氨基酸與蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)-閱讀頁
2025-05-22 18:01本頁面
【正文】 性 區(qū)域 互相 結(jié)合 ，形成 沉淀 。依蛋白質(zhì)分子量的差異，通過具有 分子篩性質(zhì)的凝膠 而分離。問以凝膠過濾法洗脫時(shí)蛋白質(zhì)的洗脫順序如何？（凝膠分級范圍為 5000～ 400， 000） 蛋白質(zhì) 分子量 肌紅蛋白 16， 900 過氧化氫酶 247， 500 細(xì)胞色素 C 13， 300 肌球蛋白 524， 800 血清蛋白 68， 500 ④ ② ⑤ ① ③ 三）親和層析法： 特定親和力 ? 如兩分子間有 專一性親和力 （ 特別的結(jié)合和識別能力 ， 具有 針對性 ） ， 以其中一種作為 “ 魚餌 ” ， 可把另外一種 “ 釣 ” 出來 。 ■ 親和層析 法的作用 機(jī)理 ： 固相 載體 (1) (2) (3) A B Sample Washing Elution X B 親和基團(tuán) 的配體 X B A A 四）蛋白電泳 ? 在外電場的作用下，帶電顆粒向著與其電性相反的電極移動，這種現(xiàn)象稱為電泳。在非等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)顆粒均帶有不同的電荷。 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 ? SDS（ 十二烷基 磺酸鈉 ）是一種陰離子型表面活性劑，它能夠與蛋白質(zhì)中的氨基酸殘基按大約 1 ? 2比例結(jié)合，使 蛋白以一條無構(gòu)型的長條分子存在 ，且分子表面均勻結(jié)合一層負(fù)的 SDS的電荷，蛋白質(zhì)分子 原有電荷間的差別則可以忽略 。 第五節(jié) 蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的測定 ?一、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)概述 ?二、一級結(jié)構(gòu)測定方法 ?三、同源蛋白質(zhì)及結(jié)構(gòu)進(jìn)化 ?四、鐮刀型血紅蛋白分子病 一級結(jié)構(gòu) 一 、蛋白質(zhì)的 結(jié)構(gòu)層次 四級結(jié)構(gòu) 二級結(jié)構(gòu) 三級結(jié)構(gòu) 氨基酸 二、蛋白一級結(jié)構(gòu)測定 定義 —— 1969年，國際純化學(xué)與應(yīng)用化學(xué)委員會（ IUPAC） 規(guī)定：蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)指 蛋白質(zhì)多肽連中 AA的排列順序，包括二硫鍵的位置。 2,4二硝基氟苯在堿性條件下，能夠與肽鏈 N端的游離氨基作用，生成二硝基苯衍生物（ DNP肽）。不同的 DNP氨基酸可以用色譜法進(jìn)行鑒定。 (三 )氨基酸組成的分析： 酸，堿解后氨基酸分析儀測定 （四） 多肽鏈的部分水解 ? 酶裂解法 胰蛋白酶 蛋白水解酶（蛋白酶）： 糜蛋白酶 （肽鏈內(nèi)切酶） 嗜熱菌蛋白酶 胃蛋白酶 ? Trypsin ： R1=賴氨酸 Lys和精氨酸 Arg側(cè)鏈（專一性較強(qiáng)，水解速度快） 。 可用來確定二硫鍵的位置。 五）氨基酸序列的測定 ? Edman化學(xué)降解法 ? Edman（ 苯異硫氰酸酯法）氨基酸順序分析法實(shí)際上也是一種 N端分析法 。 用途 ： 可以用來鑒定多肽或蛋白質(zhì) NH2末端氨基酸 .亦稱 Edman反應(yīng) 弱堿 AA PITC+ 多肽 蛋白 AA PTC—多肽 蛋白 無水甲酸 或 HF PTHAA + 少一個 AA的多肽或蛋白 （乙酸乙酯抽提） 苯異硫氰酸酯（ PITC） 法： 此反應(yīng)可循環(huán)進(jìn)行 進(jìn)行 n輪反應(yīng)，可測出 n個殘基順序 一次： 60－ 70個殘基的肽段順序 (六 ) 肽段的次序 —重疊肽法 ? 采用兩種或多種 不同的斷裂方法 將多肽樣品斷裂成兩套或多套肽段或肽碎片，并將其分離開來。 示例 (十肽的水解 ) A法水解得到四個小肽： A1 AlaPhe A2 GlyLysAsnTyr A3 ArgTyr A4 HisVal B法水解得到三個小肽： B1 AlaPheGlyLys B2 AsnTyrArg B3 Tyr HisVal 三、 蛋白質(zhì)與生物進(jìn)化 （一）同源蛋白質(zhì)的物種差異與生物進(jìn)化 同源蛋白質(zhì) ——在不同生物體中行使相同或相似功能的蛋白質(zhì)。 細(xì)胞色素 C 細(xì)胞色素 C是真核細(xì)胞線粒體內(nèi)膜上一種含 Fe的蛋白質(zhì)，在生物氧化中起 傳遞電子 的作用。 不同生物與人的細(xì)胞色素 C相比較 AA差異數(shù)目 黑猩猩 0 雞、火雞 13 牛豬羊 10 海龜 15 狗驢 11 小麥 35 粗糙鏈孢霉 43 酵母菌 44 （ 2）盡管不同生物間親緣關(guān)系差別很大，但與細(xì)胞色素 C功能密切相關(guān)的 AA順序卻有共同之處，即 保守順序 不變。 ? 鐮刀狀細(xì)胞貧血?。翰∪梭w內(nèi)血紅細(xì)胞的量及紅蛋白的含量都較正常人少，且紅細(xì)胞的形狀為新月形，即鐮
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