質(zhì)粒dna制備-文庫吧
2025-07-17 14:25 本頁面
【正文】 子是從細胞內(nèi)的質(zhì)粒庫中隨機選取出來進行復(fù)制的 ， 所以兩個不同的質(zhì)粒在一個單細胞中的拷貝數(shù)并不總能保持相同 。 最初在隨機過程中產(chǎn)生的微小差異 ，將很快導(dǎo)致兩種質(zhì)粒在拷貝數(shù)上更嚴重地失衡 。 ? 在一些細胞中 ， 一種質(zhì)粒處于優(yōu)勢 ， 而在另一些細胞中 ， 與之不相容的另一種質(zhì)粒卻占盡上風(fēng) 。 細菌生長幾代之后 ， 占少數(shù)的質(zhì)粒將會喪失殆盡 ， 在原始細胞的后代中可含有兩種質(zhì)粒中的任意一種 ， 但不會兼而有之 。 ? 通過檢查不同質(zhì)粒在同一細胞中共存的能力，可以把它們分為若干不相容組。帶有相同復(fù)制子的質(zhì)粒屬于同一不相容組，而帶有不可互換成分的復(fù)制子的質(zhì)粒則屬于不同的不相容組?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn) 30多個這樣的不相容組。 4. 轉(zhuǎn)移性 ? 在自然條件下，很多質(zhì)粒都可以通過一種稱為細菌接合的作用轉(zhuǎn)移到新宿主內(nèi)。 5. 選擇的標記 ? 質(zhì)粒應(yīng)帶有一個或幾個可供選擇的標記，便于對轉(zhuǎn)化株的篩選。 ? 常用來作為標記的有氨芐青霉素抗性(ampicillin resistance， ampr)基因，此基因編碼 β — 內(nèi)酰胺酶，該酶能水解氨芐青霉素的 β — 內(nèi)酰胺環(huán)使之失效，從而賦予細菌抗藥性。 ? 另一常用的抗藥性基因為四環(huán)素抗性(tetracycline resistance， tetr)基因，該基因編碼一種含 399氨基酸殘基的膜相關(guān)蛋白質(zhì)，能阻止四環(huán)素進入細胞。 ? ampr基因或 tetr基因若被外源基因插入，便失去相應(yīng)的抗藥性，便于分子克隆的篩選。 ? 大腸桿菌的 lac Z基因也常被用作為選擇的標記 ，此基因編碼半乳糖苷酶 ， 能分解一種有色基因(x)與半乳糖以糖苷鍵連結(jié)成的化合物 xgal。 ? 半乳糖苷酶 ? Xgal X + gal ? 無色 藍色產(chǎn)物 半乳糖 ? ? 若在含有 Xgal的培養(yǎng)劑中，在乳糖操縱子 (lac operon)誘導(dǎo)物異丙硫半乳糖苷(isopropylthiogalactoside， IPTG)的作用下，細菌合成半乳糖苷酶，分解 X— gal，此菌落成為藍色。 ? 若 lacZ基因被外源 DNA片斷插入而破壞，則不能制造半乳糖苷酶，菌落為白斑。 6. 限制性內(nèi)切酶單一切口 ? 在質(zhì)粒復(fù)制子以外的部位具有一種或多種限制性內(nèi)切酶的單一切口，便于外源基因的插入。 ? 若這種單一的限制性內(nèi)切酶位點處于選擇標記基因的內(nèi)部，外源基因片斷插入后會導(dǎo)致該基因失活便于篩選。 三、常用 質(zhì)粒載體
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