基因工程制藥-在線瀏覽
2025-02-06 13:33本頁面
【正文】 TCTAG GATCT A 2. DNA聚合酶 Ⅰ （全酶） DNA聚合酶 Ⅰ （ DNA pol Ⅰ ） 是一個具有 3 種酶活性的多功能性酶。 E. coli DNA pol. Ⅰ 催化缺口平移 * T * T * T * T Mg 2+ D N a s e I 539。 339。 339。 539。 339。 539。 339。 539。 339。 dATP,dCTP,dGTP [? 32 P] dTTP E. coli DNA POL I (TaqDNA polymerase) 作用特點 1） Taq DNA pol催化 DNA合成的最適溫度范圍 70 ? 75℃ ， 2） 95℃ 以上高溫，半小時不失活， 3） 最適合用于 聚合酶鏈反應（ PCR） 。 逆轉錄酶的應用： ⑴ 將 mRNA逆轉錄成 cDNA，構建 cDNA文庫 ； ⑵ 補平和標記 5ˊ 末端突出的 DNA片段； ⑶ 代替 Klenow酶用于 DNA序列分析； ⑷ 制備雜交探針等。外切酶Ⅲ變性+539。339。339。339。339。539。539。339。標記探針標記末端⑶ 用于 cDNA克隆中第二股鏈的合成 ； ⑷ DNA序列分析。 DNA連接酶的用途 （ 1） 兩個雙鏈 DNA片段連接起來 5ˊ ACG AATTCGT3ˊ T4DNA連接酶 5ˊ ACGAATTCGT3ˊ 3ˊ TGCTTAA GCA5ˊ 3ˊ TGCTTAAGCA5ˊ （ 2） 修補帶有缺口的雙鏈 DNA分子 T4DNA連接 酶 （ alkaline phosphatase） 能夠催化水解去除 DNA或 RNA5’ 端的磷酸基團。 ⒉ 用 32P標記 5’ 端前，去除 5’ P，再通過激酶作用把放射性核苷酸加到 539。 （脫氧核苷酸）轉移酶 (TdT) 作用 將標記或未標記的 dNTP加到 DNA的 3’ OH末端；也可催化載體分子或待克隆的 DNA片段上加上互補的同聚尾 ， 便于進一步連接 。 3180。 （三）、基因工程的載體 常用載體 (vector) 來源分類 ：質粒載體 噬菌體載體 病毒載體 人工染色體載體 用途分類 ：克隆載體 表達載體 穿梭載體 克隆載體 (cloning vector) 能使插入的外源 DNA序列被復制 、 擴增而不能表達 ， 這樣的載體為 克隆載體 。 這類載體中含有來源不同的復制子結構，既具備 原核細胞 復制所需的序列結構，又具有能使外源片段在 真核細胞 表達所需的結構元件和相應的選擇標記基因 ,故能在兩種受體細胞中復制并檢測，克隆的外源基因在此類載體直接從一種受體轉入另一種受體中進行復制和表達． 穿梭載體（ shuttle vector) ①具有能使外源 DNA片段組入的克隆位點。 ③必須具有選擇標記，承載外源 DNA的載體進入受體細胞后，以便篩選克隆子。 ⑤具有較高的遺傳穩(wěn)定性。 （ 2） 細胞因子 各種干擾素、白細胞介素、集落刺激生長因子、表皮生長因子、凝血因子、促紅細胞生成素。 （ 4）酶類 尿激酶、鏈激酶、葡聚糖酶、組織型纖維蛋白溶解酶原激活劑、超氧化物歧化酶、 a淀粉酶、凝乳酶、人溶菌酶、胰蛋白酶抑制劑。 （ 2）可以通過 大批量 的生產方法獲得足夠數量的生物活性物質。 （ 4）利用基因工程技術和蛋白質工程技術可以對藥物蛋白進行 修飾和改造 ，來提高藥效價值和獲得新型的化合物。它源于中國人基因，最適于黃種人使用。 七、基因工程制藥生產的化學工藝學要求 （ 1）工程菌大規(guī)模 發(fā)酵工藝 最佳參數的確立 （ 2）新型生物反應器的研制 （ 3）高效 分離介質 和裝置的開發(fā) （ 4）分離 純化技術 的優(yōu)化控制 （ 5）高純度產品的制備技術 （ 6）生物傳感器等儀器儀表的設計和制造 （ 7）電子計算機的智能優(yōu)化控制 八、基因工程的發(fā)展 （一）基因工程的歷史 （二）基因工程所生產的產品 （三）基因工程 的發(fā)展方向 （一）基因工程的歷史 ? 1973年 Cohen第一例成功的克隆實驗。 ? 1982年 第一個基因工程藥物重組人胰島素在英、美獲準使用。 ? 1999年 9月 中國獲準加入人類基因組計劃，負責測定人類基因組全部序列的 1% ? 2023年 6月 26日 科學家公布人類基因組工作草圖。 產品名稱 治療功能與醫(yī)藥范圍 1. 人胰島素 治療糖尿病 2. 人生長激素 治療侏儒癥 ， 加速創(chuàng)口愈合 3. α 干擾素 治療癌癥 、 病毒感染 4. β 干擾素 治療帶狀皰疹 ， 眼結 、 角膜炎 5. γ 干擾素 治療癌癥 、 病毒感染 6. 人組織纖溶酶原激活因子 (tPA) 溶解血栓 ， 治療急性心肌
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