6流式細胞術(shù)的質(zhì)量控制和影響因素-wenkub
2023-03-27 21:02:52 本頁面
【正文】 酶學(xué)方法分散組織都有一定的應(yīng)用限制，特別用于流式免疫熒光實驗時，酶處理可能改變或丟失膜的抗原成分，從而影響分析結(jié)果，由于酶學(xué)方法分散下來的細胞產(chǎn)量低，用組織較多，還要注意酶的純度，活性單位，以及生產(chǎn)廠家對酶的污染 ② 化學(xué)方法，往往單獨應(yīng)用分散組織效果不理想，應(yīng)與酶學(xué)方法綜合使用，分散效果更佳。 二、單細胞懸液制備的質(zhì)量控制 全血中含有多種有形成分，流式細胞檢測是以某一群細胞為檢測對象，因此在檢測前須將所測的某群細胞成分分離出來。 如果作流式免疫研究工作，采用新鮮組織是最好的選擇。 例如 70%的乙醇固定比 75%以上的濃度固定效果好，因為高濃度的乙醇常造成細胞表面快速形成一個蛋白膜，致使細胞內(nèi)的物質(zhì)固定不良。 流式細胞術(shù)的質(zhì)量控制和影響因素 一 、 標本的采集和固定方法的質(zhì)量控制 標本采集是十分重要的環(huán)節(jié)，在標本的采集過程，需注意： ①手術(shù)切除的新鮮標本或活檢針吸標本取材時，要避免出血壞死組織。 有作者分析研究了自溶對 DNA測定的影響，發(fā)現(xiàn)自溶的組織細胞常出現(xiàn)假性異倍體，且不固定的組織細胞隨時間的延長， DNA含量呈梯度降低 根據(jù)檢測的目的，選擇什么類型的固定劑，對流式檢測質(zhì)量也有顯著的影響。在不能及時檢測又沒有低溫保存條件時，要根據(jù)所測物質(zhì)在細胞內(nèi)還是在細胞膜表面，在膜表面的抗原物質(zhì)，以醛類固定劑為宜，盡管醛類固定劑產(chǎn)生的非特異性熒光較強，但不宜采用醇類固定劑，因醇類固定劑可使細胞表面的糖蛋白、脂蛋白脫落丟失，失去標記的位點。例如，以淋巴細胞 DNA定量分析為例，就須把淋巴細胞分離出來，而將其他有核細胞或紅細胞去除，對于血小板的分析樣品制備過程中須防止過高離心速度造成血小板膜的損傷，出現(xiàn)血小板凝集 新鮮實體組織單細胞樣品的制備，實體組織是流式分析工作的主要材料來源，但對其分散單細胞樣品的技術(shù)和方法，仍存在著很多問題，仍需大量的探索工作。 ③機械方法，常采用剪碎，網(wǎng)搓研磨，細針抽吸等，對細胞損傷大，產(chǎn)生的細胞碎片多，細胞團塊多，在使用機械法時，要給于組織適當?shù)膲毫Γ@種適當?shù)膲毫π枰休^多的制樣實踐經(jīng)驗技術(shù)人員來操作。 消化酶液要掌握適當?shù)臐舛取?pH值、溫度等，不造成酶的活性降低為宜，消化時間很重要，時間短細胞消化不下來，時間長，消化下來的細胞又被破壞，在制備石蠟包埋單細胞時，常規(guī)使用%胃蛋白酶（ PH ） 石蠟包埋組織的單細胞制備方法的建立，使流式細胞術(shù)在醫(yī)學(xué)研究中得到更廣泛的應(yīng)用，但仍存在一些問題有待進一步解決，主要存在問題如下： ⑴ 樣品中的碎片較多 ， 所測得的 DNA組方圖質(zhì)量不及新鮮組織好 ， 組方圖的峰位較寬 ， CV值偏大 。制備出一個合格的單細胞樣品，其細胞數(shù)要求在 1 106/ml， 其雜質(zhì)碎片團塊應(yīng)小于 2%以下，否則應(yīng)放棄檢測，對腫瘤細胞 DNA異倍體的分析樣品中，至少應(yīng)有 20%的腫瘤細胞存在， (因占主峰 1/5以上的異倍體峰才可確認為異倍體 ) 五 、
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