6流式細胞術的質(zhì)量控制和影響因素-wenkub.com
2025-03-06 21:02 本頁面
【正文】 2 減少重疊細胞和碎片。 ②洗滌不充分。 假性異倍體的識別與排除： 假性異倍體多出現(xiàn)在近二倍體腫瘤(Near diploid)或 DNA指數(shù)小于 異倍體腫瘤。 ◆同樣的染色方法 , 同步染色。但實際測量過程 ,有部分組方圖有時會出現(xiàn) G0/1峰的右偏峰或脫尾(Teiling)現(xiàn)象，或出現(xiàn)一個右或左側的峭峰 (Kurtosis)，造成 S期細胞計算的不準確性。鑒于熒光染料濃度對熒光強度的影響之大，因此要選擇最合適的濃度，對于熒光定量檢測技術是極其重要的 值對熒光發(fā)射強度的影響： 熒光分子在溶劑中處于離子化狀態(tài)，因此，溶液中的氫離子濃度對熒光強度影響極大，熒光分子發(fā)光的最有利條件是其在溶劑中呈離子化或極化狀態(tài)，從而通過染料分子本身所具有的斥力作用盡可能避免分子之間的相互碰撞作用，每一種熒光分子都有自己合適的 pH值 ： 像醛類固定劑 (戊二醛，甲醛 ),可以干擾熒光染料與核酸分子的結合 ,像溶劑中的一些不發(fā)光的物質(zhì) (如溴化物、碘化物、氨基苯、硝基苯、鐵、銀離子等 )均可造成熒光的猝滅現(xiàn)象 六 、 流式細胞分析資料處理的質(zhì)量控制 樣品中的碎片雜質(zhì)和團塊過多 ， 所測細胞數(shù)僅占 20%以下 ， 組方圖的基線抬高 ， 尤其不能進行細胞周期分析 ， 盡管目前有計算機的硬件刪除或軟件補償來消除碎片和團塊的影響 ， 也應放棄不作分析處理 六 、 流式細胞分析資料處理的質(zhì)量控制 一個樣品細胞數(shù)檢測應在 1萬個細胞(不包括碎片、雜質(zhì)、團塊 )。溫度升高可造成溶液粘滯性增加，溶劑和熒光染料分子的動力增大，這就使熒光分子和其他分子之間的相互碰撞幾率增加，使熒光猝滅的可能性增加。原因是其中的白細胞常有變性，且樣品細胞數(shù)量少。 三 、 石蠟包埋組織單細胞制備的質(zhì)量控制 石蠟包埋組織標本的材料選擇，應經(jīng)病理醫(yī)師仔細檢查，選取無自溶，壞死的組織對腫瘤組織標本，選取含腫瘤組織細胞豐富的區(qū)域，且經(jīng)病理形態(tài)或細胞學核實病理診斷 三 、 石蠟包埋組織單細胞制備的質(zhì)量控制 切取適當厚度的石蠟組織片，大量研究證明，切取 4050μm厚度的切片是適宜的，過厚的組織片消化費時，消化下來的細胞數(shù)少，過薄的切片可產(chǎn)生大量的細胞碎片，影響檢測結果，使腫瘤異倍體的檢出率減少，我們研究了石蠟切片不同厚度 (5,10,20,30,40, 50μm)對流式分析 DNA的影響，發(fā)現(xiàn)較薄的切片造成碎片較多 ,噪音增加 ,組方圖的基線提高 ,影響倍體分析的精度 在組織脫蠟的過程中，一定將蠟脫凈，殘留的石蠟可影響酶的消化活性，檢查是否將蠟脫凈的方法是棄去二甲苯，加入 100%乙醇，如果無絮狀物浮起，表示蠟已脫凈 梯度酒精 (100% 70% 50%)水化要充分 , 使組織還原到與新鮮組織相似的狀態(tài)。并要注意酶的活性條件和影響因素，要注意酶的溶劑，消化時間， pH值，濃度等對酶活性的影響 ①
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