6流式細(xì)胞術(shù)的質(zhì)量控制和影響因素-wenkub
2023-03-27 21:02:52 本頁(yè)面
【正文】 酶學(xué)方法分散組織都有一定的應(yīng)用限制，特別用于流式免疫熒光實(shí)驗(yàn)時(shí)，酶處理可能改變或丟失膜的抗原成分，從而影響分析結(jié)果，由于酶學(xué)方法分散下來(lái)的細(xì)胞產(chǎn)量低，用組織較多，還要注意酶的純度，活性單位，以及生產(chǎn)廠家對(duì)酶的污染 ② 化學(xué)方法，往往單獨(dú)應(yīng)用分散組織效果不理想，應(yīng)與酶學(xué)方法綜合使用，分散效果更佳。 二、單細(xì)胞懸液制備的質(zhì)量控制 全血中含有多種有形成分，流式細(xì)胞檢測(cè)是以某一群細(xì)胞為檢測(cè)對(duì)象，因此在檢測(cè)前須將所測(cè)的某群細(xì)胞成分分離出來(lái)。 如果作流式免疫研究工作，采用新鮮組織是最好的選擇。 例如 70%的乙醇固定比 75%以上的濃度固定效果好，因?yàn)楦邼舛鹊囊掖汲Ｔ斐杉?xì)胞表面快速形成一個(gè)蛋白膜，致使細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)固定不良。 流式細(xì)胞術(shù)的質(zhì)量控制和影響因素 一 、 標(biāo)本的采集和固定方法的質(zhì)量控制 標(biāo)本采集是十分重要的環(huán)節(jié)，在標(biāo)本的采集過(guò)程，需注意： ①手術(shù)切除的新鮮標(biāo)本或活檢針吸標(biāo)本取材時(shí)，要避免出血壞死組織。 有作者分析研究了自溶對(duì) DNA測(cè)定的影響，發(fā)現(xiàn)自溶的組織細(xì)胞常出現(xiàn)假性異倍體，且不固定的組織細(xì)胞隨時(shí)間的延長(zhǎng)， DNA含量呈梯度降低 根據(jù)檢測(cè)的目的，選擇什么類(lèi)型的固定劑，對(duì)流式檢測(cè)質(zhì)量也有顯著的影響。在不能及時(shí)檢測(cè)又沒(méi)有低溫保存條件時(shí)，要根據(jù)所測(cè)物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)還是在細(xì)胞膜表面，在膜表面的抗原物質(zhì)，以醛類(lèi)固定劑為宜，盡管醛類(lèi)固定劑產(chǎn)生的非特異性熒光較強(qiáng)，但不宜采用醇類(lèi)固定劑，因醇類(lèi)固定劑可使細(xì)胞表面的糖蛋白、脂蛋白脫落丟失，失去標(biāo)記的位點(diǎn)。例如，以淋巴細(xì)胞 DNA定量分析為例，就須把淋巴細(xì)胞分離出來(lái)，而將其他有核細(xì)胞或紅細(xì)胞去除，對(duì)于血小板的分析樣品制備過(guò)程中須防止過(guò)高離心速度造成血小板膜的損傷，出現(xiàn)血小板凝集 新鮮實(shí)體組織單細(xì)胞樣品的制備，實(shí)體組織是流式分析工作的主要材料來(lái)源，但對(duì)其分散單細(xì)胞樣品的技術(shù)和方法，仍存在著很多問(wèn)題，仍需大量的探索工作。 ③機(jī)械方法，常采用剪碎，網(wǎng)搓研磨，細(xì)針抽吸等，對(duì)細(xì)胞損傷大，產(chǎn)生的細(xì)胞碎片多，細(xì)胞團(tuán)塊多，在使用機(jī)械法時(shí)，要給于組織適當(dāng)?shù)膲毫?，這種適當(dāng)?shù)膲毫π枰休^多的制樣實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)技術(shù)人員來(lái)操作。 消化酶液要掌握適當(dāng)?shù)臐舛取?pH值、溫度等，不造成酶的活性降低為宜，消化時(shí)間很重要，時(shí)間短細(xì)胞消化不下來(lái)，時(shí)間長(zhǎng)，消化下來(lái)的細(xì)胞又被破壞，在制備石蠟包埋單細(xì)胞時(shí)，常規(guī)使用%胃蛋白酶（ PH ） 石蠟包埋組織的單細(xì)胞制備方法的建立，使流式細(xì)胞術(shù)在醫(yī)學(xué)研究中得到更廣泛的應(yīng)用，但仍存在一些問(wèn)題有待進(jìn)一步解決，主要存在問(wèn)題如下： ⑴ 樣品中的碎片較多 ， 所測(cè)得的 DNA組方圖質(zhì)量不及新鮮組織好 ， 組方圖的峰位較寬 ， CV值偏大 。制備出一個(gè)合格的單細(xì)胞樣品，其細(xì)胞數(shù)要求在 1 106/ml， 其雜質(zhì)碎片團(tuán)塊應(yīng)小于 2%以下，否則應(yīng)放棄檢測(cè)，對(duì)腫瘤細(xì)胞 DNA異倍體的分析樣品中，至少應(yīng)有 20%的腫瘤細(xì)胞存在， (因占主峰 1/5以上的異倍體峰才可確認(rèn)為異倍體 ) 五 、
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