6流式細(xì)胞術(shù)的質(zhì)量控制和影響因素-在線瀏覽
2025-04-09 21:02本頁(yè)面
【正文】 取無自溶，壞死的組織對(duì)腫瘤組織標(biāo)本，選取含腫瘤組織細(xì)胞豐富的區(qū)域，且經(jīng)病理形態(tài)或細(xì)胞學(xué)核實(shí)病理診斷 三 、 石蠟包埋組織單細(xì)胞制備的質(zhì)量控制 切取適當(dāng)厚度的石蠟組織片，大量研究證明，切取 4050μm厚度的切片是適宜的，過厚的組織片消化費(fèi)時(shí)，消化下來的細(xì)胞數(shù)少，過薄的切片可產(chǎn)生大量的細(xì)胞碎片，影響檢測(cè)結(jié)果，使腫瘤異倍體的檢出率減少，我們研究了石蠟切片不同厚度 (5,10,20,30,40, 50μm)對(duì)流式分析 DNA的影響，發(fā)現(xiàn)較薄的切片造成碎片較多 ,噪音增加 ,組方圖的基線提高 ,影響倍體分析的精度 在組織脫蠟的過程中，一定將蠟脫凈，殘留的石蠟可影響酶的消化活性，檢查是否將蠟脫凈的方法是棄去二甲苯，加入 100%乙醇，如果無絮狀物浮起，表示蠟已脫凈 梯度酒精 (100% 70% 50%)水化要充分 , 使組織還原到與新鮮組織相似的狀態(tài)。 ⑵ 異倍體率減少 ， 由于組方圖細(xì)胞峰 CV值較大 ， 一些近于二倍體的 DNA異倍體峰被掩蓋 石蠟包埋組織的單細(xì)胞制備方法的建立，使流式細(xì)胞術(shù)在醫(yī)學(xué)研究中得到更廣泛的應(yīng)用，但仍存在一些問題有待進(jìn)一步解決，主要存在問題如下： ⑶ S期細(xì)胞百分比不如新鮮組織的 S期計(jì)算精確 ， S期細(xì)胞的計(jì)算偏高 ， 這仍然與 CV值較大有關(guān) ⑷ DNA二倍體標(biāo)準(zhǔn)不穩(wěn)定 Schutter等發(fā)現(xiàn)用新鮮正常組織的二倍體細(xì)胞或者用其他生物細(xì)胞 DNA含量 (例如，雞紅細(xì)胞，鱒魚血細(xì)胞等 )作為石蠟包埋組織細(xì)胞 DNA含量的標(biāo)準(zhǔn)不適用，石蠟包埋組織比新鮮組織細(xì)胞 DNA熒光強(qiáng)度低，且樣品間的熒光強(qiáng)度不穩(wěn)定 ⑷ DNA二倍體標(biāo)準(zhǔn)不穩(wěn)定 對(duì)存檔中的石蠟包埋組織材料，可以采用正常組織石蠟包埋標(biāo)本，作為一個(gè)外參的二倍體標(biāo)準(zhǔn)，但要求采用的外參二倍體樣品和腫瘤樣品中加入內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)樣品 (例如雞血細(xì)胞等 ) 四 、 脫落細(xì)胞樣品的采集 脫落細(xì)胞樣品的采集要保證足夠的細(xì)胞數(shù)，在臨床實(shí)際工作中，可以收集到大量自然脫落的細(xì)胞標(biāo)本，這些細(xì)胞標(biāo)本經(jīng)簡(jiǎn)單處理后，即可得到較好的單分散細(xì)胞，例如胸腹水，內(nèi)鏡刷檢細(xì)胞，膀脫沖洗液等 四 、 脫落細(xì)胞樣品的采集 這些材料得到的流式結(jié)果，要謹(jǐn)慎的分析解釋結(jié)果的生物學(xué)意義。原因是其中的白細(xì)胞常有變性，且樣品細(xì)胞數(shù)量少。目前常使用的熒光染料有 EB、 PI、 DAPI、 AO、 FITC、 PE等，對(duì)細(xì)胞染色時(shí)應(yīng)特別注意染料的特性及量效關(guān)系，定量細(xì)胞學(xué)熒光染色易受到多種因素的影響，以致造成不正確的測(cè)定結(jié)果，了解熒光染色的影響因素，將有助于在熒光定量細(xì)胞學(xué)分析中，盡可能避免測(cè)量誤差，并進(jìn)行有效的校正措施，如下的一些常見影響因素需特別注意。溫度升高可造成溶液粘滯性增加，溶劑和熒光染料分子的動(dòng)力增大，這就使熒光分子和其他分子之間的相互碰撞幾率增加，使熒光猝滅的可能性增加。就一般熒光物質(zhì)而言，溫度系數(shù)大約為 1%，如果溫度在 20℃ 時(shí)，一般熒光染料即出現(xiàn)溫度猝滅效應(yīng)，隨溫度的升高，熒光猝滅作用越強(qiáng)，以致造成完全猝滅，溫度在
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