《質(zhì)粒提取方法》ppt課件-文庫(kù)吧
2025-04-18 18:24 本頁(yè)面
【正文】 使其裂解。加熱除了破壞細(xì)胞壁外，還有助于解開(kāi)DNA鏈的堿基配對(duì)，并使蛋白質(zhì)和染色體DNA變性。但是，閉環(huán)質(zhì)粒 DNA彼此不會(huì)分離，這是因?yàn)樗麄兊牧姿岫ス羌芫哂谢ハ嗬p繞的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，當(dāng)溫度下降后，閉環(huán) DNA的堿基又各自就位，形成超螺旋分子，離心除去變性的染色體核蛋白質(zhì)，就可從上清中回收質(zhì)粒 DNA 由于細(xì)菌染色體 DNA比質(zhì)粒大得多 ,受機(jī)械力后細(xì)菌染色體 DNA會(huì)被震斷成不同大小的線性片段而纏繞附著在細(xì)胞碎片上，并發(fā)生變性。同樣受機(jī)械力質(zhì)粒DNA會(huì)變性，機(jī)械力后復(fù)性。但質(zhì)粒 DNA的復(fù)性要快于細(xì)菌染色體 DNA。 小量一步提取法： 從細(xì)菌中分離質(zhì)粒 DNA的方法都包括3個(gè)基本步驟 : 培養(yǎng)細(xì)菌使質(zhì)粒擴(kuò)增 收集和裂解細(xì)胞 分離和純化質(zhì)粒 DNA 材料、設(shè)備及試劑 一、材料 含卡那酶素的 E. coli DH5α， (又稱eppendorf管 ), 離心管架。 二、設(shè)備 微量取液器 (20μl,200μl,1000μl)， 臺(tái)式高速離心機(jī)，恒溫振蕩搖床， 高壓蒸汽消毒器 (滅菌鍋 )， 渦旋振蕩器， 電泳儀，瓊脂糖平板電泳裝置和 恒溫水浴鍋等。 三、試劑 LB液體培養(yǎng)基 (LuriaBertani) ：稱取蛋白胨 (Tryptone)10 g，酵母提取物 (Yeast extract) 5 g， NaCl 10 g，溶于 800ml去離子水中，用 NaOH調(diào)pH至 , 加去離子水至總體積 1升 ,高壓下蒸氣滅菌 20分鐘。 LB固體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基中每升加 12g瓊脂粉 ,高壓滅菌。 氨芐青霉素 (Ampicillin, Amp)母液：配成 50mg/ml水溶液 , 20℃ 保存?zhèn)溆谩? 溶菌酶溶液： 用 10mmol/L TrisCl()溶液配制成 10mg/ml,并分裝成小份 (如 )保存于 20℃ ,每一小份一經(jīng)使用后便予丟棄。 3mol/l NaAc ()： 50ml水中溶解 NaAc3H2 O,用冰醋酸調(diào) pH至 ,
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