【正文】 淺黃色牙膏狀。將濾餅溶于二氯甲烷，其中的水自動分出，浮于二氯甲烷之上。TLC分析表明該固體為含有少量F的G。柱層析得到的純G是雪花般輕盈的白色晶體，而純F是黃色膏狀固體。若用大過量的氫化鋁鋰還原12h得到Hb，可能是內(nèi)酰胺羰基和乙?；驶急贿€原的產(chǎn)物。雖然紅外光譜與核磁共振碳譜表明Hb中沒有羰基，且Hb在硅膠板上發(fā)生拖尾也證明它是一種胺類化合物，但Hb的質(zhì)譜并沒有出現(xiàn)分子離子峰。 合成雜環(huán)化合物的嘗試本文原本希望從α溴代酮Ea出發(fā)，通過FeistBenary反應(yīng)和Hantzsch吡咯合成反應(yīng)在脫氫樅胺B環(huán)構(gòu)造呋喃和吡咯雜環(huán)。從吡咯反應(yīng)液中分離出的副產(chǎn)物Ed和用二氧化硒對E進(jìn)行脫氫得到的不飽和酮U非常接近，也可能是同種物質(zhì)。這些猜測得到了譜學(xué)表征結(jié)果的證實：在合成呋喃和吡咯的反應(yīng)條件下，α溴代酮Ea被還原成酮E；僅在合成吡咯的條件下，得到少量消除產(chǎn)物U，并沒有得到預(yù)期的雜環(huán)化合物。還原產(chǎn)物E可能是Ea被乙酰乙酸乙酯的碳負(fù)離子還原得到的。 產(chǎn)物的分離提純分別用3種配比的展開劑，將得到的化合物在硅膠板上進(jìn)行薄層層析(TLC)， 測量每種化合物的比移值，匯總于下表。其中比移值旁帶*號的化合物在硅膠板上有明顯拖尾，該數(shù)據(jù)僅表示斑點前沿的比移值。在進(jìn)行TLC分析時發(fā)現(xiàn)，E的乙醇溶液在室溫下存放數(shù)周，能緩慢消除溴化氫得到U。后通過譜學(xué)手段對各化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征，證明上述推測是正確的。F的提純：梯度洗脫，洗脫劑的組成從石油醚:乙酸乙酯=1:1緩慢地調(diào)至石油醚:乙酸乙酯=1:2。F全部洗出后可在乙酸乙酯中加入少量乙醇將G洗出。EU體系的分離：梯度洗脫，洗脫劑的組成從石油醚:乙酸乙酯=1:1緩慢地調(diào)至純乙酸乙酯。以上分離流程可一次提純數(shù)克樣品。IR3310cm1是肟OH鍵的伸縮振動[49]，與酰胺NH鍵的伸縮振動重疊。[49]1HNMR13CNMRδC=156為肟基碳原子。[49]化合物GC22H32N2O2 Mr=N(3Isopropyl8,11adimethyl 6oxo6,7,7a,8,9,10,11,11aoctahydro 5Hdibenzo[b,d]azepin 8ylmethyl)acetamideMS相對分子質(zhì)量（）和計算值（）基本吻合IR3425cm1是酰胺NH鍵的伸縮振動，1631cm1是酰胺C=O鍵的伸縮振動[50]1HNMR13CNMR肟基碳原子δC=156的吸收峰消失，出現(xiàn)δC=，說明發(fā)生了重排反應(yīng)[49]。[49]化合物HaC22H34N2O Mr=N(3Isopropyl8,11adimethyl 6,7,7a,8,9,10,11,11aoctahydro 5Hdibenzo[b,d]azepin 8ylmethyl)acetamideMS相對分子質(zhì)量（）和計算值（）基本吻合IR3318 cm1是亞氨基NH鍵的伸縮振動，1666 cm1是乙?；鵆=O的伸縮振動?；衔颒bC22H36N2 Mr=Ethyl(3isopropyl8,11adimethyl 6,7,7a,8,9,10,11,11aoctahydro 5Hdibenzo[b,d]azepin 8ylmethyl)amineMS沒有出現(xiàn)分子離子峰（m/z=），原因有待進(jìn)一步研究?；衔顴aC22H30BrNO2 Mr=N(10Bromo7isopropyl 1,4adimethyl9oxo1,2,3,4,4a,9,10,10a octahydrophenanthren 1ylmethyl)acetamideMSA+2型幾乎等高的分子離子雙峰（m/z=, m/z=）說明分子中被引入了一個溴原子。Ea能夠消除得到U，說明溴化發(fā)生在酮的α位，而不是其他位置。1HNMR13CNMR化合物E，Eb，EcC22H31NO2 Mr=N(7Isopropyl1,4adimethyl 9oxo1,2,3,4,4a,9,10,10a octahydrophenanthren 1ylmethyl)acetamideMSEb的相對分子質(zhì)量（）和E（）幾乎吻合。1HNMR13CNMRE、Eb和Ec的MS、IR、1HNMR和13CNMR譜圖幾乎完全相同，說明這三種物質(zhì)是同種化合物，在此不再重復(fù)。IR3360cm1是酰胺NH鍵的伸縮振動，1652cm1是α,β不飽和酮C=O鍵的伸縮振動，和酰胺C=O鍵的伸縮振動重疊。13CNMR化合物EeC28H35N5O5 Mr=N{9[(2,4Dinitrophenyl) hydrazono]7isopropyl1,4adimethyl 1,2,3,4,4a,9,10,10aoctahydro phenanthren1ylmethyl}acetamideMS相對分子質(zhì)量（）與計算值（）基本吻合。 本章小結(jié)在乙酰化保護(hù)的脫氫樅胺B環(huán)的芐位亞甲基引入羰基，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了Beckmann重排、還原以及溴化、成腙等反應(yīng)，合成了一系列B環(huán)修飾衍生物。第三章DNA切割實驗 引言20世紀(jì)50年代以來，對腫瘤醫(yī)學(xué)的研究有3項最為突出的成就：（1）癌基因的發(fā)現(xiàn)及其深入研究；（2）染色體畸變與癌基因表達(dá)相互關(guān)系的揭示；（3）抑癌基因的發(fā)現(xiàn)及其表達(dá)調(diào)控。因此研究化學(xué)物質(zhì)與DNA的相互作用，并積累這方面的資料，對抗癌藥物的研制具有非常重要的意義。接種新鮮的單個E （含有適量抗生素），37℃震蕩培養(yǎng)1416 h。加入250 μL緩沖液A1（確保已加入RNase A），用渦流振蕩器充分懸浮菌體細(xì)胞。加入350 μL緩沖液N1，立即反轉(zhuǎn)多次至溶液混合均勻，此時出現(xiàn)白色絮狀沉淀。小心吸取離心后的上清液至帶有收集管的DNA柱中（避免吸起沉淀），室溫下13000 r/min離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將離心柱放回收集管中。向DNA柱中加入500 μLDNA洗滌緩沖液（確保已加入無水乙醇），室溫下13000 r/min離心1min，倒掉收集管中的廢液，將離心柱放回收集管中。 mL離心管中，向DNA柱的正中間加入50100μL的洗脫緩沖液室溫放置2min，13000 r/min離心1 min，洗脫質(zhì)粒DNA。 DNA切割實驗Supercoiled pBR322質(zhì)粒DNA切割反應(yīng)50 μM TrisHCl /鹽緩沖(% DMF、pH=)為介質(zhì)，對Ha、G、U、Ea四種化合物進(jìn)行研究，DNA切割實驗條件為20 μL(總量) 反應(yīng)液包含脫氫樅胺衍生物衍生物 (50 μM)、5 μL pBR322 DNA( ug /μL) ,恒溫反應(yīng)3 h。Ha G U Ea 指示劑化合物Ha、G、U、Ea與E ，均產(chǎn)生了新的條帶(缺口性DNA)。第四章 結(jié)論本文首先研究了脫氫樅胺B環(huán)的改性反應(yīng)。將化合物G用氫化鋁鋰還原4h得到內(nèi)酰胺被還原的產(chǎn)物N(3異丙基8,11a二甲基 6,7,7a,8,9,10,11,11a八氫 5H二苯并[b,d]氮雜卓8基甲基)乙酰胺(Ha)，還原12h得到內(nèi)酰胺和乙?；贿€原的產(chǎn)物乙基(3異丙基8,11a二甲基 6,7,7a,8,9,10,11,11a八氫5H二苯并[b,d]氮雜卓 8基甲基)胺(Hb)。接下來通過MS、FTIR、1HNMR、13CNMR對各種化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征和確認(rèn)。最后將化合物Ha、G、U、Ea與DNA恒溫反應(yīng)3h，通過瓊脂糖凝膠電泳分析，確證其中4種化合物具有DNA切割活性。林老師給我選的有機合成為主線的課題激發(fā)了我強烈的求知欲望和濃厚的研究興趣。林老師過硬的有機化學(xué)功底和出眾的專業(yè)素養(yǎng)，以及對結(jié)構(gòu)的大膽猜想和獨到見解，讓我非常欽佩！感謝劉超祥博士、陸洲學(xué)長和與我同組的陳蛟同學(xué)。陳蛟同學(xué)在我研究生復(fù)試期間，替我處理了班上和實驗室里很多繁雜的事務(wù)，讓我能一門心思準(zhǔn)備復(fù)試，并最終考入復(fù)旦大學(xué)化學(xué)系。是他們給了我生命，并且為我創(chuàng)造了良好的成長條件。 Chemotherapy[J], 1999 43(6), 14291434[12]曾韜, 彭淑靜. 化工時刊[J]. 1999, 8, 2125[13]梁夢蘭, 葉建峰. 化學(xué)世界[J]. 2000, 3, 138141[14]曾韜, 彭淑靜. 南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報[J]. 1996, 20(1), 2125[15]何曼, 沈德淵. 功能高分子學(xué)報[J], 2001, 14(3), 268274[16]王延, 宋湛謙. 林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)[J]. 1997, 17(1), 610[17]王延, 谷元強, 周永紅 等. 林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)[J]. 1997, 17(1), 610[18]王延 等. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)[J]. 1997, 10(4), 5963[19]Schiff H. 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