20xx年醫(yī)學(xué)專題—糖類及蛋白質(zhì)測定(精)-閱讀頁
2024-11-16 04:07本頁面
【正文】 糖、戊糖、糠醛酸等，得水溶性非消化性多糖 4 殘渣→酸解→乙醇沉淀→離心分離→水解液中和→測定已糖、戊糖、糠醛酸等，得水不溶性非消化性多糖 5 殘渣→高濃度低溫酸解→中和→抽濾分離→水解液中和→測定已糖、戊糖、糠醛酸等，得纖維素 6 殘渣→乙醇洗滌→干燥→灼燒→得木質(zhì)素含量。,167。nli224。2.1 概述 蛋白質(zhì)是一類存在于所有細胞中含量豐富的成分，除了儲備蛋白質(zhì)外，幾乎所有的蛋白質(zhì)對生物功能和細胞結(jié)構(gòu)都非常重要。蛋白質(zhì)分子質(zhì)量的變化范圍通常為5000—1000000u，它們包括氫、碳、氮、氧和硫等元素，20種常見α氨基酸是蛋白質(zhì)的主要構(gòu)成。如水解簡單蛋白質(zhì)只得到氨基酸，但結(jié)合類蛋白質(zhì)還含有非氨基酸成分。o s249。,第四十四頁，共六十二頁。 由于一些食品的組分具有相似的物化性質(zhì)而使得(shǐ de)對蛋白質(zhì)的分析變得非常復(fù)雜。 食品中其他主要成分包括脂類和碳水化合物可能會干擾食品蛋白質(zhì)的分析。這些方法的基本原理包括利用蛋白質(zhì)的氮、肽鍵、芳香族氨基酸和紫外吸收性質(zhì)以及游離基、光散射性質(zhì)和染色結(jié)合能力。,蛋白質(zhì)分析的重要性 (1)生物活性測定 一些蛋白質(zhì)包括酶或酶抑制因子和食品科學(xué)與營養(yǎng)有關(guān)，例如肉類嫩化中的蛋白酶、水果成熟中的果膠酶以及豆類中的胰蛋白酶抑制因子都是蛋白質(zhì)。zu242。 (3)營養(yǎng)標簽 ①總蛋白質(zhì)含量； ②氨基酸組成； ③混合物中的特定蛋白質(zhì)的含量； ④蛋白質(zhì)分離純化過程中的蛋白質(zhì)含量； ⑤非蛋白氮； ⑥蛋白質(zhì)的營養(yǎng)價值(消化率、蛋白質(zhì)功效比或氮平衡)。,食品(sh237。,第四十八頁，共六十二頁。 常用的方法為凱氏定氮法（粗蛋白質(zhì)測定） 此外，雙縮脲法、染料結(jié)合法、酚試劑法、NIR法等也常用于蛋白質(zhì)含量測定，因其方法簡便快速，多用于生產(chǎn)單位質(zhì)量控制分析。,第四十九頁，共六十二頁。2.2 蛋白質(zhì)的測定 一、常量凱氏定氮法 1 原理(yu225。由于非蛋白組分中也含有氮，所以此方法的分析結(jié)果為樣品中的粗蛋白含量。,2NH2 (CH2) 2COOH＋13H2SO4＝(NH4)2SO4+6CO2＋12SO2＋16H2O 2NaOH＋ (NH4)2SO4＝2NH3+ Na2SO4 +2H2O 2NH3+ H3BO3 ＝ (NH4)2B4O7 + 5 H2O (NH4)2B4O7 + 5 H2O + 2HCl＝2NH4Cl + 4H3BO3,第五十一頁，共六十二頁。o)儀器,第五十二頁，共六十二頁。) （3）滴定 4 結(jié)果計算,第五十三頁，共六十二頁。o)儀器,第五十四頁，共六十二頁。 取下放冷，小心加20ml水。 取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸按同一方法做試劑空白試驗。,（2）按裝定氮裝置 水蒸氣發(fā)生瓶內(nèi)裝水至約2/3處，加甲基紅指示液數(shù)滴及數(shù)毫升硫酸，加入數(shù)粒玻璃珠以防暴沸； 加熱煮沸水蒸氣發(fā)生瓶內(nèi)的水。 將10ml 40%氫氧化鈉溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其緩緩流入反應(yīng)室，立即(l236。)將玻塞蓋緊，并加水于小玻杯以防漏氣。 蒸餾5min，移動接受瓶，使冷凝管下端離開液面，再蒸餾1min。,第五十六頁，共六十二頁。 同時吸取10.0ml試劑空白消化液作空白試驗 5 結(jié)果計算 X——樣品中蛋白質(zhì)的含量，%； V1——樣品消耗(xiāoh224。,第五十七頁，共六十二頁。ngpǐn)中微量的蛋白質(zhì)。,第五十八頁，共六十二頁。)肽鍵，如雙縮脲、多肽和所有的蛋白質(zhì))生成的復(fù)合物呈紫紅色，吸收波長為540nm，比色所得的吸光度值和樣品中蛋白質(zhì)的含量成正比。試劑包括硫酸銅、氫氧化鈉和酒石酸鉀鈉以穩(wěn)定在堿性溶液中的銅離子； (2)混合液在室溫下放置15min或30min，然后在540nm處比色，讀取吸光度值，并扣去空白； (3)如果反應(yīng)液不澄清，在測定吸光度前可過濾或離心； (4)用牛血清白蛋白(BSA)建立蛋白質(zhì)濃度與吸光度的標準曲線。,雙縮脲法優(yōu)點 ①該方法比凱氏定氮法費用低，速度快(可在不到30min的時間內(nèi)完成)，是分析蛋白質(zhì)最簡單的方法； ②比福林酚法、紫外吸收法或比濁法更少發(fā)生顏色偏離； ③幾乎沒有物質(zhì)干擾食品中蛋白質(zhì)的雙縮脲反應(yīng)； ④不需要(xūy224。,第六十頁，共六十二頁。shǎo)需要2~4mg蛋白質(zhì)； ②如果存在膽汁素，則吸光度會虛假增加； ③高濃度的胺鹽會干擾反應(yīng)； ④不同蛋白質(zhì)其最終反應(yīng)產(chǎn)物的顏色不同，如明膠的雙縮脲反應(yīng)產(chǎn)生紅紫色； ⑤如果有高濃度的脂或碳水化合物存在時，最終的反應(yīng)溶液中可能會呈乳白色； ⑥此方法不是一個測量絕對值的方法，必須用已知濃度的蛋白質(zhì)(如BSA)或經(jīng)凱氏定氮法校正。,內(nèi)容(n232。ng)總結(jié),糖類 蛋白質(zhì)測定。準確吸取甲液5mL、乙液5mL加入錐形瓶。（5）乙醇洗滌、乙醚洗滌。牛肉(腌制、干牛肉)。ng)采用酸堿滴定法，目前HPLC、氮基酸分析儀也已得到廣泛使
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