20xx年醫(yī)學(xué)專題—第五章菌落總數(shù)和大腸菌群的檢驗(yàn)-文庫吧
2024-11-13 18:02 本頁面
【正文】 50。)儀。 3.12 無菌刀、剪子、鑷子等。,第十二頁，共五十六頁。,4 培養(yǎng)基和試劑(sh236。j236。),4.1 平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基 (Plate count agar PCA)，pH ＝7.0177。0.2 4.2 磷酸鹽緩沖稀釋液，pH ＝7.2 4.3 無菌生理鹽水(shēnglǐy225。nshuǐ) ：稱取8.5g氯化鈉溶于1000mL蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min。 4.4 75%乙醇。,第十三頁，共五十六頁。,細(xì) 菌 學(xué) 檢 驗(yàn) 程 序 細(xì)菌總數(shù)(zǒngsh249。) 第一法 平板菌落計(jì)數(shù)法,第十四頁，共五十六頁。,操作步驟,6.1.1 固體和半固體食品：以無菌操作稱取25g樣品，放入于裝有225 mL磷酸鹽緩沖稀釋液或0.85％生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，于8000r/min～10000 r/min均質(zhì)1min～2min，制成1:10樣品勻液；或放入于225 mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min制成1:10的樣品勻液。 6.1.2 液體樣品：以無菌吸管吸取樣品25mL放入裝有225mL磷酸鹽緩沖稀釋液或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)(sh236。d224。ng)數(shù)量的無菌玻璃珠)中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液（表面取樣的樣品按一定的比例制成1:1樣品勻液和/或1:10樣品勻液。）。,6.1 樣品(y224。ngpǐn)的稀釋,第十五頁，共五十六頁。,6.1.3 用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1.0 mL，沿管壁緩慢注于裝有9mL稀釋液的無菌試管中（注意吸管尖端不要觸及稀釋液），振搖試管或換用1支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。 6.1.4 另取1mL無菌吸管或微量移液器吸頭，按上述操作順序，做10倍遞增樣品勻液，如此每遞增稀釋一次，即換用1次1mL滅菌吸管或吸頭。 6.1.5 根據(jù)對樣品污染情況的估計(jì)，選擇2～3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），分別在做10倍遞增稀釋的同時(shí)，吸取1.0 mL樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí)分別取1mL稀釋液加入兩個(gè)無菌平皿作空白對照。 6.1.6 樣品勻液移入平皿后，應(yīng)及時(shí)將涼至46℃平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(可放置于46℃177。1℃恒溫水浴(shuǐ y249。)箱中保溫)注入平皿約15mL～20mL，并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。同時(shí)將平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1.0 mL空白稀釋液的無菌平皿內(nèi)作對照。,第十六頁，共五十六頁。,6.2 培養(yǎng)(p233。iyǎng),6.2.1 瓊脂凝固后，將平板(p237。ngbǎn)翻轉(zhuǎn)，36℃177。1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h177。2h。水產(chǎn)品采用30℃177。1℃培養(yǎng)72h177。3h(08新增)。 6.2.2 瓊脂凝固后，如果懷疑樣品中含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時(shí)，可在表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約4mL），并在報(bào)告上記錄該操作，待覆蓋層凝固，翻轉(zhuǎn)平板，按6.2.1條件進(jìn)行操作,第十七頁，共五十六頁。,6.3 菌落(jūnlu242。)計(jì)數(shù),可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器，記錄相應(yīng)(xiāngyīng)的菌落數(shù)量和稀釋倍數(shù)。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位（colony forming units,CFU）表示。 6.3.1 平板菌落數(shù)的選擇 選取菌落數(shù)在30CFU～300CFU個(gè)之間、無蔓延菌落生長的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于30CFU個(gè)菌落的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300的可記錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板平均數(shù)。,第十八頁，共五十六頁。,6.3.2 其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘2，代表全平板菌落數(shù)。 6.3.3 當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線(ji232。xi224。n)的鏈狀生長時(shí)，即將每條鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。如有鏈狀菌落生長時(shí)(菌落之間無明顯界線)，若僅有一條鏈，可視為一個(gè)菌落；如果有不同來源的幾條鏈，則應(yīng)將每條鏈作為一個(gè)菌落計(jì)。,第十九頁，共五十六頁。,平皿分4部分點(diǎn)數(shù)（見圖） 求同一稀釋度的平均(p237。ngjūn)菌落數(shù) 如： A1數(shù) + A2數(shù) 2,,,,,,,,,6.菌落(jūnlu242。)計(jì)數(shù)方法,第二十頁，共五十六頁。,1.若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)(b232。ish249。)，作為每克（毫升）中菌落總數(shù)結(jié)果。 2.若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)（30～300個(gè)菌落）時(shí)，按如下公式計(jì)算： N= ∑C/(n1 +0.1n2)d 式中： N — 樣品中菌落數(shù)； ∑C — 平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和； n1 — 第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)； n2 — 適宜范圍菌落數(shù)的第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)； d — 稀釋因子（第一稀釋度）；,7. 結(jié)果(jiē guǒ)的表述,7.1菌落(jūnlu242。)總數(shù)的計(jì)算方法：,第二十一頁，共五十六頁。,示例： 稀釋度 1:100（第一稀釋度） 1:1000（第二稀釋度） 菌落數(shù) 232，244
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