【正文】 Co2＋ :(生成絡(luò)合物性質(zhì)不同 ) 消除干擾，也可采取分離法。 如 phen— Fe2+ 標(biāo)準(zhǔn)曲線 ， 被測(cè)液 作參比。 4. 干擾組分與顯色劑有反應(yīng) ,又無法掩蔽消除時(shí)： 1） 掩蔽被測(cè)組分 ，再加入顯色劑，作參比 . 2） 加入等量干擾組分 到空白溶液中 ,作參比 . 選擇適當(dāng)?shù)膮⒈热芤? 77 光度測(cè)量誤差及測(cè)量條件的選擇 光度分析的誤差來源于兩方面：一方面是各種化學(xué)因素引入的誤差；另一方面是儀器測(cè)量不準(zhǔn)引入的誤差。 ： ? 任何光度計(jì)都有一定的測(cè)量誤差 ， 測(cè)量誤差的來源主要是光源的發(fā)光強(qiáng)度不穩(wěn)定 ， 光電效應(yīng)的非線性 ， 電位計(jì)的非線性 ， 雜散光的影響 ， 單色器的光不純等等因素 . ? 具體說來 ， 對(duì)于一個(gè)給定的光度計(jì)來說 ， 其透光率的讀數(shù)誤差等于常數(shù) △ T， 約為 ～ 。 ? 對(duì)于精度較好的儀器，當(dāng) T%在 60～ 20%（ A=～ ）時(shí)，測(cè)量誤差 約為 1%。 ? 78 ? 2． 測(cè)量波長(zhǎng)的選擇： ? 一般選用待測(cè)物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)作為測(cè)量波長(zhǎng)（ 入射光 ） ? 但當(dāng)在最大吸收波長(zhǎng)處有干擾時(shí) ， 則應(yīng)根據(jù) “ 吸收最大干擾最小 ” 的原則來選擇波長(zhǎng) ?？刂频姆椒椋? ? 1）控制溶液的濃度； ? 2）選用適當(dāng)厚度的比色皿； 79 吸光光度法的應(yīng)用 單一組分的測(cè)定 1. 金屬離子 : Fephen, Ni丁二酮肟 , Co鈷試劑 2. 磷的測(cè)定 : DNA中含 P～ %, RNA中含 P～ %, 可得核酸量 . H3PO4+12(NH4)2MoO4+21HNO3 =(NH4)3PO4 81 單組分定量分析 ? 紫外 可見吸收光譜是進(jìn)行定量分析最廣泛使用的、最有效的手段之一。其用于定量分析的優(yōu)點(diǎn)是： ? 1) 可用于無機(jī)及有機(jī)體系。 ? 2)準(zhǔn)確度高，一般相對(duì)誤差 13%，有時(shí)可降至百分之零點(diǎn)幾。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可求得未知樣品的濃度。將待測(cè)試樣分成若干等份，分別加入不同已知量 0, C1, C2…, Cn 的待測(cè)組分配制溶液。若直線通過原點(diǎn)，則樣品中不含待測(cè)組分；若不通過原點(diǎn)，將直線在縱軸上的截距延長(zhǎng)與橫軸相交，交點(diǎn)離開原點(diǎn)的距離為樣品中待測(cè)組分的濃度。 在 ?2處測(cè)總吸收 ,扣除 x吸收 ,可求 y. c) x,y組分不能直接測(cè)定 A1=?x?1bcx+ ?y?1bcy(在 ?1處測(cè)得 A1) A2 =?x?2bcx+ ?y?2bcy(在 ?2處測(cè)得 A2) 84 光度滴定 NaOH滴定 對(duì)硝基酚 pKa= 間硝基酚 pKa= ? pKa= V1 V2 V(NaOH)/mL 對(duì)硝基酚 間硝基酚 酸形均無色 . 堿形均黃色 85 典型的光度滴定曲線 依據(jù)滴定過程中溶液吸光度變化來確定終點(diǎn)的滴定分析方法。c(HL)； 低酸度下，幾乎全部以 L存在，可測(cè)得 AL ＝ εL ? 再在相同的條件下測(cè)定試液的吸光度，由曲線上查得試液的濃度與參比溶液濃度的差值，從而求得待測(cè)組分的濃度。 此時(shí)若以一濃度略小于試樣組份濃度作參比 ， 則有： ()( )()xxssxsxsA lcA lcA A Al c c l c??????? ? ?? ? ? ?待 測(cè) 物 濃 度空 白 濃 度具體做法： 以濃度為 cs的標(biāo)準(zhǔn)溶液調(diào) T=100%或 A=0（調(diào)零），所測(cè)得的試樣吸光度實(shí)際就是上式中的?A，然后求出 ?Cx，則試樣中該組份的濃度為(Cs+?Cx)。 Fe3＋ — SCN Fe2＋ — SCN （分子內(nèi)氧化還原） h? R N 1 R 2 R h? D— A D＋ — A e給予體 e接受體 e給予體 e接受體 N 1 R 2 + h? C R O C R O + h? 99 有機(jī)分子中的生色團(tuán)與助色團(tuán) 嚴(yán)格地說，只有含有不飽和基團(tuán)或孤對(duì)電子的基團(tuán)，才是生色團(tuán)（ n→ π*， π→ π*） － C－ C－，－ C－ H ， σ→σ * ～ 150nm n→ σ*， σ→σ * : : C＝ O C＝ C－ O－ : : n→ π*， π→ π* － C－ O－，－ C－ S－ n→σ* ,σ→σ* ～ 200nm : : : : － C－ N－，－ C－ Cl： : : : ?C＝ C ,－ C ＝ C－ π →π * ,σ→σ * ～ 200nm （孤立雙鍵 200nm） 生色團(tuán)類 型 103 不飽和基團(tuán)助色效應(yīng)大 256 261 264 282 320 276(K帶 ) 苯環(huán) B帶 λmax(nm) CH3 Cl CH=CH2 C CH3 O 常見助色團(tuán)及其助色效應(yīng) (紅移 —— ?max增大 ): － F－ CH3－ Cl－ Br－ OH－ OCH3－ NH2－NHCH3 － N(CH3)2 － NHC6H5－ O－ 例： CH3Cl CH3Br CH3I ?max(nm) 172 204 258 105 共軛烯烴鍵數(shù)與能量的關(guān)系 ?E ?E ?E ?E ?4* ?5* ?6* ?3 ?2 ?1 ?3 ?2 ?1 ?4 ?5* ?6* ?7* ?8* ?3* ?4* ?2 ?1 ?1 ?2* 共軛 ?鍵越多，最大吸收峰波長(zhǎng) ? 越長(zhǎng) . 106 雙鍵數(shù) 物質(zhì)名稱 ?max(nm) ? 5 癸五烯 335（ 淺黃 ） 105 6 二甲基十二碳六烯 360（ 黃 ） 105 8 2－羥基－ ?－胡蘿卜素 415（ 橙 ） 105 11 番茄紅素 470（ 紅 ） 105 ? ?max 結(jié)構(gòu)式 化合物 104 104 104 104 296 258 217 185 C＝ C 辛四烯 己三烯 丁二烯 乙烯 107 苯吸收帶（溶劑：異辛烷） 精細(xì)結(jié)構(gòu) B帶 (III) K帶 (II,E2) E帶 (I,E1) I帶 II帶 III帶 E帶 K帶 B帶 E1帶 E2帶 B帶 180 204 256 104 103 102 ?max ? 苯吸收帶名稱 108 苯環(huán)共軛的影響 B帶， ?max(nm) 苯 256 萘 314 蒽 380 丁省 480(黃 ) 戊省 580(藍(lán) ) 109 苯的同系物的吸收光譜 ?/nm ? 110 ?Kmax＝ 220nm， ?Bmax＝ 270nm ε＝ 800 非共軛 (兩環(huán)不共平面 ) λBmax＝ 262nm， ε＝ 500 非共軛 (sp3雜化 ) 隱式孔雀綠 (sp3雜化 )(無色 ) 堿式孔雀綠 (三苯環(huán)共平面 ) (sp2雜化 )(綠色 ) λmax＝ 617nm 苯環(huán)取代基的影響 CH2 CH3 CH3 C H N(CH3)2 (CH3)2N (CH3)2N C +N(CH3)2Cl 2,2 ?二甲基聯(lián)苯 二苯甲烷 112 溶劑極性對(duì)吸收光譜的影響 對(duì)稱四嗪 的吸收光譜 1. 蒸氣狀態(tài) 2. 環(huán)己烷中 3. 水中 (溶劑化 ,精細(xì)結(jié)構(gòu)消失 ) N N C N N C H H 500 600 ?(nm) 1 2 3 113 酸堿性導(dǎo)致物質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化 例： PP + H＋ + OH－ H O C O H C O O sp3 （無色） O C C O O O sp2 （紅色） OH 114 溶劑極性增大 ， n ? ?* 吸收 藍(lán)移 例 :丙酮 溶劑 己烷 氯仿 二氧六環(huán) 乙醇 水 ?max(nm) 280 278 277 270 265177。 2. pH影響分子構(gòu)型 , 因此影響物質(zhì)對(duì)光的吸收 . 3. 利用溶劑效應(yīng)可區(qū)別 ? ? ?*(紅移 ) 還是 n ? ?*(藍(lán)移 )