6流式細(xì)胞術(shù)的質(zhì)量控制和影響因素-資料下載頁(yè)
2025-03-08 21:02本頁(yè)面
【正文】 體標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)量控制： DNA倍體的標(biāo)準(zhǔn)是根據(jù)正常二倍體細(xì)胞DNA含量的分布范圍而確定的，對(duì)于二倍體的標(biāo)準(zhǔn)的選擇，應(yīng)遵照如下原則： ◆采用同個(gè)體同源正常組織。 ◆同種固定方法。 ◆相同的樣品處理方法。 ◆同樣的染色方法 , 同步染色。 ◆同樣的儀器檢測(cè)條件。 ◆正常二倍體細(xì)胞作為內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)。 ◆ 在不具備同個(gè)體，同源組織的情況下，可以使用雞紅細(xì)胞，或其他生物細(xì)胞為內(nèi)參標(biāo)準(zhǔn)，作為計(jì)算倍體的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞，但這種標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞的使用，僅限于新鮮組織倍體的判定，對(duì)于石蠟包埋組織倍體標(biāo)準(zhǔn)，解決的辦法是將正常組織與腫瘤組織同時(shí)包埋于一個(gè)石蠟組織塊中，這樣正常組織作為一個(gè)二倍體內(nèi)標(biāo)準(zhǔn) ,能減少 DNA倍體分析的誤差。 假性異倍體的識(shí)別與排除： 假性異倍體多出現(xiàn)在近二倍體腫瘤(Near diploid)或 DNA指數(shù)小于 異倍體腫瘤。 假性異倍體出現(xiàn)的原因主要有組織自溶造成或在組織固定前或期間，細(xì)胞DNA出現(xiàn)變性 (而非降解階段 )，染色質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生變性，與熒光染料結(jié)合增加或減少，更多出現(xiàn)在異倍體細(xì)胞數(shù)僅占總測(cè)細(xì)胞數(shù)的 510%的情況下 對(duì)于二倍體為主峰的右側(cè)出現(xiàn)的異倍體峰，用 %胃蛋白酶或 1%的 DNA酶消化 35分鐘，如果再測(cè)仍然出現(xiàn)異倍體峰可為真性異倍體，如果異倍體峰消失，則認(rèn)為是假性異倍體。 對(duì)于二倍體峰左側(cè)出現(xiàn)的異倍體峰(稱(chēng)亞二倍體 )要首先排除自溶的原因。 八、流式免疫學(xué)檢測(cè)的質(zhì)量控制 在免疫熒光染色過(guò)程中常出現(xiàn)一些人為非特異性熒光，造成本底熒光過(guò)高，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，常見(jiàn)的原因有： ①降低抗體非特異性結(jié)合的措施不夠。 ②洗滌不充分。 ③細(xì)胞重疊和凝集團(tuán)塊。 ④細(xì)胞碎片過(guò)多貼附在細(xì)胞上。 解決這些影響因素的方法： 1 使動(dòng)物血清蛋白等封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，熒光抗體染色后充分洗滌。 2 減少重疊細(xì)胞和碎片。 3設(shè)對(duì)照樣品，與抗體來(lái)源的同型對(duì)照和熒光抗體的本底對(duì)照 對(duì)于需要保存不能馬上進(jìn)行定量分析的標(biāo)本，在免疫熒光染色后，不固定可以在 4℃ 放置 48小時(shí)不出現(xiàn)熒光強(qiáng)度或標(biāo)記陽(yáng)性率降低。時(shí)間更長(zhǎng)時(shí)需要進(jìn)行固定保存，但固定方法要求方法步驟簡(jiǎn)單，固定液?jiǎn)我唬幻黠@影響細(xì)胞膜表面抗原的免疫熒光標(biāo)記，細(xì)胞體積和熒光強(qiáng)度等，可保存較長(zhǎng)時(shí)間 較理想的固定劑為 14%的多聚甲醒緩沖液或 4%的甲醒緩沖液 ()，實(shí)驗(yàn)證明，固定 12個(gè)月，仍可得到較好定量分析結(jié)果，對(duì)細(xì)胞膜內(nèi)的抗原物質(zhì)的免疫熒光檢測(cè)，可用 70%的冷乙醇(4℃ )固定可獲得滿意的檢測(cè)結(jié)果 謝謝觀看 /歡迎下載 BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAITH
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