基因工程的過程-在線瀏覽
2025-02-08 17:40本頁面
【正文】 本操作的四個(gè)步驟 一、目的基因的獲取 (一 )、目的基因主要是 ______________________ 編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 （二）、獲取目的基因的常用方法有哪些 ? 從基因文庫中獲取 利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增 人工合成法 如：與生物抗性相關(guān)的基因、與優(yōu)良品質(zhì)相關(guān)的基因、與生物藥物和保健品相關(guān)的基因、與毒物降解相關(guān)的基因、與工業(yè)用酶相關(guān)的基因、具調(diào)控作用的因子等。 直接合成法 （鳥槍法） 非編碼區(qū) 非編碼區(qū) 編碼區(qū) RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn) 外顯子 內(nèi)含子 終止子 基因的結(jié)構(gòu) 啟動(dòng)子 原核 真核 原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu) 非編碼區(qū) 非編碼區(qū) 編碼區(qū) 編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 與 RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn) 啟動(dòng)子 終止子 ①不編碼蛋白質(zhì)。 非編碼序列： 包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子 非編碼序列： 包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子 與 RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn) 原核細(xì)胞 真核細(xì)胞 不同點(diǎn) 編碼區(qū)是 _____ 的，邊 _________邊 _________ 編碼區(qū)是間隔的、 _____的，先 _____后 _____ 相同點(diǎn) 都由能夠編碼蛋白質(zhì)的 ______和具有調(diào)控作用的 ______區(qū)組成的 原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較 連續(xù) 不連續(xù) 編碼區(qū) 非編碼 轉(zhuǎn)錄 翻譯 轉(zhuǎn)錄 翻譯 下列關(guān)于基因結(jié)構(gòu)的認(rèn)識(shí)中，正確的是 （ ） A．大豆基因中內(nèi)含子是能夠編碼蛋白質(zhì)的序列 B．乳酸菌與酵母菌基因結(jié)構(gòu)中都存在外顯子和內(nèi)含子 C．大腸桿菌基因與 RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)位于編碼區(qū)的下游 D．水稻細(xì)胞基因的編碼區(qū)中存在非編碼序列 D 從基因文庫中獲取目的基因 （ 1） .基因文庫 將含有某種生物不同基因的許多 DNA片斷，導(dǎo)入到受體菌的群體中，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫。 部分基因文庫 ：只包含了一種生物的 部分 基因， 如： cDNA文庫 基因組文庫與部分基因文庫的關(guān)系 提取某種生物的 全部 DNA 用適當(dāng)?shù)南拗泼该盖? 一定大小的 DNA片段 將 DNA片段與載體連接 重組載體 基因組文庫 導(dǎo)入受體菌中儲(chǔ)存 基因文庫的構(gòu)建方法 ① 基因組文庫的構(gòu)建 提取某種生物的 某器官或 特定發(fā)育時(shí)期 的 mRNA 單鏈 DNA 雙鏈 cDNA片段 重組載體 與載體連接 cDNA文庫 反（逆）轉(zhuǎn)錄酶 DNA聚合酶 導(dǎo)入受體菌中儲(chǔ)存 ② cDNA文庫的構(gòu)建 逆轉(zhuǎn)錄法： mRNA RNA－ DNA雜合雙鏈 單鏈 DNA 雙鏈 DNA 逆轉(zhuǎn)錄 （ cDNA） DNA聚合酶 真核生物的基因用逆轉(zhuǎn)錄法得到的 cDNA與原基因相同嗎？有哪些差異？原核生物基因呢？ 思考？ 編碼區(qū) 非編碼區(qū) 非編碼區(qū) DNA聚合酶 剪接有關(guān)的酶 RNA聚合酶 mRNA前體 mRNA 單鏈 DNA cDNA 逆轉(zhuǎn)錄酶 轉(zhuǎn)錄 剪接 逆轉(zhuǎn)錄 復(fù)制 啟動(dòng)子 終止子 基因 不含 非編碼序列 。 依據(jù)：目的基因的有關(guān)信息。通過此技術(shù)，可在短時(shí)間內(nèi)獲取大量的目的基因。 c、延伸 （ 70℃ 75℃ ）：在Taq酶 的作用下，合成與模板互補(bǔ)的 ________。 （ 2）用 ___________切斷目 的基因，使其產(chǎn)生 _____ ____________。因?yàn)槟康幕蛟诒磉_(dá)載體中得到表達(dá)并發(fā)揮作用，還需要有其他控制元件，如 啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因 等。表達(dá)載體在載體基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動(dòng)子、終止子三部分結(jié)構(gòu) ② 用到的工具酶：限制酶、 DNA連接酶 ③ 啟動(dòng)子、終止子 對(duì)于目的基因表達(dá)必不可少 ④ 目的基因不能單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞， 必需以表達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。 轉(zhuǎn)化： 目的基因進(jìn)入 _________內(nèi)，并且在 受體細(xì)胞內(nèi)維持 _____和 _____的過程 受體細(xì)胞 穩(wěn)定 表達(dá) 三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 將目的基因?qū)?植物細(xì)胞 （ 1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 特點(diǎn) : 能感染 雙子葉植物 和 祼子植物 ,對(duì)大多數(shù)單子葉植物無感染能力 Ti質(zhì)粒 的 T— DNA可 轉(zhuǎn)移 至受體細(xì)胞并 整合 到其染色體上 轉(zhuǎn)化過程 : Ti質(zhì)粒 目的基因 構(gòu)建 表達(dá)載體 導(dǎo)入 植物細(xì)胞 整合 植物細(xì)胞染色體 DNA 表達(dá) 新性狀 轉(zhuǎn)入 農(nóng)桿菌 整合 到染
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