713273111838414245251830706223692727431208315116193660230104069230 （二）、池水、河水或湖水等的檢查： 將水樣稀釋成101與102。另取10ml和100ml原水樣，分別注入裝有5ml和50ml三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管(瓶)中。 將100、(101)ml水樣的發(fā)酵管結(jié)果查表見表二：將(101)、(102) ml水樣的發(fā)酵管結(jié)果查表見表三：即得每升水樣中大腸菌群數(shù) 表二 (100、)接種水樣量(ml)每升水樣中大腸菌群數(shù)1001019+9+9+++18++19++22+23+++28++92++94+++180++230+++960+++2380++++2380 表三 ()接種水樣量(ml)每升水樣中大腸菌群數(shù)10190+90+90+95++180++190++220+230+++280++920++940+++1800++2300+++9600+++23800++++23800“+”發(fā)酵陽(yáng)性、“”發(fā)酵陰性表 1 稀釋度的選擇及細(xì)菌數(shù)報(bào)告方式 查表二得每升水樣中大腸菌群是多少？ 查表三得每升水樣中大腸菌群是多少？ 思考題： p188(13)六、教學(xué)反饋
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