第十七章流式細胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用-在線瀏覽
2024-12-20 12:02本頁面
【正文】 一、工作原理 二、散射光的測定 三、熒光測量 四、細胞分選原理 第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析 一、參數(shù) 二、數(shù)據(jù)顯示方式 三、設(shè)門分析技術(shù) 第三節(jié) 流式細胞儀免疫分析的技術(shù)要求 一、免疫檢測樣品制備 二、免疫分析中常用的熒光染料與標(biāo)記染色 三、免疫膠乳顆粒的應(yīng)用 四、流式細胞免疫學(xué)技術(shù)的質(zhì)量控制 第四節(jié) 流式細胞術(shù)在免疫學(xué)檢查中的應(yīng)用 一、淋巴細胞及其亞群的分析 二、淋巴細胞功能分析 三、淋巴造血系統(tǒng)分化抗原及白血病免疫分型 四、腫瘤耐藥相關(guān)蛋白分析 五、 AIDS病檢測中的應(yīng)用 六、自身免疫性疾病相關(guān) HLA抗原分析 七、移植免疫中的應(yīng)用 思考題 小結(jié) 流式細胞術(shù) (flow cytometry, FCM)是以流式細胞儀為檢測手段的一項能快速、精確的對單個細胞理化特性進行多參數(shù)定量分析和分選的新技術(shù)。 流式細胞術(shù)最大的特點是能在保持細胞及細胞器或微粒的結(jié)構(gòu)及功能不被破壞的狀態(tài)下，通過熒光探針的協(xié)助，從分子水平上獲取多種信號對細胞進行定量分析或純化分選。 第一節(jié) 概述 細胞組成 細胞功能 大小 細胞表面 /胞漿 /核 特異性抗原 粒度 細胞活性 DNA, RNA含量 胞內(nèi)細胞因子 蛋白質(zhì)含量 激素結(jié)合位點 鈣離子 , PH值 , 膜電位 酶活性 流式細胞儀常檢測的細胞特性 ?采用激光作為激發(fā)光源，保證其具有更好的單色性與激發(fā)效率； ?利用熒光染料與單克隆抗體技術(shù)結(jié)合的標(biāo)記技術(shù)，保證檢測的靈敏度和特異性； ?用計算機系統(tǒng)對流動的單細胞懸液中單個細胞的多個參數(shù)信號進行數(shù)據(jù)處理分析，保證了檢測速度與統(tǒng)計分析精確性。主要作用是包裹樣本流的周圍，保持樣本流中細胞處于噴嘴中心位置，防止其靠近孔壁而阻塞噴孔。 立體角方向散射的光線信號，它的強弱與細胞的大小、形狀、胞內(nèi)顆粒折射等有關(guān)，主要分為 前向散射光 和 側(cè)向散射光 。 ～ 10176。 FALS Sensor Laser 前向散射光示意圖 側(cè)向散射光（ side scatter, SS）： 激光束照射細胞時，光以 90176。 FALS Sensor 90LS Sensor Laser 側(cè)向散射光 示意圖 測得的 FS與 SS信號通過計算機處理，可得到 FSSS圖，由此可僅用散射光信號對未染色的活細胞進行分析或分選。 淋巴細胞 單核細胞 中性粒細胞 光散射測量最有效用途： 從非均一群體中鑒別出某些亞群 ? 熒光信號由被檢細胞上標(biāo)記的特異性熒光染料受激發(fā)后產(chǎn)生，發(fā)射的熒光波長與激發(fā)光波長不同。 ? 選擇不同的單抗及染料就可同時測定一個細胞上的多個不同特征。 四、細胞分選原理 細胞懸液形成液流柱 流動室振動 液流斷裂成液滴 空白液滴 含細胞的液滴 棄去 偏轉(zhuǎn)落入收集器 壓電晶體 產(chǎn)生 機械振動 不充電 充電 （一）分選基本原理 ? 分選速度： 單位時間內(nèi)分選的細胞數(shù)量。 ? 分選純度： 分選出的目的細胞占所有收獲細胞的百分率。與純度成反比。與分選速度成反比。 （一）單參數(shù)直方圖 單參數(shù)直方圖 細胞相對數(shù)量 信道(channel ) ? 雙參數(shù)直方圖：縱軸和
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