【正文】 ? 由 ε=aM , 得 : ? a= ε/M ? = ε /251=(L ? 另外，當溶液中含有 懸浮物或膠粒 等散射質(zhì)點時，入射光通過溶液時就會有一部分光因 散射而損失 掉，使透過光強度減小，測得的吸光度增大，從而引起 偏離吸收定律 。 ? c）溶劑作用： ? 溶劑對吸收光譜的影響是比較大的， 溶劑不同時 ，物質(zhì)的 吸收光譜不同 。 光電池，光電管，光電倍增管 47 硒光電池（ Barrierlayer photocell） 適用于 300800 nm, 在 500600 nm范圍最靈敏。 ? 相同的物質(zhì) , M小則靈敏度高 . 3210= = ( g /c m ) 1 0 .0 0 MMS ????變換單位 : bcmcmol/L=bcM106 ?g/1000cm2 60 例 1 鄰二氮菲光度法測鐵 ?(Fe)=, b=2cm , A= 計算 ? 、 S 和 解： c(Fe)= mg/L= 103/ = 105(mol 64 測量誤差公式推導(dǎo) : dA = d(lgT) = d() = dd=cAcArd 34 d==( lg )cTEc T TA= lgT T lgT 最大時，即 (TlgT) ′= 0 時誤差最小 , 算得 lgT= , T=% , A = 65 10 8 6 4 2 0 20 40 60 80 A T/% Er r0. 43 4lg( 0. 01 )cTEc T TT??????() 濃度測量的相對誤差與 T(或 A)的關(guān)系 實際工作中，應(yīng)控制 T在 10～ 70％ , A在 ～ (調(diào) c, b, ?) 66 顯色劑與顯色反應(yīng) 顯色反應(yīng)：在光度分析中將試樣中的待測組分轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應(yīng)叫顯色反應(yīng)。 ?反應(yīng)生成的有色化合物 組成恒定，穩(wěn)定 。 ? T%在 80～ 10%即 A=1～ 。尤其在醫(yī)院的常規(guī)化驗中， 95%的定量分析都用此法。由加入待測試樣濃度由低至高依次測定上述溶液的吸收光譜，作一定波長下濃度與吸光度的關(guān)系曲線，得到一條直線。 Cx=Cs+△ Cx A Ax △ Cx △ C 91 ? 測量原理： 當試樣中組份的濃度過大時 ， 則 A值很大 ，會產(chǎn)生讀數(shù)誤差 。 4. 比較光譜時 , 溶劑要相同 . 117 常用溶劑的光學(xué)透明區(qū) CHCl3 245 乙醚 210 苯 280 環(huán)己烷 210 己烷 210 CCl4 265 正丁醇 210 庚烷 210 DMF 270 二氯甲烷 235 甲醇 215 丙酮 330 二氧六環(huán) 235 異辛烷 210 吡啶 303 乙醇 210 水 191 硝基甲烷 380 大于以上波長時使用 對溶劑的要求 1. 低極性 2. 易溶解被測物 3. 穩(wěn)定 4. 在樣品的吸收光譜區(qū)無明顯吸收 。c(HL). 代入整理： L HLAAK AAap = p H + l g 或 配制一系列 c相同 ,pH不同的溶液 ,測 A. HL、 L 顏色不同 +a L= [ H ] K AA[HL] [L] HL AA89 MO吸收曲線 Aa(HL) Ab (L) 1 2 3 4 5 6 Ab 6 5 4 3 2 1 Aa 350 400 450 500 550 600 ?/nm A 曲線 pH 1 , 2 3 4 5 6 , 由每份溶液的一對 pH、 A，可求得一個 Ka, 取平均值即可 . 90 ? 高含量組分的測定 : ? 配制一系列待測組分的濃度相差較小 ， 且待測組分濃度與試液濃度相近的 標準溶液 ， 以其中濃度最小的標準溶液 (Cs)作參比溶液 ， 測定其它標準溶液的吸光度 ， 以吸光度對測定溶液和參比溶液的濃度差作圖 ， 得一過原點的標準曲線 。 標準加入法 ? 樣品組成比較復(fù)雜，難于制備組成匹配的標樣時用標準加入法。12MoO3+12NH4NO3+12H2O 磷鉬黃 (?小 ) 磷鉬 (V)藍 (?大 ) Sn2+ 80 3. 蛋白質(zhì)測定 — 溴甲酚綠、考馬司亮藍等 4. 氨基酸測定 — 茚三酮 (紫色化合物 ) 5. 水質(zhì)檢測 : NH4+、 NO Mn2+、 Fe2+、SO4 Hg2+ 6. 藥物含量測定 — 比吸光系數(shù)定量；荷移光譜法測定 . 7. 紫外吸收 (UV): NO NO SO4SO3 CO3 SCN、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白質(zhì)等。對于化學(xué)因素，前面巳經(jīng)講過，現(xiàn)在我們來看儀器測量不準引入的誤差。 ?選擇性好 。cm1 S = ( 104)＝ (?g 用 S表示，單位 ： ?g 波長范圍寬 , 色散均勻 , 分辨性能好 , 使用方便 . －平面透射光柵 －反射光柵（廣泛使用） 光柵衍射示意圖 M1 M2 出射狹縫 光屏 透鏡 平面透射光柵 46 吸收池 (比色皿 )：用于盛待測及參比溶液。特別是在稀溶液中時，更是如此。 所以只要在入射光的波長范圍內(nèi)， 摩爾吸光系數(shù)差別不是太大 ， 由此引起的偏離是較小的。 ? 解： 已知溶劑濃度 c= ， b=, T=, 由 LambertBeer定律得： ? ε（ 480nm） =A/ cb ? = 103 ? = 103 ( L cm1 當 c的單位用 mol ? 另外， K的值隨著 b和 c的單位不同而不同。 ? 2） 對 同一物質(zhì) ， 其濃度不同時 ， 吸收 曲線形狀和最大吸收波長 不變 ， 只是 吸收程度 要發(fā)生變化 ， 表現(xiàn)在曲線上就是曲線的 高低 發(fā)生變化 。 完全吸收 完全透過 吸收黃色光 光譜示意 表觀現(xiàn)象示意 復(fù)合光 12 物質(zhì)顏色 吸收光 物質(zhì)顏色 吸收光 顏色 波長范圍（ nm） 顏色 波長范圍 (nm) 黃綠 紫 400～ 450 紫 綠 560～ 580 黃 藍 450～ 480 藍 黃 580～ 600 橙 綠藍 480～ 490 綠藍 橙 600～ 650 紅 藍綠 490～ 500 藍綠 紅 650～ 760 紫紅 綠 500～ 560 14 Cr2O7 MnO4的 吸收光譜 300 400 500 600 700 ?/nm 350 525 545 Cr2O72 MnO4 Absorbance 350 15 苯 和 甲苯 在環(huán)己烷中的吸收光譜 苯(254nm) 甲苯(262nm) A ? 230 250 270 16 ?不同物質(zhì)吸收光譜的形狀以及 ?max 不同 —— 定性分析的基礎(chǔ) ?同一物質(zhì)，濃度不同時，吸收光譜的形狀相同 ， Amax 不同 —— 定量分析的基礎(chǔ) 17 吸收曲線（吸收光譜）及最大吸收波長 ? 1．吸收曲線： 每一種物質(zhì)對不同波長光的吸收程度是不同的 。 電子的躍遷 吸收光的波長主要在真空紫外到可見光區(qū) ， 對應(yīng)形成的光譜 ， 稱為 電子光譜或紫外 可見吸收光譜 。 ? ? 同理，處于同一電子能級和同一振動能級上的分子，由于轉(zhuǎn)動能量不同而處于不同的能級上。 4 ? 物質(zhì)分子內(nèi)部三種運動形式： ? （ 1）電子相對于原子核的運動。1 紫外 可見 吸收光譜分析法 2 可見吸收光譜分析法概述 特點 –靈敏度高： 測定下限可達 105～ 10 6mol 最大吸收峰的波長 λmax和相應(yīng)的摩爾吸光系數(shù)εmax反映了構(gòu)成有機分子部分結(jié)構(gòu)的發(fā)射團的特征。 ? ? 由于這個原因，處在同一電子能級的分子，可能因振動能量不同而處于不同的能級上。 由于它吸收的能量處于紅外光區(qū) ，故又稱