質粒dna制備-展示頁
2024-08-16 14:25本頁面
【正文】 ? 質粒是攜帶外源基因進入細菌中擴增或表達的重要媒介物，這種基因運載工具在基因工程中具有極廣泛的應用價值，而質粒的分離與提取則是最常用、最基本的實驗技術． 二、 質粒特性 1. 分子相對小 ? 在 5kb左右，質粒較小，比較穩(wěn)定，不易受物理因素的損傷，此外，較小的質粒一般有較高的拷貝數。 通常 ， 質粒含有編碼某些酶的基因 ， 這些酶事實上在一定的環(huán)境下對細菌宿主有利 。 ? 確切地說 ， 質粒是細菌內的共生型遺傳因子 ， 它能在細菌中垂直遺傳并且賦予宿主細胞表型 ， 是比病毒更簡單的原始生命 。 ? 質粒通過細菌間的接合作用 ， 從雄性體轉移到雌性體 ， 是細菌有性繁殖的性因子 ． ? 1946年 ， Lederburg和 Fatum發(fā)現的 F因子是最早發(fā)現的質粒 ， F因子與高等生物細胞質中的染色體外遺傳單位極為相似 。質粒 DNA制備 一、質粒簡介 ? 質粒是細菌內獨立于染色體并能自我復制的小環(huán)狀 DNA分子 ? 其大小范圍從 lkb至 200kb以上不等 。 ? 已經在形形色色的細菌類群中發(fā)現質粒 . ? 這些質粒都是獨立于細菌染色體之外進行復制和遺傳的輔助性遺傳單位 。 ? 1952年 ， 由 Lederburg正式命名為質粒 。 ? 質粒 依賴于宿主編碼的酶和蛋白質來進行復制和轉錄 。 ? 由質粒產生的表型包括對抗生素的抗性 、產抗生素 、 降解復雜有機化合物 ， 以及產生大腸桿菌素 、 腸毒素及限制酶與修飾酶等等 。 2. 含有高效的自主復制成分 ? 質粒的復制與宿主細胞的繁殖不相關，在抑制細菌蛋白質合成時，細菌染色體 DNA停止復制，但這種質粒可繼續(xù)利用細菌原有的酶系進行復制 ? 質粒含有復制起始點，此起始點及順式作用調控元件組成一個復制子 (replicon)，能利用細菌染色體 DNA復制所用的同一套酶系統(tǒng)，在細菌細胞中獨立地進行自我復制及轉錄。 ? 有些質粒則處于 “ 松弛控制 ” ，每個細胞可含達 1520乃至數百拷貝的質粒。 ? 利用同一復制系統(tǒng)的不同質粒不能穩(wěn)定地和平共處 ， 可稱之為不相容質粒 ， 當兩個上述質粒被導入同一細胞時 ， 它們在復制及隨后分配到子細胞的過程中彼此競爭 。 最初在隨機過程中產生的微小差異 ，將很快導致兩種質粒在拷貝數上更嚴重地失衡 。 細菌生長幾代之后 ， 占少數的質粒將會喪失殆盡 ， 在原始細胞的后代中可含有兩種質粒中的任意一種 ， 但不會兼而有之 。帶有相同復制子的質粒屬于同一不相容組，而帶有不可互換成分的復制子的質粒則屬于
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