紫外可見(jiàn)吸光光度法及分子熒光分析法(存儲(chǔ)版)
【正文】 ??? 0lgCLAT ???? lgCLtIIT ???? 100入射光 I0 透射光 It 如何測(cè)定吸光度（光強(qiáng)）？ L C 思考：如何獲得單色光？單色光的 波長(zhǎng) 如何選擇？ 或 18 吸光度 （ Absorbance） 與透光率的關(guān)系 ACLT ??? ?lgT ： 透光率 A： 吸光度 0 A C A 100 50 0 T % T CLAT ??? ?? 1010T = % A = ∞ T = % A = A = T = % 吸光度適宜的取值范圍： ~ 19 吸光系數(shù) ε CLA ??L ：吸光液層的厚度，光程， cm C： 吸光物質(zhì)的濃度， g / L, mol / L ε ：比例常數(shù) 入射光波長(zhǎng) 物質(zhì)的性質(zhì) 溫度 取值與濃度的單位相關(guān) c： mol / L 摩爾吸收系數(shù)， L 但是當(dāng)時(shí)，不知道食品中到底有什么維生素，有多少。 基本概念 入射光 I0 透射光 It ?分光光度法： 光強(qiáng)為 I0的 單色光 照射到樣品上，樣品中 被測(cè)組分吸收 部分光，透射光強(qiáng)減弱為 It 。 104～ 105 為中等靈敏度 。 利用光通過(guò)光柵時(shí)發(fā)生 衍射和干涉 現(xiàn)象而分光。 吸光度校正 :一般常用堿性重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行吸光度校正，測(cè)定的數(shù)值與標(biāo)準(zhǔn)吸光度表比較。測(cè)定比色液時(shí)，可將所測(cè)得的吸光度乘以各該比值 比色皿的校正 46 721或 752可見(jiàn)光分光光度計(jì)的使用 ?① 打開(kāi)光源，黃燈亮 ,預(yù)熱 10min ?② 用波長(zhǎng)旋鈕調(diào) λmax（或所選工作波長(zhǎng)） ?③ 打開(kāi) 樣品池暗箱蓋，斷開(kāi)光路， 調(diào)滿程（吸光度 A=∞）， 透光率 T=0 ?④ 選擇合適的 參比溶液 ，合上暗箱蓋，將參比池置于光路中， 調(diào)零（ A=0 ）， T=100%, ?⑤ 重復(fù)③和④至少兩遍 ?⑥測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品的 吸光度 A 47 波長(zhǎng)選擇旋鈕 48 49 50 電源開(kāi)關(guān) 51 比色皿 52 。 或者測(cè)定已知光譜樣品的光譜，與標(biāo)準(zhǔn)光譜對(duì)照進(jìn)行校正，如譜釹濾光片。 作用：將光信號(hào)轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，并放大 光電管，光電倍增管 ，光電二極管，光導(dǎo)攝像管（多道分析器） 表頭、記錄儀、屏幕、數(shù)字顯示 作用：將復(fù)合光色散成單色光 光柵 玻璃， 350 ~ 2500 nm, 石英， 185 ~ 4500 nm 平面透射光柵， 反射光柵 棱鏡 37 氙燈 氘燈 鎢燈 38 單色器： 將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為 單色光的裝置。 g –1 Beckman DU Spectrophotometer.使得維生素的測(cè)定變得非常簡(jiǎn)單。 ?1941年，第一臺(tái) mercial available 的 分光光度計(jì) 問(wèn)世。 cm 1 c： g / L 質(zhì)量吸收系數(shù)， L L1, 104%～ 105% ?準(zhǔn)確度 能夠滿足 微量組分 的測(cè)定要求：相對(duì)誤差 2～ 5％ ?操作 簡(jiǎn)便快速 ?應(yīng)用廣泛 30 1）目視比色法 特點(diǎn) 利用眼睛比較被測(cè)樣品與標(biāo)準(zhǔn)系列顏色的深淺 利用 復(fù)合光 （太陽(yáng)光）測(cè)量的是 透過(guò)光 的強(qiáng)度 準(zhǔn)確度低 ,用于限界分析 不可分辨多組分 方法簡(jiǎn)便，靈敏度高 標(biāo)準(zhǔn)系列 C0 C1 C2 C3 C4 C5 未知樣品 觀察方向 31 2） 光
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