6流式細(xì)胞術(shù)的質(zhì)量控制和影響因素(已修改)
2025-03-16 21:02 本頁(yè)面
【正文】 流式細(xì)胞術(shù)的質(zhì)量控制和影響因素 一 、 標(biāo)本的采集和固定方法的質(zhì)量控制 標(biāo)本采集是十分重要的環(huán)節(jié)，在標(biāo)本的采集過(guò)程，需注意： ①手術(shù)切除的新鮮標(biāo)本或活檢針吸標(biāo)本取材時(shí)，要避免出血壞死組織。 ②標(biāo)本采集后要及時(shí)固定或深低溫保存，以免組織發(fā)生自溶， DNA降解，而造成測(cè)試結(jié)果的誤差。 ③固定劑要采用對(duì)組織細(xì)胞穿透性強(qiáng)的濃度。 例如 70%的乙醇固定比 75%以上的濃度固定效果好，因?yàn)楦邼舛鹊囊掖汲Ｔ斐杉?xì)胞表面快速形成一個(gè)蛋白膜，致使細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)固定不良。 有作者分析研究了自溶對(duì) DNA測(cè)定的影響，發(fā)現(xiàn)自溶的組織細(xì)胞常出現(xiàn)假性異倍體，且不固定的組織細(xì)胞隨時(shí)間的延長(zhǎng)， DNA含量呈梯度降低 根據(jù)檢測(cè)的目的，選擇什么類型的固定劑，對(duì)流式檢測(cè)質(zhì)量也有顯著的影響。 例如細(xì)胞 DNA的分析，使用醇類固定劑較好而不選擇醛類固定劑，醛類固定劑明顯影響細(xì)胞 DNA熒光發(fā)射強(qiáng)度。實(shí)驗(yàn)證明，醛類固定劑對(duì)插入性熒光染料與核酸的結(jié)合有很強(qiáng)的干擾作用，其熒光強(qiáng)度僅相當(dāng)于新鮮組織熒光強(qiáng)度的5070%左右。 如果作流式免疫研究工作，采用新鮮組織是最好的選擇。在不能及時(shí)檢測(cè)又沒(méi)有低溫保存條件時(shí)，要根據(jù)所測(cè)物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)還是在細(xì)胞膜表面，在膜表面的抗原物質(zhì)，以醛類固定劑為宜，盡管醛類固定劑產(chǎn)生的非特異性熒光較強(qiáng)，但不宜采用醇類固定劑，因醇類固定劑可使細(xì)胞表面的糖蛋白、脂蛋白脫落丟失，失去標(biāo)記的位點(diǎn)。 如所測(cè)抗原物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)，可以使用醇類固定劑，這種固定方法簡(jiǎn)便易行，無(wú)需特殊低溫冷凍條件，在一般冰箱 (04℃ )放置即可，能很好的保持細(xì)胞形態(tài)和生物化學(xué)成分不發(fā)生變性。 二、單細(xì)胞懸液制備的質(zhì)量控制 人體的末梢血液和骨髓細(xì)胞及淋巴組織是人體組織中缺乏細(xì)胞間連結(jié)裝置的組織，尤其是血和骨髓細(xì)胞是天然的單分散細(xì)胞材料，其中的細(xì)胞成分在生理狀態(tài)下呈單分散狀態(tài)，它是流式分析最合適的樣品來(lái)源。 二、單細(xì)胞懸液制備的質(zhì)量控制 全血中含有多種有形成分，流式細(xì)胞檢測(cè)是以某一群細(xì)胞為檢測(cè)對(duì)象，因此在檢測(cè)前須將所測(cè)的某群細(xì)胞成分分離出來(lái)。例如，以淋巴細(xì)胞 DNA定量分析為例，就須把淋巴細(xì)胞分離出來(lái)，而將其他有核細(xì)胞或紅細(xì)胞去除，對(duì)于血小板的分析樣品制備過(guò)程中須防止過(guò)高離心速度造成血小板膜的損傷，出現(xiàn)血小板凝集 新鮮實(shí)體組織單細(xì)胞樣品的制備，實(shí)體組織是流式分析工作的主要材料來(lái)源，但對(duì)其分散單細(xì)胞樣品的技術(shù)和方法，仍存在著很多問(wèn)題，仍需大量的探索工作。就目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)實(shí)體組織分散單細(xì)胞還沒(méi)有找到一個(gè)適用的又通用方法，甚至同樣組織，用于不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，就需要不同的方法處理，或者每一種組織就是一個(gè)單獨(dú)的問(wèn)題 因此必須根據(jù)實(shí)際情況，去選擇合適有效的單分散方法，選用的方法必須達(dá)到細(xì)胞產(chǎn)量高，細(xì)胞損傷小的目標(biāo)，但實(shí)際工作中達(dá)到這個(gè)目標(biāo)是困難的，多年來(lái)對(duì)于實(shí)體組織的分散解聚多采用酶學(xué)法，化學(xué)法、機(jī)械物
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