過氧化物酶(pod)同工酶聚丙烯酰胺凝膠電泳(完整版)
【正文】 低電導區(qū)兩側就產生了較高的電位梯度。過氧化物酶同工酶電泳同工酶是指其催化的化學反應相同，而酶的結構、理化性質乃至免疫性質不同的一組酶。過氧化物酶能催化過氧化氫使聯(lián)苯胺氧化成藍色或棕色產物，據(jù)此即可將該酶在凝膠中顯色定位。再靜置40min左右,濃縮膠聚合完全后為乳白色。點樣完畢后,連接好導線(正負電極不要接反,紅色為正極,黑色為負極),將電壓調至70 V,當溴酚藍標志線移至濃縮膠與分離膠分界處,將電壓調至150V,電泳23小時,當溴酚藍標志線剛好跑出膠板時,結束電泳。，以免觸電。然后松開卡板，取出凝膠板,用解剖刀扁平部分插入玻板的一角(是分離膠的一角),輕輕撬去一塊玻板,用刀切掉分離膠右下角以示點樣順序,輕輕撬起分離膠,使之滾入染色培養(yǎng)皿中。B、充分混勻的（分離膠或濃縮膠）溶液應盡快用移液槍延高板的一側慢慢加入膠板中C、膠制作完成后，松開卡板取下橡膠皮，然后再用卡板卡緊膠板。試劑：電泳試劑貯存液配置見附表(附表1)。過氧化物酶是植物體內普遍存在的、活性較高的一種酶。本來夾在快慢離子之間的酶蛋白區(qū)帶，在這個追趕中被逐漸地壓縮聚集成一條更為狹窄的區(qū)帶。待分離的酶蛋白樣品加在樣品槽中。下面以本實驗要分離的豆芽或土豆過氧化物酶同工酶為例，分別說明三種效應的作用：（1）電荷效應：各種酶蛋白按其所帶電荷的性質及數(shù)量，在電場作用下向一定電極，以一定速度泳動。把較稀的樣品加在濃縮膠上，經過大孔徑凝膠的遷移作用樣品被濃縮成一個狹窄的區(qū)帶，使樣品組分在分離膠中得以高分辨率的被分離。 酸 4104～1105％濃度的聚丙烯酰胺凝膠分離蛋白質，%的分離核酸。聚丙烯酰胺的基本結構，為丙烯酰胺單位構成的長鏈，鏈與鏈之間通過甲叉橋聯(lián)結在一起。引發(fā)產生自由基團的方法有兩種，即化學法和光化學法。在稀溶液中，離子強度Ⅰ可用下式計算：Ⅰ＝1/2ΣmiZi2 (3)（3)式中，mi為離子的摩爾濃度，Zi為離子的價數(shù)。因此，電泳時應避免用高電滲物質作支持介質。a(2)6πrη由（2）式可以看出，凡能影響溶液粘度η的因素如溫度，影響分子帶電量q及解離度a的因素如pH的改變，都會對遷移率產生影響。過氧化物酶(POD)同工酶聚丙烯酰胺凝膠電泳一、目的了解聚丙烯酰胺凝膠電泳原理。a(1)6πrηu=q例如在紙電泳中，由于濾紙（纖維素）上帶有負電荷，因感應相吸而使與濾紙相接觸的水溶液帶正電荷，從而使液體向負極移動，帶動著本來是向負極泳動的物質以更快的速度移動?！?。但在具有自由基團體系時，它們聚合。光聚合以光敏感物核黃素（即VB2）作為催化劑，在痕量氧存在下，核黃素經光解形成無色基，無色基被氧再氧化成自由基，從而引起聚合作用。改變凝膠濃度以便適應各種樣品的分離。 10～15 ＜104凝膠濃度較小，孔徑相對較
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