6流式細胞術(shù)的質(zhì)量控制和影響因素(已修改)
2025-03-16 21:02 本頁面
【正文】 流式細胞術(shù)的質(zhì)量控制和影響因素 一 、 標本的采集和固定方法的質(zhì)量控制 標本采集是十分重要的環(huán)節(jié)，在標本的采集過程，需注意： ①手術(shù)切除的新鮮標本或活檢針吸標本取材時，要避免出血壞死組織。 ②標本采集后要及時固定或深低溫保存，以免組織發(fā)生自溶， DNA降解，而造成測試結(jié)果的誤差。 ③固定劑要采用對組織細胞穿透性強的濃度。 例如 70%的乙醇固定比 75%以上的濃度固定效果好，因為高濃度的乙醇常造成細胞表面快速形成一個蛋白膜，致使細胞內(nèi)的物質(zhì)固定不良。 有作者分析研究了自溶對 DNA測定的影響，發(fā)現(xiàn)自溶的組織細胞常出現(xiàn)假性異倍體，且不固定的組織細胞隨時間的延長， DNA含量呈梯度降低 根據(jù)檢測的目的，選擇什么類型的固定劑，對流式檢測質(zhì)量也有顯著的影響。 例如細胞 DNA的分析，使用醇類固定劑較好而不選擇醛類固定劑，醛類固定劑明顯影響細胞 DNA熒光發(fā)射強度。實驗證明，醛類固定劑對插入性熒光染料與核酸的結(jié)合有很強的干擾作用，其熒光強度僅相當于新鮮組織熒光強度的5070%左右。 如果作流式免疫研究工作，采用新鮮組織是最好的選擇。在不能及時檢測又沒有低溫保存條件時，要根據(jù)所測物質(zhì)在細胞內(nèi)還是在細胞膜表面，在膜表面的抗原物質(zhì)，以醛類固定劑為宜，盡管醛類固定劑產(chǎn)生的非特異性熒光較強，但不宜采用醇類固定劑，因醇類固定劑可使細胞表面的糖蛋白、脂蛋白脫落丟失，失去標記的位點。 如所測抗原物質(zhì)在細胞內(nèi)，可以使用醇類固定劑，這種固定方法簡便易行，無需特殊低溫冷凍條件，在一般冰箱 (04℃ )放置即可，能很好的保持細胞形態(tài)和生物化學成分不發(fā)生變性。 二、單細胞懸液制備的質(zhì)量控制 人體的末梢血液和骨髓細胞及淋巴組織是人體組織中缺乏細胞間連結(jié)裝置的組織，尤其是血和骨髓細胞是天然的單分散細胞材料，其中的細胞成分在生理狀態(tài)下呈單分散狀態(tài)，它是流式分析最合適的樣品來源。 二、單細胞懸液制備的質(zhì)量控制 全血中含有多種有形成分，流式細胞檢測是以某一群細胞為檢測對象，因此在檢測前須將所測的某群細胞成分分離出來。例如，以淋巴細胞 DNA定量分析為例，就須把淋巴細胞分離出來，而將其他有核細胞或紅細胞去除，對于血小板的分析樣品制備過程中須防止過高離心速度造成血小板膜的損傷，出現(xiàn)血小板凝集 新鮮實體組織單細胞樣品的制備，實體組織是流式分析工作的主要材料來源，但對其分散單細胞樣品的技術(shù)和方法，仍存在著很多問題，仍需大量的探索工作。就目前，國內(nèi)外對實體組織分散單細胞還沒有找到一個適用的又通用方法，甚至同樣組織，用于不同的實驗?zāi)康?，就需要不同的方法處理，或者每一種組織就是一個單獨的問題 因此必須根據(jù)實際情況，去選擇合適有效的單分散方法，選用的方法必須達到細胞產(chǎn)量高，細胞損傷小的目標，但實際工作中達到這個目標是困難的，多年來對于實體組織的分散解聚多采用酶學法，化學法、機械物
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