標(biāo)記物及其與抗原抗體的結(jié)合物制備-文庫(kù)吧
2025-01-03 20:29 本頁(yè)面
【正文】 O HH O C HC O O HH O C H 22氧化二聚體 ALP底物 常用的 ALP色原底物 對(duì) 硝基苯磷酸鹽（ pnitrophenyl phosphate， PNP） 氯化硝基四氮唑藍(lán) / 5溴 4氯 3吲哚 磷酸鹽（nitro bluetetrazolium/5bromo4chloro3 indolyl phosphate， BCIP/ NBT） 4甲基傘形酮磷酸鹽（ 4methylumbelliferyl phosphate， 4MUP）是 ALP的發(fā)光底物之一 。 ALP的 底物 對(duì) 硝基苯磷酸酯（ pNPP ） 經(jīng) AP作用后的產(chǎn)物為黃色對(duì)硝基酚，最大吸收峰波長(zhǎng)為405 nm。 常用底物 BCIP/ NBT常用于 ELISPOT中的 PVDF膜顯色，在 ALP的催化作用下， BCIP被水解生成強(qiáng)反應(yīng)性的產(chǎn)物，該產(chǎn)物與 NBT發(fā)生反應(yīng)，形成不溶性的深藍(lán)色至藍(lán)紫色沉淀 4MUP被 AP催化生成 4甲基傘形酮，在 360nm的激發(fā)光的作用下，發(fā)出 450nm的熒光，可用熒光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)量。 熒光 AP 360nm 激發(fā)光 H3PO4 + β Gal 熒光底物 β Gal 的底物 4甲基傘酮基 β D半 乳糖苷（ 4MUG ） 酶作用后，生成高強(qiáng)度熒光物 ，用熒光計(jì)測(cè)量。 常用 4甲基傘酮基 β D半乳糖（ 4methylumbelliferyβ Dgalactoside， 4MUG）作為底物，酶促反應(yīng)后，產(chǎn)生高強(qiáng)度熒光物質(zhì) 4甲基傘形酮（4MU） 。 四、化學(xué)發(fā)光劑 在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中參與能量轉(zhuǎn)移并最終以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物，稱為 化學(xué)發(fā)光劑或發(fā)光底物 。 直接化學(xué)發(fā)光劑 酶促反應(yīng)發(fā)光劑 直接化學(xué)發(fā)光劑 直接化學(xué)發(fā)光劑 直接化學(xué)發(fā)光劑在發(fā)光免疫分析過程中不需酶的催化作用，直接參與發(fā)光反應(yīng)，它們?cè)诨瘜W(xué)結(jié)構(gòu)上有產(chǎn)生發(fā)光的特有基團(tuán)，可直接標(biāo)記抗原或抗體。 吖啶酯 在堿性條件下與 H2O2 就可產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象。在堿性介質(zhì)中氧化時(shí)，這些化合物經(jīng)歷共價(jià)鍵的斷裂，經(jīng)過一個(gè)二氧酮的中間體，產(chǎn)生電激發(fā)的 N甲基吖啶酮，當(dāng)它恢復(fù)到基態(tài)時(shí)，在 430nm出釋放出光子。 AE特性 化學(xué)發(fā)光反應(yīng)簡(jiǎn)單，無需催化劑，背景噪聲低 。 極其穩(wěn)定，如 2甲基吖啶酯，因其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)使其有效期長(zhǎng)達(dá) 1 年甚至更久 。 發(fā)光過程快速， 1秒內(nèi)光子散射達(dá)高峰，整個(gè)過程在 2秒內(nèi)完成 。 電化學(xué)發(fā)光劑 是指通過在電極表面進(jìn)行電化學(xué)反應(yīng)而發(fā)出光的物質(zhì)。 特點(diǎn)：①反應(yīng)在電極進(jìn)行； ②電子供體為：三丙胺（ TPA） ③化學(xué)發(fā)光劑：三聯(lián)毗啶釕 三聯(lián)毗啶釕 分子結(jié)構(gòu)圖 NNNN NNR uOONOO電化學(xué)發(fā)光劑 酶促反應(yīng)發(fā)光劑 酶促反應(yīng)發(fā)光劑： 是利用標(biāo)記酶的催化作用，使發(fā)光劑（底物）發(fā)光，這一類需酶催化后發(fā)光的發(fā)光劑稱為酶促反應(yīng)發(fā)光劑。 魯米諾及其衍生物 AMPPD 魯米諾及其衍生物 魯米諾發(fā)光原理 魯米諾及其衍生物 魯米諾增強(qiáng)發(fā)光反應(yīng)原理 AMPPD AMPPD 〔 3(2’ 螺旋金剛烷 )4甲氧基 4(3” 磷酰氧基 )苯 1,2二氧雜環(huán)丁烷 〕〕 五、量子點(diǎn) 量子點(diǎn) QDs 量子點(diǎn) (quantimim dots, QDs)即半導(dǎo)體納米粒子，是指半徑小于或接近于激子玻爾半徑的半導(dǎo)體納米晶粒（110nm） 。 由 IIVI族或 IIIV族元素組成，性質(zhì)穩(wěn)定，可接受激發(fā)光產(chǎn)生熒光，具有類似體相晶體的規(guī)整原子排布 。 廣義的量子點(diǎn)還包括 IVVI 族、 VVI 族元素組成的納米晶，以及金簇、銀簇、硅點(diǎn)、碳點(diǎn)、復(fù)合型熒光納米顆粒等 。 量子點(diǎn)的光學(xué)特性 熒光強(qiáng)度高，穩(wěn)定性好，抗漂白能力強(qiáng) 所謂光漂白是指由光激發(fā)引起發(fā)光物質(zhì)分解而使熒光強(qiáng)度降低的現(xiàn)象。有機(jī)熒光色素的光漂白速率很快，而量子點(diǎn)的光漂白作用則小得多 。 具有 “ 調(diào)色 ” 功能，一元激發(fā)多元發(fā)射 不同粒徑的量子點(diǎn)具有不同的顏色，可用同一波長(zhǎng)的光激發(fā)不同大小的量子點(diǎn)，獲得多種標(biāo)記顏色 。 激發(fā)光波長(zhǎng)寬，而發(fā)射光波長(zhǎng)窄 量子點(diǎn)的激發(fā)光波長(zhǎng)范圍很寬，具有較大的 Stokes位移和狹窄對(duì)稱的熒光譜峰 。 量子點(diǎn)調(diào)色功能 在紫外光激發(fā)下，相同組成不同粒徑的量子點(diǎn)的發(fā)射光譜 量子點(diǎn)的制備 大致分為兩種方法：物理制備法、化學(xué)合成法 。 物理制備法 可制得粒徑易控的量子點(diǎn)，但所需實(shí)驗(yàn)設(shè)備昂貴，廣泛使用受限 。 化學(xué)合成法 有水相和有機(jī)相合成法 有機(jī)相體系 可制備性能優(yōu)良的量子點(diǎn)，如 CdSe及 CdSe/ZnS。 量子點(diǎn)分散性好、穩(wěn)定性高、不易沉積，但水溶性太差 。 水相體系 操作簡(jiǎn)單、成本低廉、量子點(diǎn)表面形貌及性質(zhì)可控、易修飾各種基團(tuán) 。 量子點(diǎn)表面修飾 無機(jī)殼層修飾法和化學(xué)修飾法是兩種常用的量子點(diǎn)修飾方法 。 無機(jī)殼層修飾法 合成核 /殼結(jié)構(gòu)的量子點(diǎn)，如在 CdSe量子點(diǎn)的外面包覆一層 CdS 或 ZnS 就構(gòu)成了以 CdSe為核，以 CdS 或 ZnS 為殼的量子點(diǎn)。 化學(xué)修飾法 用含巰基的有機(jī)分子如二氫硫辛酸、巰基乙酸和聚乙二醇等對(duì)量子點(diǎn)進(jìn)行表面修飾 。 六、膠體金 膠體金（ colloidal gold） 也稱金溶膠，是金鹽被還原成金原子后形成的金顆粒懸液 。 膠體金顆粒由一個(gè)基礎(chǔ)金核 (原子金 Au)及包圍在外的雙離子層構(gòu)成 (內(nèi)層為負(fù)離子層 AuCl2，外層是帶正電荷的 H+)。 由于靜電作用，金顆粒之間相互排斥而懸浮成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液，故稱膠體金 。 膠體金特性 具有膠體的多種特性 特別是對(duì)電解質(zhì)的敏感性，電解質(zhì)能破壞膠體金顆粒的外周水化層，從而打破膠體金的穩(wěn)定狀態(tài) 。 膠體金顆粒大小不同，呈色不同，光吸
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