緒論和蛋白質(zhì)化學(xué)ppt課件-閱讀頁(yè)
2025-01-30 08:34本頁(yè)面
【正文】 一級(jí)結(jié)構(gòu)決定空間結(jié)構(gòu)；但一級(jí)結(jié)構(gòu)并非決定空間結(jié)構(gòu)的唯一因素。 韶關(guān)學(xué)院醫(yī)學(xué)院生化檢驗(yàn)教研室 劉毅 2022年 10月 一級(jí)結(jié)構(gòu)中的保守序列決定空間結(jié)構(gòu) （ 1）不同蛋白質(zhì)之間的比較：相似結(jié)構(gòu)相似功能、不同結(jié)構(gòu)不同功能 （ 2）同一蛋白質(zhì)不同狀態(tài)的比較：一級(jí)結(jié)構(gòu)決定空間結(jié)構(gòu) （ 3）保守序列改變，功能改變；保守序列不變，功能不變 【 舉例 】 胰島素 （一）蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系 韶關(guān)學(xué)院醫(yī)學(xué)院生化檢驗(yàn)教研室 劉毅 2022年 10月 其活性仍能維持 100% 其活性只剩 2％～ 10％ 其活性完全喪失 將 A、 B兩鏈間的二硫鍵還原， A、 B兩鏈即分離， 胰島素的功能完全消失。 韶關(guān)學(xué)院醫(yī)學(xué)院生化檢驗(yàn)教研室 劉毅 2022年 10月 空間結(jié)構(gòu)體現(xiàn)生物特異性 空間結(jié)構(gòu)體現(xiàn)生物活性 空間結(jié)構(gòu)的靈活性，體現(xiàn)了生物活性的可調(diào)節(jié)特性 （二）蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系 ?空間結(jié)構(gòu)中的特定區(qū)域體現(xiàn)生物活性 韶關(guān)學(xué)院醫(yī)學(xué)院生化檢驗(yàn)教研室 劉毅 2022年 10月 【 經(jīng)典舉例 】 血紅蛋白（ Hb）：由 α2β2四聚體組成，每個(gè)亞基含有 1個(gè)血紅素輔基； Hb的氧解離曲線呈“ S”型。 his thr glu C(146) HbS β 肽鏈 HbA β 肽 鏈 Nval leu pro glu 韶關(guān)學(xué)院醫(yī)學(xué)院生化檢驗(yàn)教研室 劉毅 2022年 10月 分子?。?molecular disease）：由于基因結(jié)構(gòu)改變，蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)中的關(guān)鍵氨基酸發(fā)生改變，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)功能障礙，出現(xiàn)相應(yīng)的臨床癥狀，這類(lèi)遺傳性疾病稱為分子病。 韶關(guān)學(xué)院醫(yī)學(xué)院生化檢驗(yàn)教研室 劉毅 2022年 10月 韶關(guān)學(xué)院醫(yī)學(xué)院生化檢驗(yàn)教研室 劉毅 2022年 10月 （二）蛋白質(zhì)構(gòu)象改變 可引起疾病 蛋白質(zhì)構(gòu)象疾病 ：若蛋白質(zhì)的折疊發(fā)生錯(cuò)誤 ， 盡管其一級(jí)結(jié)構(gòu)不變 ， 但蛋白質(zhì)的構(gòu)象發(fā)生改變 ， 仍可影響其功能 ， 嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致疾病發(fā)生 。 這類(lèi)疾病包括 ：人紋狀體脊髓變性病、老年癡呆癥、亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。瘋牛病可 能通過(guò)牛肉和牛肉制品，尤其是內(nèi)臟 和骨髓傳染給人類(lèi)，引起 新型早老性 癡呆癥 即 新型克雅氏癥 。 韶關(guān)學(xué)院醫(yī)學(xué)院生化檢驗(yàn)教研室 劉毅 2022年 10月 瘋牛病是由朊病毒蛋白 (prion protein, PrP)引起的一組人和動(dòng)物神經(jīng)退行性病變。 PrPc在某種未知蛋白質(zhì)的作用下可轉(zhuǎn)變成全為 β折疊的 PrPsc，從而致病。 ?帶電狀態(tài)判定 pH pI ……………. 帶負(fù)電 pH pI ……………. 帶正電 pH＝ pI ……………. 不帶電 韶關(guān)學(xué)院醫(yī)學(xué)院生化檢驗(yàn)教研室 劉毅 2022年 10月 【 臨床應(yīng)用 】 由于各種 pr所帶電荷性質(zhì)和數(shù)量不同，以及 pr分子量不同，在電場(chǎng)中移動(dòng)速度也就不同。 韶關(guān)學(xué)院醫(yī)學(xué)院生化檢驗(yàn)教研室 劉毅 2022年 10月 pH = pI pH pI pH pI 向負(fù)極 向正極 位于原點(diǎn) 不易 ↓ 易 ↓ 不易 ↓ 溶解度最小 ， 易沉淀折出 利用此性質(zhì) ， 可以分離提純蛋白質(zhì) 。 (對(duì)診斷肝、腎疾病有較大參考價(jià)值 ) 韶關(guān)學(xué)院醫(yī)學(xué)院生化檢驗(yàn)教研室 劉毅 2022年 10月 幾種常見(jiàn)疾病的電泳圖型 韶關(guān)學(xué)院醫(yī)學(xué)院生化檢驗(yàn)教研室 劉毅 2022年 10月 二、 韶關(guān)學(xué)院醫(yī)學(xué)院生化檢驗(yàn)教研室 劉毅 2022年 10月 【 原理 】 韶關(guān)學(xué)院醫(yī)學(xué)院生化檢驗(yàn)教研室 劉毅 2022年 10月 【 應(yīng)用舉例 】 ?例 1—— 透析 蛋白質(zhì)不能透過(guò)半透膜。 ?透析 可用于臨床疾病的治療 如肝硬化腹水患者自身腹水的超濾回輸及尿毒癥患者的透析療法等。 當(dāng)由于營(yíng)養(yǎng)不良，導(dǎo)致血漿蛋白下降，會(huì)形成水腫。 ?變性的因素：物理、化學(xué)、生物等 ?變性的本質(zhì)： 空間結(jié)構(gòu)被破壞，不涉及一級(jí)結(jié)構(gòu)的變化 。 三、蛋白質(zhì)的變性、沉淀和凝固 韶關(guān)學(xué)院醫(yī)學(xué)院生化檢驗(yàn)教研室 劉毅 2022年 10月 韶關(guān)學(xué)院醫(yī)學(xué)院生化檢驗(yàn)教研室 劉毅 2022年 10月 沉淀 ?概念 ：蛋白質(zhì)自溶液中析出的現(xiàn)象 ?蛋白質(zhì)在溶液中維持穩(wěn)定的因素： 表面電荷、水化層 ?沉淀蛋白質(zhì)的方法： 鹽析：在蛋白質(zhì)溶液中加入高濃度的中性鹽（氯化鈉、硫酸銨等），破壞 pr的水化層和電荷層，使之沉淀，而不使之變性。 凝固 ：變性蛋白經(jīng)加熱煮沸，可形成較堅(jiān)固的凝塊，不再溶于強(qiáng)酸和強(qiáng)堿中，這種現(xiàn)象稱為 蛋白質(zhì)的凝固作用 (protein coagulation)。 1. 雙縮脲反應(yīng) 蛋白質(zhì)溶液在堿性銅的存在下，與酚試劑（含磷鎢酸 磷鉬酸）作用，生成 藍(lán)色 化合物，最大吸收峰在 540nm處。 2. Folin酚試劑反應(yīng) 韶關(guān)學(xué)院醫(yī)學(xué)院生化檢驗(yàn)教研室 劉毅 2022年 10月 原理 呈色 比色 應(yīng)用 雙縮脲反應(yīng) 蛋白質(zhì)和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱 紫紅色 540 nm 檢測(cè)血清總蛋白及蛋白質(zhì)水解程度 茚三酮反應(yīng) 氨基酸與茚三酮水合物共熱 紫藍(lán)色 570 nm 氨基酸定量分析 Folin酚試劑反應(yīng) 酪氨酸在堿性條件下與酚試劑（磷鎢酸和磷鉬酸）反應(yīng) 藍(lán)色 500 nm 蛋白含量測(cè)定，靈敏度高 溴甲酚綠法 白蛋白在 液中帶正電荷，與帶負(fù)電荷的溴甲酚綠結(jié)合 藍(lán)綠色 630 nm 檢測(cè)血清白蛋白 韶關(guān)學(xué)院醫(yī)學(xué)院生化檢驗(yàn)教研室 劉毅 2022年 10月 重要名詞 氨基酸、肽鍵、肽鍵平面、結(jié)構(gòu)域 (domain)、等電點(diǎn)、變性、復(fù)性、凝固、雙縮脲反應(yīng) 化學(xué)結(jié)構(gòu) ?元素組成： C、 H、 O、 N（ 16%， ） ?結(jié)構(gòu)單位： 20種 Lα氨基酸（芳香族、含硫、酸性、堿性氨基酸等） ?一級(jí)結(jié)構(gòu) ： 肽鍵、二硫鍵； N端 ?C端 ?二級(jí)結(jié)構(gòu)：氫鍵；類(lèi)型（ ?螺旋， ?折疊， ?轉(zhuǎn)角，無(wú)規(guī)則卷曲） ?三級(jí)結(jié)構(gòu)：次級(jí)鍵 ?四級(jí)結(jié)構(gòu)：次級(jí)鍵 理化性質(zhì) 兩性解離和等電點(diǎn)；膠體性質(zhì)；變性；紫外吸收；呈色反應(yīng) 小結(jié) 韶關(guān)學(xué)院醫(yī)學(xué)院生化檢驗(yàn)教研室 劉毅 2022年 10月 何謂氨基酸、蛋白質(zhì)的兩性電離與等電點(diǎn)？ 蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)有哪些形式？試述 α －螺旋的結(jié)
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