【正文】 決定 。 交聯(lián)劑的百分比高 ， 交聯(lián)度大 ， 網狀結構愈緊密 ， 孔隙愈小 ， 吸水后膨脹也愈小 ， 機械強度高 ， 分離物質的分子量也小 。 反之 ,交聯(lián)劑的百分比低 ， 分離物質的分子量大 。 G類Sephadex的型號表示 每克干凝膠吸水量 ， 如 G50表示每克干凝膠吸水量為 5ml。 Sephadex的 化學性質穩(wěn)定 ，不溶于水、鹽、弱酸和堿， 耐熱耐堿不耐酸。 葡聚糖凝膠特點 它是一種 大孔凝膠 ， 其工作范圍的下限幾乎是 Sephadex的上限 ， 可分離 MW40萬以上 的物質 ， 因此可用來 分離核酸 及 病毒 。 瓊脂糖凝膠不帶電荷 ， 不受微生物作用而降解 ， 但對熱不穩(wěn)定 ， 易受 pH影響 (只在 。 瓊脂糖凝膠（商品名為 Sepharose) 使用 范圍及效果 同葡聚糖凝膠相似 ， 但化學性質較葡聚糖穩(wěn)定 ， 可在 pH 211范圍內使用 . 聚丙烯酰胺凝膠的商品為生物膠 P（ BioGel P） ， 由美國 BioRod廠生產 ， 型號很多 ，從 P2至 P300共 10種 ， P后面的數字再乘 1000就相當于該凝膠的排阻限度 。 聚丙烯酰胺凝膠 選擇何種凝膠以及它的型號 ， 這需要 根據實驗條件 ， 溶質的分子量大小和分離工作的目的而定 ， 每種型號凝膠都有一定分離溶質分子量的范圍 ， 選擇的型號凝膠要能 滿足實驗要求 。 凝膠的選擇 凝膠的排阻極限 ? 排阻極限 是指不能進入凝膠顆?？籽▋炔康淖钚》肿拥姆肿恿?。 所有大于排阻極限的分子都不能進入凝膠顆粒內部，直接從凝膠顆粒外流出， 所以它們同時被最先洗脫出來。 ? 排阻極限 代表一種凝膠能有效分離的最大分子量，大于這種凝膠的排阻極限的分子用這種凝膠不能得到有效分離。 例如 Sephadex G50的排阻極限為 30,000，它表示分子量大于 30,000的分子都將直接從凝膠顆粒之外被洗脫出來。 2022年中科院考研題 ? 今有 a、 b、 c、 d四種蛋白質，其分子體積由大到小的順序是 abcd，在凝膠過濾柱層析中，最先洗脫出來的蛋白質一般應該是（ ） ? A、 a ? B、 b ? C、 c ? D、 d 2022年中科院考研題 2022年上海師范大學考研題 ? 指出從分子排阻層析柱上洗脫下來下列蛋白質時的洗脫順序，為什么？分離蛋白質的范圍是5,000400,000。 ? 肌紅蛋白（馬心?。? 16900 ? 過氧化氫酶（馬肝） 247500 ? 細胞色素 c（牛心肌） 13370 ? 肌球蛋白（鱈魚?。? 524800 ? 糜蛋白酶原（牛胰） 23240 ? 血清清蛋白（人） 68500 如果被分離的蛋白質樣品中各個成分受溶液 pH的影響 ， 或帶 正電荷或帶負電荷 ， 因此可利用離子交換層析法進行分離 。 離子交換層析的固相是 離子交換體 ， 包括 離子交換樹脂 、 離子交換纖維素 、 離子交換葡聚糖 。 帶有 SO3－ 或 COO－ 基團 ， 通常以 SO3－ Na＋ 或COO－ H＋ 形式出現的叫做 陽離子交換基 ； 帶有 N＋ (C2H5)基團通常以 N＋ (C2H5) Cl－ 出現的叫做 陰離子交換基 。 離子交換層析 (ion exchange chromatography) 陽離子交換基 強酸性，聚苯乙烯樹脂 弱酸性，羧甲基纖維素 弱酸性，螯合作用，聚苯乙烯樹脂 陰離子交換基 強堿性，聚苯乙烯樹脂 弱堿性，二乙氨氨乙基纖維素 陽離子交換層析過程 離子交換樹脂 蛋白質 高離子強度洗脫液洗 高離子強度洗脫液洗 加樣 平衡液洗 收集 1998年上海交大考研題 ? 有一蛋白水解物，在 pH6時，用陽離子交換柱層析，第一個被洗脫出來的氨基酸是： ? Val (pI=), Lys (pI=) ? Asp (pI=), Arg (pI=) ? Tyr (pI=) 是一種 吸附 層析 ， 依賴于 蛋白質和它的配體（ ligand） 之間的相互作用來分離的 。 配體通常指的是能與另一個分子或原子結合 （ 一般是非共價結合 ） 的分子 、 基團 、 離子 、 或原子 。 但在親和層析中 ， 配體是通過 共價鍵先與基質結合 ， 配體可以是酶結合的一個反應物或產物 ， 或是一種可以識別靶蛋白的抗體 。 親和層析 (Affinity chromatography) 當蛋白質混合物通過裝有連接了配體的基質的親和層析柱時 ， 只有 靶蛋白可以特異地與基質結合 ， 而其它 沒有結合的蛋白質首先被洗脫下來 。 特異結合在基質上的靶蛋白最后可以用含有高濃度自由配體的溶劑洗下 。 所以有時只用親和層析就可使蛋白質的純化提高 1000至10000倍 。 原 理 親和層析過程 吸附本質 ：非共價連接 常用吸附劑 ：結晶磷酸鈣、硅膠等 脫附（洗脫）方式： 改變蛋白質帶電狀態(tài)； 改變環(huán)境溶液的 pH、離子強度等。 含配體溶液 收集目的蛋白 洗下未結合的蛋白 混合蛋白樣品 平衡液 帶有配體的樹脂珠（或膠粒） 優(yōu) 點 ? 親和層析純化 過程簡單 、 迅速 ，且 分離效率高 。對分離 含量極少又不穩(wěn)定的活性物質 尤為有效。但本法必須針對某一分離對象，制備專一的配基和尋求層析的穩(wěn)定條件，因此 親和層析的應用范圍受到了一定的限制 。 分配層析 ? 柱層析 ? 紙層析 ? 薄層層析 氣相色譜 (gas chromatograph, GC) ? 是利用樣品中個組分在色譜柱中的 氣相和固定相 間的 分配系數不同 達到分離的目的。 ? 當 汽化后的樣品 被 載氣 帶入色譜柱中運行時，組分就在其中的兩相間進行 反復多次的分配（吸附－脫附－放出） 由于固定相對各種組分的 吸附能力 不同，各組份在色譜柱中的 運行速度 就不同，經過一定的柱長后，便彼此分離，按順序離開色譜柱進入檢測器，產生的離子流信號經放大后，在記錄器上描繪出各組分的色譜峰。 氣相色譜分類 ? GC根據 固定相 不同又可分為 氣固色譜法 (GSC)和氣液色譜法 (GLC)，其中以 GLC應用最廣。液相色譜法適用于分離低揮發(fā)性或非揮發(fā)性、熱穩(wěn)定性差的物質。 當層析系統(tǒng)的流動相為氣體如氫、氦、氮，固相為涂漬在固體顆粒表面的液體時，此層析技術稱為氣液層析或氣液色譜 氣相色譜法的特點 應用范圍廣 ： 氣象色譜法可以分析氣體和易揮發(fā)的物質 高效： 可以分析沸點十分相近的組分，和極為復雜的多組份混合物。例如，用毛細管，可以分析輕油中 150個組份。 高選擇性：