分光光度法ppt課件(2)-閱讀頁(yè)
2025-05-21 08:10本頁(yè)面
【正文】 用不加顯色劑的被測(cè)試液作參比溶液 。 47 d 顯色劑和試液均有顏色，可將一份試液加入適當(dāng)掩蔽劑，將被測(cè)組分掩蔽起來(lái)，使之不再與顯色劑作用，而顯色劑及其他試劑均按試液測(cè)定方法加入，以此作為參比溶液，這樣就可以消除顯色劑和一些共存組分的干擾。 48 0 1 2 3 4 mg/ml A * 0 溶液濃度的測(cè)定 A＝ ?bc 工作曲線法 (校準(zhǔn)曲線 ) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 (p229) 49 光度分析法的誤差 1 對(duì)朗伯 比爾定律的偏離 在吸光光度分析中 ， 經(jīng)常出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不呈直線 的情況 ， 特別是當(dāng)吸光物質(zhì)濃度較高時(shí) ， 明顯地看到 通過原點(diǎn)向濃度軸彎曲的現(xiàn)象 (吸光度軸彎曲 )。 若在曲線彎曲部分進(jìn)行定量 ， 將會(huì)引起較大的誤差 。 50 （ 1） 非單色光引起的偏離 * 朗伯 比爾定律只適用于單色光 ， 但由于單色器色散能力的限制和出口狹縫需要保持一定的寬度 ， 所以目前各種分光光度計(jì)得到的入射光實(shí)際上都是具有某一波段的復(fù)合光 。 51 * 克服非單色光引起的偏離的措施 ◎ 使用比較好的單色器，從而獲得純度較高的 “單色光”，使標(biāo)準(zhǔn)曲線有較寬的線性范圍。 ◎ 測(cè)定時(shí)應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)臐舛确秶?，使吸光度讀數(shù)在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)。 如果被測(cè)溶液不均勻 ， 是膠體溶液 、 乳濁液或懸浮液時(shí) ， 入射光通過溶液后 ， 除一部分被試液吸收外 ， 還有一部分因散射現(xiàn)象而損失 ， 使透射比減少 ， 因而實(shí)測(cè)吸光度增加 ， 便標(biāo)準(zhǔn)曲線偏離直線向吸光度軸彎曲 。 53 （ 3） 由于溶液本身的化學(xué)反應(yīng)引起的偏離 溶液中的吸光物質(zhì)常因解離 、 締合 、 形成新化合物或互變異構(gòu)等化學(xué)變化而改變其濃度 ， 因而導(dǎo)致偏離朗伯 — 比爾定律 。 54 B 絡(luò)合 顯色劑與金屬離子生成的是多級(jí)絡(luò)合物，且各級(jí)絡(luò)合物對(duì)光的吸收性質(zhì)不同，例如在Fe(Ⅲ )與 SCN的絡(luò)合物中， Fe(SCN)3顏色最深，F(xiàn)e(SCN)2+顏色最淺，故 SCN濃度越大，溶液顏色越深，即吸光度越大。 在分析測(cè)定中，要控制溶液的條件，使被測(cè)組分以一種形式存在，以克服化學(xué)因素所引起的對(duì)朗伯－比爾定律的偏離。任何光度計(jì)都有一定的測(cè)量誤差。 在光度計(jì)中，透射比的標(biāo)尺刻度均勻。對(duì)于同一儀器，讀數(shù)的波動(dòng)對(duì)透射 比為一定值；而對(duì)吸光度讀數(shù)波動(dòng)則不再為定值。待測(cè)溶液的透射比 T在 15%~65%之間，或使吸光 度 A在 ~，才能保證測(cè)量的相對(duì)誤差較小。 TTTTTEr ln1%1 0 0ln ?????57 其他吸光光度法及吸光光度法應(yīng)用 1 示差吸光光度法 2 雙波長(zhǎng)吸光光度法 3 弱酸和弱堿解離常數(shù)的測(cè)定 4 絡(luò)合物組成的測(cè)定 58 （ 1） 示差吸光光度法的原理 吸光光度法一般僅適用于微量組分的測(cè)定 ， 當(dāng)待測(cè)定組分濃度過高或過低 ， 會(huì)引起很大的測(cè)量誤差 ， 導(dǎo)致準(zhǔn)確度降低 。 目前 ， 主要有高濃度示差吸光光度法 、低濃度示差吸光光度法和使用兩個(gè)參比溶液的精密示差吸光光度法 。 示差吸光光度法 59 吸光度差與這兩種溶液的濃度差成正比。 相對(duì)相對(duì) bccbccbAAAA xx ??? ????????? )( 00xxA c b?? （空白溶液作參比）00A c b?? （空白溶液作參比）60 （ 2） 示差吸光光度法的誤差 Δc(即 cx－ co)， 測(cè)量誤差為 x%， 結(jié)果為 cx177。 cx 因 cx只是稍大于 co， 故 cx總是遠(yuǎn)大于 Δc， 故示差吸光光度法的準(zhǔn)確度高 。 61 （ 1）雙波長(zhǎng)吸光光度法的原理 使兩束不同波長(zhǎng)的單色光以一定的時(shí)間間隔交替地照射同一吸收池，測(cè)量并記錄兩者吸光度的差值。分析方法的靈敏度、選擇性及測(cè)量的精密度高。 雙波長(zhǎng)吸光光度法 62 ΔA與吸光物質(zhì)濃度成正比 。 只用一個(gè)吸收池 ， 以試液本身對(duì)某一波長(zhǎng)的光 的吸光度為參比 ， 消除了因試液與參比液及兩個(gè)吸 收池之間的差異引起的測(cè)量誤差 ， 提高測(cè)量的準(zhǔn)確度 。 * 單組分的測(cè)定 ：進(jìn)行單組分的測(cè)定 ， 以絡(luò)合物吸收峰作測(cè)量波長(zhǎng) ， 參比波長(zhǎng)的選擇有：以等吸收點(diǎn)為參比波長(zhǎng) 。 64 * 兩組分共存時(shí)的分別測(cè)定 ： 當(dāng)兩種組分的吸收光譜有重疊時(shí)，要測(cè)定其中一個(gè)組分就必須消除另一組分的光吸收。 65 測(cè)定苯酚 (X)與 2， 4，6三氯苯酚 (Y)混合物中的苯酚時(shí)就可用這種方法。選擇波長(zhǎng) λ1或 λ1‘（等吸收點(diǎn)）作為參比波長(zhǎng)，則可以消除三氯苯酚對(duì)苯酚測(cè)定的干擾。 以吸光度 A為縱坐標(biāo)， [R]/[M]為橫坐標(biāo)作圖。 當(dāng)溶液中絡(luò)合物 MRn濃度最大時(shí) ， cR/cM比值為 n。 69 1 了解分子對(duì)光的吸收與溶液顏色的關(guān)系 . 吸收曲線 — 定性分析的基礎(chǔ) 。 2 了解目視比色法 、 分光光度法的特點(diǎn) ， 分光光度計(jì)的基本部件 。 4 顯色反應(yīng)及條件的確定 : 顯色劑用量 、 酸度 、 時(shí)間 、 溫度 、 干擾及消除 。 第六章 小 結(jié)
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