過氧化物酶(pod)同工酶聚丙烯酰胺凝膠電泳-閱讀頁
2024-09-06 17:05本頁面
【正文】 10%AP: 30μl將上述溶液充分混勻,在聚合完全的分離膠上,倒入濃縮膠,（注意在倒入濃縮膠前要去掉分離膠表層的水）同時(shí)插入梳子,直到溶液裝滿和梳子插平為止。注意事項(xiàng)：A、在整個(gè)過程中要將制膠模具垂直放在桌面上，不容許傾斜。要注意低板在內(nèi)側(cè)。另外,豆芽研磨可取4g左右,同樣加入1mL的PBS。點(diǎn)樣前,要對樣品進(jìn)行預(yù)處理,即把粗酶提取液與甘油溴酚藍(lán)指示劑以4:1混合,用50μl的微量點(diǎn)樣器吸取樣品20μl,將點(diǎn)樣器的針頭小心插入到點(diǎn)樣孔底部,慢慢注入樣品,要注意防止漂樣。切斷電源,取出緩沖液并低溫保存,可重復(fù)使用2次。POD染色步驟如下：先用自來水溶液潤洗兩遍,再加入3040mL的染色液,室溫下放置520min,至顯色完全。五、注意事項(xiàng)：，以免將玻璃板弄碎。，要注意實(shí)驗(yàn)安全，凝膠、聯(lián)苯胺等試劑有毒，應(yīng)戴乳膠手套或一次性手套操作。附表1試劑 配方分離膠PAG溶液 丙烯酰胺 (Acr):30g N,N亞甲基雙丙烯酰胺(Bis): 加水定容至100mLTrisHCl緩沖液() Tris:36g HCl(12mol/L):2mL 加水定容至100mL濃縮膠PAG溶液 Acr: Bis: 加水定容至50mLTrisHCl緩沖液() Tris:3g HCl(12mol/L):2mL 加水定容至50mL 40%蔗糖溶液 蔗糖:20g 加水定容至50mL10% TEMED 溶液 四甲基乙二胺(TEMED):10mL 加水定容至100mL(避光、低溫保存)10%過硫酸胺(AP)溶液 AP: H2O:5mL (避光、低溫保存,一周內(nèi)可多次使用)甘油溴酚藍(lán)指示劑 溴酚藍(lán): H2O:5mL 甘油:5mL電極緩沖液(pH ) Tris: 甘氨酸(Gly): 加水定容至1000mL,使用時(shí)稀釋10倍() 按照有關(guān)參考書配置
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