6流式細(xì)胞術(shù)的質(zhì)量控制和影響因素-文庫吧
2025-02-26 21:02 本頁面
【正文】 理方法以及低滲脫核方法等，根據(jù)各種組織的特點(diǎn)，以及實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡牟煌蛇x擇不同的方法。 ① 選則酶學(xué)方法時(shí)，應(yīng)注意選擇酶類型的問題，含有大量結(jié)締組織的，選擇膠原酶好，不宜選擇胃蛋白酶或胰酶。并要注意酶的活性條件和影響因素，要注意酶的溶劑，消化時(shí)間， pH值，濃度等對(duì)酶活性的影響 ① 酶學(xué)方法分散組織都有一定的應(yīng)用限制，特別用于流式免疫熒光實(shí)驗(yàn)時(shí)，酶處理可能改變或丟失膜的抗原成分，從而影響分析結(jié)果，由于酶學(xué)方法分散下來的細(xì)胞產(chǎn)量低，用組織較多，還要注意酶的純度，活性單位，以及生產(chǎn)廠家對(duì)酶的污染 ② 化學(xué)方法，往往單獨(dú)應(yīng)用分散組織效果不理想，應(yīng)與酶學(xué)方法綜合使用，分散效果更佳。 ③機(jī)械方法，常采用剪碎，網(wǎng)搓研磨，細(xì)針抽吸等，對(duì)細(xì)胞損傷大，產(chǎn)生的細(xì)胞碎片多，細(xì)胞團(tuán)塊多，在使用機(jī)械法時(shí)，要給于組織適當(dāng)?shù)膲毫Γ@種適當(dāng)?shù)膲毫π枰休^多的制樣實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)技術(shù)人員來操作。 ④ 低滲方法，其溶液是一種低滲液體，造成細(xì)胞膜的破壞，使細(xì)胞核自行釋放出來，是一個(gè)裸核懸液樣品，本方法簡(jiǎn)便，但要避免脫核時(shí)間過長(zhǎng)，造成核膨脹碎裂。 以上幾種方法是目前對(duì)實(shí)體組織解聚常用的方法，往往不是單用，常常是一種或二種方法的結(jié)合使用，總的來說，對(duì)實(shí)體組織分散為單細(xì)胞還存在很多困難，因此還需要深入探討流式樣品的制備技術(shù)，制備出完整細(xì)胞產(chǎn)量高，細(xì)胞損傷小的合格懸液 , 獲得更好的流式檢測(cè)結(jié)果。 三 、 石蠟包埋組織單細(xì)胞制備的質(zhì)量控制 石蠟包埋組織標(biāo)本的材料選擇，應(yīng)經(jīng)病理醫(yī)師仔細(xì)檢查，選取無自溶，壞死的組織對(duì)腫瘤組織標(biāo)本，選取含腫瘤組織細(xì)胞豐富的區(qū)域，且經(jīng)病理形態(tài)或細(xì)胞學(xué)核實(shí)病理診斷 三 、 石蠟包埋組織單細(xì)胞制備的質(zhì)量控制 切取適當(dāng)厚度的石蠟組織片，大量研究證明，切取 4050μm厚度的切片是適宜的，過厚的組織片消化費(fèi)時(shí)，消化下來的細(xì)胞數(shù)少，過薄的切片可產(chǎn)生大量的細(xì)胞碎片，影響檢測(cè)結(jié)果，使腫瘤異倍體的檢出率減少，我們研究了石蠟切片不同厚度 (5,10,20,30,40, 50μm)對(duì)流式分析 DNA的影響，發(fā)現(xiàn)較薄的切片造成碎片較多 ,噪音增加 ,組方圖的基線提高 ,影響倍體分析的精度 在組織脫蠟的過程中，一定將蠟脫凈，殘留的石蠟可影響酶的消化活性，檢查是否將蠟脫凈的方法是棄去二甲苯，加入 100%乙醇，如果無絮狀物浮起，表示蠟已脫凈 梯度酒精 (100% 70% 50%)水化要充分 , 使組織還原到與新鮮組織相似的狀態(tài)。 消化酶液要掌握適當(dāng)?shù)臐舛取?pH值、溫度等，不造成酶的活性降低為宜，消化時(shí)間很重要，時(shí)間短細(xì)胞消化不下來，時(shí)間長(zhǎng)，消化下來的細(xì)胞又被破壞，在制備石蠟包埋單細(xì)胞時(shí)，常規(guī)使用%胃蛋白酶（ PH ） 石蠟包埋組織的單細(xì)胞制備方法的建立，使流式細(xì)胞術(shù)在醫(yī)學(xué)研究中得到更廣泛的應(yīng)用，但仍存在一些問題有待進(jìn)一步解決，主要存在問題如下： ⑴ 樣品中的碎片較多 ， 所測(cè)得的 DNA組方圖質(zhì)量不及新鮮組織好 ， 組方圖的峰位較寬 ， CV值偏大 。 ⑵ 異倍體率減少 ， 由于組方圖細(xì)胞峰 CV值較大
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