20xx年醫(yī)學專題—第五章菌落總數(shù)和大腸菌群的檢驗(已改無錯字)
2024-11-13 18 本頁面
【正文】 了標準的中英文名稱； ——“第二法大腸菌群平板計數(shù)法”的平板菌落數(shù)的選擇(xuǎnz233。)范圍修改為“15 CFU～150 CFU”； ——刪除了“第三法大腸菌群PetrifilmTM 測試片法”。,第三十一頁，共五十六頁。,二、 細 菌 學 檢 驗 程序(ch233。ngx249。)大腸菌群,GB 4789.32010,第三十二頁，共五十六頁。,GB 4789.32003,第三十三頁，共五十六頁。,3.設(shè)備(sh232。b232。i)和材料,3.1 恒溫培養(yǎng)箱：36 ℃177。1 ℃。 3.2 冰箱(bīngxiāng)：2 ℃～5 ℃。 3.3 恒溫水浴箱：46 ℃177。1 ℃。 3.4 天平：感量0.1 g。 3.5 均質(zhì)器。 3.6 振蕩器。 3.7 無菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸頭。 3.8 無菌錐形瓶：容量500 mL。 3.9 無菌培養(yǎng)皿：直徑90 mm。 3.10 pH 計或pH 比色管或精密pH 試紙。 3.11 菌落計數(shù)器。,第三十四頁，共五十六頁。,4.培養(yǎng)基和試劑(sh236。j236。),4.1 月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉湯 4.2 煌綠乳糖膽鹽（Brilliant Green Lactose Bile，BGLB）肉湯 4.3 結(jié)晶紫中性(zhōngx236。ng)紅膽鹽瓊脂（Violet Red Bile Agar，VRBA） 4.4 磷酸鹽緩沖液 4.5 無菌生理鹽水 4.6 無菌1 mol/L NaOH 4.7 無菌1 mol/L HCl,第三十五頁，共五十六頁。,6.1 樣品的稀釋(xīsh236。) 6.1.1 固體和半固體樣品：稱取25 g 樣品,放入盛有225 mL 磷酸鹽緩 沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi), 8000 r/min～10000 r/min 均質(zhì)1 min～2 min,或放入盛有225 mL 磷酸 鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)袋 中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min～2 min，制成1:10 的樣品勻液。 6.1.2 液體樣品：以無菌吸管吸取25 mL 樣品置盛有225 mL 磷酸鹽緩 沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預(yù)置適當數(shù)量的無菌玻璃珠）中， 充分混勻，制成1:10 的樣品勻液。,6 操作步驟,第三十六頁，共五十六頁。,6.1.3 樣品(y224。ngpǐn)勻液的pH 值應(yīng)在6.5～7.5 之間，必要時分別用1 mol/L NaOH 或1 mol/L HCl 調(diào)節(jié)。 6.1.4 用1 mL 無菌吸管或微量移液器吸取1:10 樣品勻液1 mL，沿管壁緩緩注入9 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1 支1 mL 無菌吸管反復(fù)吹打，使其混合均勻，制成1:100 的樣品勻液。 6.1.5 根據(jù)對樣品污染狀況的估計，按上述操作，依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1 次，換用1 支1 mL 無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全過程不得超過15 min。,第三十七頁，共五十六頁。,6.2 初發(fā)酵(fā ji224。o)試驗,每個樣品，選擇3個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選擇原液），每個稀釋度接種3管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯/乳糖膽鹽發(fā)酵管，每管接種1mL（如接種量超過1 mL，則用雙料LST肉湯），36℃177。1 ℃培養(yǎng)24 h177。2 h，觀察倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生，24 h177。2 h產(chǎn)氣者進行(j236。nx237。ng)復(fù)發(fā)酵試驗，如未產(chǎn)氣則繼續(xù)培養(yǎng)至48 h177。2 h，產(chǎn)氣者進行復(fù)發(fā)酵試驗。未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性。 2003版增加分離培養(yǎng):伊紅美藍瓊脂平板(36℃177。1 ℃, 24 h177。2 h),第三十八頁，共五十六頁。,操作(cāozu242。)示意圖,,,,,,1mL,1mL,1mL,101,102,103,104,10mL,10mL,10mL,1mL,1mL,1mL,1mL,1mL,1mL,,空白(k242。ngb225。i),S1,S2,1mL,1mL,1mL,滅菌(mi232。 jūn)生理鹽水,雙料,復(fù)發(fā)酵 (BGLB/乳糖發(fā)酵管),陽性管進行,,伊紅美藍瓊脂,第三十九頁，共五十六頁。,6.3 復(fù)發(fā)酵(fā ji224。o)試驗,用接種環(huán)從產(chǎn)氣的LST肉湯管中分別取培養(yǎng)物1環(huán)，移種于煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）管/乳糖發(fā)酵(fā ji224。o)管中，36 ℃177。1℃培養(yǎng)48 h177。2 h，觀察產(chǎn)氣情況。產(chǎn)氣者，計為大腸菌群陽性管。,第四十頁，共五十六頁。,6.4 大腸菌群最可能(kěn233。ng)數(shù)（MPN）的報告,按6.3確證的大腸菌群LST陽性管數(shù)，檢索MPN表（見附錄(f249。l249。)B），報告每g（mL）樣品中大腸菌群的MPN值。,第四十一頁，共五十六頁。,第四十二頁，共五十六頁。,8.1 樣品的稀釋 按6.1進行。 8.2 平板計數(shù) 8.2.1 選取2個～3個適宜的連續(xù)稀釋度, 每個稀釋度接種2個無菌平皿，每皿1 mL。同時取1 mL生理鹽水加入無菌平皿作空白對照。 8.2.2 及時(j237。sh237。)將1
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