20xx年醫(yī)學專題—第11章流式細胞技術和流式細胞儀-在線瀏覽
2024-11-19 05:16本頁面
【正文】 流式細胞儀首頁 → 第十一章 流式細胞技術和流式細胞儀一、熒光染料在流式細胞術中的應用（一）碘化丙啶染色碘化丙啶(propiolium iodide，PI)能嵌入DNA雙螺旋中，可使熒光強度增加約20倍，以488nm波長激發(fā)，DNA/PI復合物最大的發(fā)射波長約為615nm。1. 小鼠Lewis肺癌細胞DNA含量測定方法（1）從C57BL/6小鼠上切除腫塊，在培養(yǎng)皿內(nèi)用PBS沖洗。（3）38mm注射針,加壓使其通過,于4℃條件下重懸細胞于HBSS中。（5）測定580～750nm之間的發(fā)射熒光，以去除末結(jié)合PI產(chǎn)生的激發(fā)光與發(fā)射光譜線之間的重疊部分。（1）從培養(yǎng)皿中吸去培養(yǎng)基，以HBSS沖洗二次。（3）用吸管反復次打細胞，使細胞破壞，胞核釋放出來，再行流式細胞儀分析。（2）室溫條件下加入PI染色一批細胞（105～106細胞/mL），時間為30分鐘，然后行流式細胞儀分析。吖啶橙作為一種熒光染料已被用于染色固定，非固定細胞核酸，或作溶酶體的一種標記。雖然測定DNA和RNA含量時較難獲得好的重復性結(jié)果，但該方法已被許多實驗室廣泛采用。Triton X100(%) ，1mol/L HCL 8mL 1mol/L NaCL 15ml蒸餾水76mL，PH （100mL）2）溶液B：穩(wěn)定期數(shù)月，最好除菌以后(高壓或過濾)貯存。4）注意事項：儀器鞘流系統(tǒng)應保持4℃。2），室溫2分鐘。（3）注意事項：（1）細胞數(shù)保持恒定；（2）核酸與吖啶橙的比例；（3）染色時間及溫度。（2）方法1）2106細胞懸于1mL HBSS/RNase液中。3）(含4105細胞始終懸浮于HBSS/RNase) ()混勻，20℃ 30分鐘。5）綠色熒光(530nm)和紅色熒光(600nm)分別代表細胞中單鏈及雙鏈DNA含量。：（1）用培養(yǎng)基配制33 mg/L 。：（1）將Brdu溶液按1:10加入細胞培養(yǎng)液中。（3）孵育后，搖散細胞以傳代培養(yǎng)。Hoechst33258熒光值在410～580nm之間，需用330～360nm紫外光激發(fā)。因此，不僅特異性標記DNA，亦可標記胸腺嘧啶。（四）Hoechst33342染色Hoechst33342染色活細胞DNA：Hoechst 33342,。（2）分析前切勿洗滌細胞。（五）異硫氰酸熒光素染
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