【正文】 對于二倍體峰左側(cè)出現(xiàn)的異倍體峰(稱亞二倍體 )要首先排除自溶的原因。就一般熒光物質(zhì)而言，溫度系數(shù)大約為 1%，如果溫度在 20℃ 時，一般熒光染料即出現(xiàn)溫度猝滅效應(yīng)，隨溫度的升高，熒光猝滅作用越強(qiáng)，以致造成完全猝滅，溫度在 20℃ 以下，熒光分子發(fā)光量子產(chǎn)額的變化不明顯，基本上保持恒量。就目前，國內(nèi)外對實體組織分散單細(xì)胞還沒有找到一個適用的又通用方法，甚至同樣組織，用于不同的實驗?zāi)康模托枰煌姆椒ㄌ幚?，或者每一種組織就是一個單獨(dú)的問題 因此必須根據(jù)實際情況，去選擇合適有效的單分散方法，選用的方法必須達(dá)到細(xì)胞產(chǎn)量高，細(xì)胞損傷小的目標(biāo)，但實際工作中達(dá)到這個目標(biāo)是困難的，多年來對于實體組織的分散解聚多采用酶學(xué)法，化學(xué)法、機(jī)械物理方法以及低滲脫核方法等，根據(jù)各種組織的特點(diǎn)，以及實驗?zāi)康牡牟煌?，可選擇不同的方法。 ③固定劑要采用對組織細(xì)胞穿透性強(qiáng)的濃度。 以上幾種方法是目前對實體組織解聚常用的方法，往往不是單用，常常是一種或二種方法的結(jié)合使用，總的來說，對實體組織分散為單細(xì)胞還存在很多困難，因此還需要深入探討流式樣品的制備技術(shù)，制備出完整細(xì)胞產(chǎn)量高，細(xì)胞損傷小的合格懸液 , 獲得更好的流式檢測結(jié)果。大量報道認(rèn)為， S期有明顯的臨床預(yù)后意義，但 S期計算方面容易產(chǎn)生誤差 ,而造成評價 S期在腫瘤生物學(xué)行為不確切性 對于 S期細(xì)胞計算較準(zhǔn)確的方法，就是分別作兩次樣品的檢測，加入 DNA倍體標(biāo)準(zhǔn)樣品檢測一次，不加二倍體標(biāo)準(zhǔn)的樣品檢測一次， G0/1峰應(yīng)是一個正態(tài)分布(或稱高斯分布 )。 解決這些影響因素的方法： 1 使動物血清蛋白等封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，熒光抗體染色后充分洗滌。 ◆同樣的儀器檢測條件。制備出一個合格的單細(xì)胞樣品，其細(xì)胞數(shù)要求在 1 106/ml， 其雜質(zhì)碎片團(tuán)塊應(yīng)小于 2%以下，否則應(yīng)放棄檢測，對腫瘤細(xì)胞 DNA異倍體的分析樣品中，至少應(yīng)有 20%的腫瘤細(xì)胞存在， (因占主峰 1/5以上的異倍體峰才可確認(rèn)為異倍體 ) 五 、 細(xì)胞懸液熒光染色的質(zhì)量控制 單細(xì)胞懸液樣品熒光染色對流式定量分析的精度很重要。在不能及時檢測又沒有低溫保存條件時，要根據(jù)所測物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)還是在細(xì)胞膜表面，在膜表面的抗原物質(zhì)，以醛類固定劑為宜，盡管醛類固定劑產(chǎn)生的非特異性熒光較強(qiáng)，但不宜采用醇類固定劑，因醇類固定劑可使細(xì)胞表面的糖蛋白、脂蛋白脫落丟失，失去標(biāo)記的位點(diǎn)。 如果作流式免疫研究工作，采用新鮮組織是最好的選擇。原因是其中的白細(xì)胞常有變性，且樣品細(xì)胞數(shù)量少。 ◆同樣的染色方法 , 同步染色。 2 減少重疊細(xì)胞和碎片。但實際測量過程 ,有部分組方圖有時會出現(xiàn) G0/1峰的右偏峰或脫尾(Teiling)現(xiàn)象，或出現(xiàn)一個右或左側(cè)的峭峰 (Kurtosis)，造成 S期細(xì)胞計算的不準(zhǔn)確性。 三 、 石蠟包埋組織單細(xì)胞制備的質(zhì)量控制 石蠟包埋組織標(biāo)本的材料選擇，應(yīng)經(jīng)病理醫(yī)師仔細(xì)檢查，選取無自溶，壞死的組織對腫瘤組織標(biāo)本，選取含腫瘤組織細(xì)胞豐富的區(qū)域，且經(jīng)