【正文】 目前移植免疫中的 FCM應用主要包括流式細胞術的交叉配型（ Flow cytometry crossmatching, FCXM）和群體反應性抗體（ Panel reactive antibody, PRA）檢測。 二維等高圖 3. 假三維等高圖 （三）三參數(shù)直方圖 多參數(shù)分析：當細胞標記了多色熒光，被激發(fā)光激發(fā)后，得到的熒光信號和散射光信號可根據(jù)需要進行組合分析。 ? 選擇不同的單抗及染料就可同時測定一個細胞上的多個不同特征。 流式細胞術最大的特點是能在保持細胞及細胞器或微粒的結(jié)構(gòu)及功能不被破壞的狀態(tài)下，通過熒光探針的協(xié)助，從分子水平上獲取多種信號對細胞進行定量分析或純化分選。 此為血細胞分類的基本原理，但不能分析表面分子。 ? 等高圖上每一條連續(xù)曲線上具有相同的細胞相對或絕對數(shù)，即 “ 等高 ” 。 （四）免疫檢測的質(zhì)控 流式細胞術目前已廣泛地被應用于免疫學基礎研究和逐步進入臨床應用各方面，用流式細胞儀對細胞表面的抗原成分進行標記分析，可區(qū)別多種細胞的特性，為細胞免疫的研究增加了有效的手段和幫助。 5. FCM分析中有哪些數(shù)據(jù)顯示方式，如何解讀結(jié)果及其設門分析的意義？ 6. 如何進行 FCM分析檢測樣品的制備？ 7. 流式細胞分析前如何驗證儀器工作狀態(tài)，采用何種校正物？ 8. 流式細胞免疫分析的質(zhì)量控制包括哪些方面？ 9. 流式細胞術有哪些臨床應用價值？ 10. 流式細胞儀分析中常見的熒光素有那些？他們的特性如何？ 小 結(jié) ?流式細胞術（ FCM）是在保持細胞及細胞器或微粒的結(jié)構(gòu)及功能不被破壞的狀態(tài)下，從分子水平上獲取多種信號實現(xiàn)對單個細胞進行定量分析或純化分選。 三、設門分析技術 A 淋巴細胞 B 單核細胞 C 中性粒細胞 A、 B、 C均為任意門 線性門 ? Region設置 : 區(qū)閾（ region, R）與門 (gate, G ) 是兩個相關的概念，區(qū)閾可與門對應，但是也可以包含于門。與懸液中細胞的含量成正比。 一、工作原理 （ 1） 液流系統(tǒng) （ 2） 光學系統(tǒng) （ 3） 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) ： ? 由樣本和鞘液組成 ? 待測細胞 單個細胞的懸液 熒光染料標記的單抗對其染色 受清潔氣體壓力 從樣品管進入流動室形成樣本流 ? 鞘液：輔助樣本流被正常檢測的基質(zhì)液。 FALS Sensor Laser 前向散射光示意圖 側(cè)向散射光（ side scatter, SS）： 激光束照射細胞時，光以 90176。 （一）單參數(shù)直方圖 單參數(shù)直方圖 細胞相對數(shù)量 信道(channel ) ? 雙參數(shù)直方圖：縱軸和橫軸分別代表被測量細胞的兩個測量參數(shù)，根據(jù)這兩個參數(shù)就可以確定細胞在圖上的表達位置。 ? 絕對計數(shù)校準 : 保證計數(shù)的準確性。 ?對各項工作環(huán)節(jié)和儀器性能進行嚴格的質(zhì)量控制和規(guī)范化操作，是保證 FCM分析中各項檢測數(shù)據(jù)和指標可靠性的關鍵。 能量傳遞復合染料 PE CY5 CY5 CY5 488nm 575nm 670nm 紅色熒光 花青苷 5 藻紅蛋白 能量傳遞復合染料機制 ?熒光染料與細胞成分的四種結(jié)