基因工程的操作-在線瀏覽
2025-02-08 17:55本頁面
【正文】 用的因子。 分類 : 基因組文庫 部分基因文庫 (如 cDNA文庫 ) 基因組文庫 : 將某種生物體內(nèi)的 DNA全部提取出來 ，選用適當(dāng)?shù)?限制酶 ，將 DNA切成 一定范圍大小的 DNA片段 ，然后，將這些 DNA片段 分別與載體連接起來 ，導(dǎo) 入受體菌的群體中儲(chǔ)存， 每個(gè)受體菌都含有了一段不同的DNA片段，也就是說，這個(gè)群體包含了這種生物的 所有基因 ，叫做這種生物的 基因組文庫 。 怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因 ? 根據(jù)基因的 核苷酸序列，基因的功能，基因在染色體上的位置，基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 mRNA，以及基因的表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特殊性 來獲得目的基因。 原理： 它是利用 DNA雙鏈復(fù)制的原理，將基因的核苷酸序列不斷地加以復(fù)制，使其數(shù)量呈 指數(shù)方式增長 (約 2n，其中 n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)） 。 過程： （ 1）加熱至 90℃ ~95℃ ，使雙鏈 DNA模板兩條鏈 之 間的氫鍵打開，變成單鏈 DNA，作為互補(bǔ)鏈聚 合反應(yīng)的模板。 （退火） （ 3）將溫度升至 70℃ ~75℃ ，在 耐高溫的 DNA聚合 酶催化 作用下，使 DNA鏈延伸。 基因表達(dá)載體組分 目的基因 啟動(dòng)子： 是一段有特殊結(jié)構(gòu)的 DNA片段，位于基因的首段，它是 RNA聚合酶 識(shí)別的結(jié)合部位 ，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄 mRNA。 標(biāo)記基因： 是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。表達(dá)載體在載 體基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動(dòng)子、終止子 三部分結(jié)構(gòu) . ② 用到的工具酶： 既用到限制酶切割載體，又 用到 DNA連接酶將目的基因和載體拼接，兩 種酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵 . ③ 啟動(dòng)子、終止子 對(duì)于目的基因表達(dá)必不可少 . ④ 目的基因不能單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞， 必需以表 達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。 原理： 當(dāng)植物受到損傷時(shí)，傷口處的細(xì)胞會(huì)分泌大量的 酚類化合物 ，吸引龍桿菌移向這些細(xì)胞，這時(shí)龍桿菌的 Ti質(zhì)粒 上的 TDNA（可轉(zhuǎn)移的 DNA)可轉(zhuǎn)移至 受體細(xì)胞， 并且整合到 受體細(xì)胞染色體的 DNA上 。 應(yīng)用： 單子葉植物 ，但成本較高 花粉管通道法 B、將目的基因?qū)?動(dòng)物細(xì)胞 方法： 顯微注射法 步驟： （ 1）首先將含有目的基因的表達(dá)載體 提純 。 （ 3）再將注射了目的基因的受精卵，經(jīng) 胚 胎早期培養(yǎng)一段時(shí)間后 ，再移植到雌 性動(dòng)物的輸卵管或子宮內(nèi)，使其發(fā)育 稱為具有 新現(xiàn)狀 的動(dòng)物。早期的基因工程操作都用 原核生物 作為受體細(xì)胞，其中以 大腸桿菌 應(yīng)用最為廣泛。 （ 2）將重組表達(dá)載體 DNA分子溶于緩沖液
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