【正文】 n→σ ＊ ； π→π ＊ 三種躍遷。 M(H2O)6M+(Cr3+、 Co2+) 型水合離子分別為藍(lán)色和桃紅色。 λ 不變，則只與 b、 c有關(guān)。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 54 三、 偏離比耳定律的原因 (濃度過大不適合 ) 當(dāng) c mol c．散射光和反射光 渾濁溶液產(chǎn)生散射和反射，不能用空白消除影響 (被認(rèn)為成吸光）， I變小，但 I0不變。 ★對光源的要求 足夠光強(qiáng)、穩(wěn)定、連續(xù)輻射且強(qiáng)度隨波長變化小 ： 340～ 2500nm，多用在可見光區(qū)。 2）吸收池的光學(xué)面應(yīng)垂直于光束方向。 波長校正 鐠玻璃或鈥玻璃都有若干特征的吸收峰，可用來校正分光光度計的波長標(biāo)尺，前者用于可見光區(qū)，后者則對紫外和可見光區(qū)都適用。 、溫度、放置時間 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 69 參比溶液的選擇 why使用參比溶液 只有使用參比溶液，才能真正反映待測溶液的吸光度值。當(dāng)作為參比溶液時，可扣除這種影響。 ，化合物有強(qiáng)吸收而雜志無吸收，也可以用摩爾吸光系數(shù)檢查它的純度。 2）原理： 控制 lceII ??? 0一階導(dǎo)數(shù)信號與濃度成正比。這七種顏色的光波長是不一樣的。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 92 思考題與練習(xí)題 －可見吸收光譜呈帶狀光譜，原因是什么？ dcab 2. College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 93 思考題與練習(xí)題 ？紫外吸收光譜說明什么？ －比爾定律的物理意義是什么？ ，測定波長與參比波長如何選擇？ 305nm,而在水中吸收波長為 307nm. 試問：引起該吸收的是 nπ* 還是 π π* 躍遷？ ： 乙烯、 1， 3， 5－己三烯、 1， 3－丁二烯。 利用雙波長分光光度計中差分函數(shù)放大器，把分別 (雙波長分光光度計）放大 k k2倍，則兩波長處的信號差為 S, 、 調(diào)節(jié)放大器，使λ 2和 λ 1滿足： 干擾組分 A無關(guān)，即消除了 A的干擾 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 88 1）定義：將吸光度信號轉(zhuǎn)化為對波長的導(dǎo)數(shù)信號的方法。 與標(biāo)準(zhǔn)譜圖比較（以下四種） College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 77 二、純度分析： 收，而雜志有強(qiáng)的吸收時，則可用于測定該化合物中的雜質(zhì)。 4. 平行操作溶液參比 用不含被測組分的試樣，在相同條件下與被測試樣同樣進(jìn)行處理，由此得到平行操作參比溶液干擾及消除方法。 形成逐級配合物時，顯色劑的用量關(guān)系較大，一般就需過量較多或必須嚴(yán)格控制用量 。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 64 ?S為背景吸收 切光器 吸收池 光源 檢測器 單色器 單色器 2. 雙波長分光度計 特點：可測多組份試樣 、 混濁試樣 、 而且可作成導(dǎo)數(shù)光譜 、不需參比液 、 克服了電源不穩(wěn)而產(chǎn)生的誤差 ， 靈敏度高 ?，F(xiàn)代儀器多用光柵作色散元件。 消除措施：試液濃縮富集 。 當(dāng) E1≠E 2時 A～ C 非線性，偏離比爾定律。 （ 6） ε max越大表明該物質(zhì)吸光能力越強(qiáng)，用光度法測定該物質(zhì)靈敏度越高。 ta III ??00IIT t?（ T為透光度） rta IIII ???0I a I t 參比 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 47 溶液對光透光度： b、 c及入射光 λ(波長 與 a有關(guān)） 等因素有關(guān)。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 41 （三） 無機(jī)化合物的吸收光譜 1. d— d躍遷和 f－ f 躍遷 過渡金屬離子未充滿的 d軌道，由于受配位場（或晶體場）的影響而發(fā)生分裂，當(dāng)吸收光時可發(fā)生 d— d躍遷，吸收波長取決于分裂能的大小， L越強(qiáng)，分裂能越大，吸收波長越短。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 38 c．各類有機(jī)化合物的紫外吸收光譜 ①飽和化合物： σ→σ ＊ 躍遷， λmax 一般在 150nm； 當(dāng)含有 n電子的原子取代時產(chǎn)生n→σ ＊ 躍遷，可使 λmax 增大，達(dá)到近紫外區(qū) (200~270nm)。 C=O雙鍵同 C=C雙鍵的共軛作用使 n→ ?*和 ?→ ?*躍遷的吸收峰都發(fā)生紅移 。 ε 不大，為100～ 300 能量 成鍵 成鍵 未成鍵 反鍵 反鍵 ? ? n ?* ?* ?→?* ?→ ? * n→?* n→ ? * 特點： n→ ?*所需能量在 200nm 接近。 吸收曲線的討論： College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 23 ?③吸收曲線可以提供物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息，并作為物質(zhì) 定性分析的依據(jù)之一 (分子內(nèi)部能級分布狀況 )。 例： College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 19 溶液顏色的深淺，決定于溶液吸收光的量，即取決于吸光物質(zhì)濃度的高低。 白光 紅 650～ 750 紫 400～ 450 藍(lán) 450～ 480 綠藍(lán) 480～ 500 綠 500～ 560 黃綠 560～ 580 黃 580～ 600 橙 600～ 650 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 16 ?物質(zhì)呈現(xiàn)的顏色與吸收光顏色是互補(bǔ)色關(guān)系。 粒子性：具有動量，光電效應(yīng)。 作用粒子：原子光譜法 分子光譜法和核磁共振波譜法 吸收和發(fā)射光： 吸收光譜和發(fā)射光譜 光的能量： ?射線光譜法、 x射線光譜法、 紫外可見光譜法、紅外光譜法 等 分 類 引言 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 3 紫外可見分光光度法 定義：（又稱：紫外可見吸收光譜法）是根據(jù)溶液中物質(zhì)的分子或離子對紫外 —— 可見光譜區(qū)的輻射能的吸收來研究物質(zhì)的組成和結(jié)構(gòu)的方法。 用紫外 — 可見光照射分子時，會發(fā)生電子能級的躍遷，對應(yīng)產(chǎn)生的光譜，稱為電子光譜，通常稱為 紫外 — 可見吸收光譜 。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 17 ?物質(zhì)不同顏色是對光的選擇性吸收 不同物質(zhì)的分子組成和結(jié)構(gòu)不同， E不同， △ E也不同。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 20 三、吸收光譜 吸收光譜（ 吸收曲線 ）： 不同波長的單色光依次照射溶液，并測量在每一波長處對光的吸收程度的大小（吸光度），并以波長（ ?）為橫坐標(biāo)， 吸光度（ A） 為縱坐標(biāo)作圖，即可得一條吸光度隨波長變化的曲線。吸收曲線是定量分析中選擇入射光波長的重要依據(jù)。 例 C=C、 C=O、 N=N、 N=O等 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 31 助色團(tuán) ：一種能使生色團(tuán)的吸收峰向長波方向位移并增強(qiáng)其吸收強(qiáng)度的官能團(tuán) 如 — NH2 、 — OH 、 — NR2 、 — OR 、 —SH 、 — SR 、 — Cl 、 — Br 等 這些基團(tuán)中的 n電子能與生色團(tuán)中的 π電子相互作用 (可能產(chǎn)生 n— π 共軛 )，使π — π* 躍遷能量降低，躍遷幾率變大。 由于 n— π 共軛參與，使分子整體共軛