實(shí)驗(yàn)八 親和層析分離純化蛋白質(zhì)(14)-文庫(kù)吧
2025-01-03 19:31 本頁(yè)面
【正文】 體收集 1． mmol/L IPTG誘導(dǎo)大腸桿菌中的蛋白表達(dá)， 28℃ ， 200 rpm培養(yǎng) 36 h。 2． 5000 rpm離心 5 min，倒掉上清。 3．沉淀加 40 ml水， 5000 rpm離心 5 min。 （二）細(xì)胞破碎 1．倒掉上清，加 30 ml PBS緩沖液懸浮菌體。 2．破碎菌體，超聲波 2 min，停止 1 min。 （菌液始終保持在冰浴中） 3．重復(fù) 810遍，直至菌液清澈。 （三）離心 1．每個(gè)小組分取 12 ml細(xì)胞破碎液， 12022 rpm，離心 5 min。 2．分取 50 uL上清液， 4℃ 保存。 3．其余的上清液準(zhǔn)備過(guò) GST柱子。 （四）裝 GST柱子 1．清洗和裝好層析柱，封閉出口。 2．加入 2 mL PBS。 3．用滴管取 ml GST填料，加入柱子中。 4．打開柱子出口，使 PBS緩慢流出。 注意：始終保持柱內(nèi)的液面高于 GST樹脂。 （五）純化目的蛋白 1．用 5 ml PBS緩沖液洗柱床，重復(fù) 3遍。 2．將混合蛋白質(zhì)溶液加到柱子中。 3．用 5 ml
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