20xx年醫(yī)學(xué)專題—第五章菌落總數(shù)和大腸菌群的檢驗-資料下載頁
2024-11-13 18:02本頁面
【正文】 5 mL～20 mL冷至46 ℃的結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）約傾注于每個平皿中。小心旋轉(zhuǎn)平皿，將培養(yǎng)基與樣液充分混勻，待瓊脂凝固后，再加3 mL～4 mLVRBA覆蓋平板表層。翻轉(zhuǎn)平板，置于36 ℃177。1 ℃培養(yǎng)18 h～24 h。,第四十三頁，共五十六頁。,8.3 平板菌落(jūnlu242。)數(shù)的選擇,選取菌落(jūnlu242。)數(shù)在15 CFU～150 CFU 之間的平板，分別計數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑大腸菌群菌落。 典型菌落為紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑為0.5 mm 或更大。,第四十四頁，共五十六頁。,8.4 證實(zh232。ngsh237。)試驗,從VRBA 平板上挑取10 個不同類型的典型和可疑菌落，分別移種于BGLB 肉湯管內(nèi)，36 ℃177。1 ℃培養(yǎng)24 h～48 h，觀察產(chǎn)氣情況。凡BGLB 肉湯管產(chǎn)氣，即可報告(b224。og224。o)為大腸菌群陽性。,第四十五頁，共五十六頁。,8.5 大腸菌群平板(p237。ngbǎn)計數(shù)的報告,經(jīng)最后證實為大腸菌群陽性的試管比例乘以8.3中計數(shù)的平板菌落數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，即為每g（mL）樣品中大腸菌群數(shù)。例：104 樣品稀釋液1 mL，在VRBA平板上有100個典型和可疑菌落，挑取其中(q237。zhōng)10個接種BGLB肉湯管，證實有6個陽性管，則該樣品的大腸菌群數(shù)為：1006/10104/g（mL）=6.0105CFU/g（mL）。,第四十六頁，共五十六頁。,8.6 培養(yǎng)基和試劑(sh236。j236。),第四十七頁，共五十六頁。,A.1 月桂(yu232。 ɡu236。)基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯,A.1.1 成分(ch233。ng f232。n) 胰蛋白胨或胰酪胨 20.0 g 氯化鈉 5.0 g 乳糖 5.0 g 磷酸氫二鉀（K2HPO4） 2.75 g 磷酸二氫鉀（KH2PO4） 2.75 g 月桂基硫酸鈉 0.1 g 蒸餾水 1 000 mL pH 6.8177。0.2 A.1.2 制法 將上述成分溶解于蒸餾水中，調(diào)節(jié) pH。分裝到有玻璃小倒管的試管中，每管10 mL。121 ℃高壓 滅菌15 min。,第四十八頁，共五十六頁。,A.2 煌綠乳糖(rǔ t225。nɡ)膽鹽（BGLB）肉湯,A.2.1 成分 蛋白胨 10.0 g 乳糖 10.0 g 牛膽粉（oxgall或oxbile）溶液 200 mL 0.1%煌綠水溶液 13.3 mL 蒸餾水 800 mL pH 7.2177。0.1 A.2.2 制法 將蛋白胨、乳糖溶于約500 mL蒸餾水中，加入牛膽粉溶液200 mL（將20.0 g脫水牛膽粉溶于200 mL 蒸餾水中，調(diào)節(jié)(ti225。oji233。)pH至7.0～7.5），用蒸餾水稀釋到975 mL，調(diào)節(jié)pH，再加入0.1%煌綠水溶液13.3 mL， 用蒸餾水補足到1 000 mL，用棉花過濾后，分裝到有玻璃小倒管的試管中，每管10 mL。121 ℃高壓滅 菌15 min。,第四十九頁，共五十六頁。,A.3 結(jié)晶紫中性(zhōngx236。ng)紅膽鹽瓊脂（VRBA）,A.3.1 成分 蛋白胨 7.0 g 酵母膏 3.0 g 乳糖 10.0 g 氯化鈉 5.0 g 膽鹽或3號膽鹽 1.5 g 中性紅 0.03 g 結(jié)晶紫 0.002 g 瓊脂 15 g～18 g 蒸餾水 1 000 mL pH 7.4177。0.1 A.3.2 制法 將上述成分溶于蒸餾水中，靜置幾分鐘，充分攪拌，調(diào)節(jié)pH。煮沸2 min，將培養(yǎng)基冷卻至45 ℃～50 ℃傾注平板。使用前臨時制備(zh236。b232。i)，不得超過3 h。,第五十頁，共五十六頁。,A.5 無菌生理鹽水 A.5.1 成分 氯化鈉 8.5 g 蒸餾水 1 000 mL A.5.2 制法 稱取8.5ｇ氯化鈉溶于1 000 mL蒸餾水中，121 ℃高壓滅菌15 min。 A.6 1 mol/L NaOH A.6.1 成分 NaOH 40.0 g 蒸餾水 1000 mL A.6.2 制法 稱取40 g氫氧化鈉溶于1 000 mL蒸餾水中，121 ℃高壓滅菌15 min。 A.7 1 mol/L HCl A.7.1 成分 HCl 90 mL 蒸餾水 1 000 mL A.7.2 制法 移取濃鹽酸(y225。n suān)90 mL，用蒸餾水稀釋至1 000 mL，121 ℃高壓滅菌15 min。,第五十一頁，共五十六頁。,GB/T 4789.32003,第五十二頁，共五十六頁。,第五十三頁，共五十六頁。,第五十四頁，共五十六頁。,結(jié)果(jiē guǒ)報告,第五十五頁，共五十六頁。,內(nèi)容(n232。ir243。ng)總結(jié),菌落總數(shù)與大腸菌群的測定。3.1 恒溫培養(yǎng)箱：36℃177。1℃ 30℃177。1℃。3.2 冰箱：2℃～5℃。3.3 恒溫水浴箱：46℃177。1℃。6.2.1 瓊脂凝固后，將平板(p237。ngbǎn)翻轉(zhuǎn)，36℃177。1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h177。2h。水產(chǎn)品采用30℃177。1℃培養(yǎng)72h177。3h(08新增)。每遞增稀釋1 次，換用1 支1 mL 無菌吸管或吸頭,第五十六頁，共五十六
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