基因工程制藥-在線(xiàn)瀏覽
2025-02-06 13:33本頁(yè)面
【正文】 TCTAG GATCT A 2. DNA聚合酶 Ⅰ （全酶） DNA聚合酶 Ⅰ （ DNA pol Ⅰ ） 是一個(gè)具有 3 種酶活性的多功能性酶。 E. coli DNA pol. Ⅰ 催化缺口平移 * T * T * T * T Mg 2+ D N a s e I 539。 339。 339。 539。 339。 539。 339。 539。 339。 dATP,dCTP,dGTP [? 32 P] dTTP E. coli DNA POL I (TaqDNA polymerase) 作用特點(diǎn) 1） Taq DNA pol催化 DNA合成的最適溫度范圍 70 ? 75℃ ， 2） 95℃ 以上高溫，半小時(shí)不失活， 3） 最適合用于 聚合酶鏈反應(yīng)（ PCR） 。 逆轉(zhuǎn)錄酶的應(yīng)用： ⑴ 將 mRNA逆轉(zhuǎn)錄成 cDNA，構(gòu)建 cDNA文庫(kù) ； ⑵ 補(bǔ)平和標(biāo)記 5ˊ 末端突出的 DNA片段； ⑶ 代替 Klenow酶用于 DNA序列分析； ⑷ 制備雜交探針等。外切酶Ⅲ變性+539。339。339。339。339。539。539。339。標(biāo)記探針標(biāo)記末端⑶ 用于 cDNA克隆中第二股鏈的合成 ； ⑷ DNA序列分析。 DNA連接酶的用途 （ 1） 兩個(gè)雙鏈 DNA片段連接起來(lái) 5ˊ ACG AATTCGT3ˊ T4DNA連接酶 5ˊ ACGAATTCGT3ˊ 3ˊ TGCTTAA GCA5ˊ 3ˊ TGCTTAAGCA5ˊ （ 2） 修補(bǔ)帶有缺口的雙鏈 DNA分子 T4DNA連接 酶 （ alkaline phosphatase） 能夠催化水解去除 DNA或 RNA5’ 端的磷酸基團(tuán)。 ⒉ 用 32P標(biāo)記 5’ 端前，去除 5’ P，再通過(guò)激酶作用把放射性核苷酸加到 539。 （脫氧核苷酸）轉(zhuǎn)移酶 (TdT) 作用 將標(biāo)記或未標(biāo)記的 dNTP加到 DNA的 3’ OH末端；也可催化載體分子或待克隆的 DNA片段上加上互補(bǔ)的同聚尾 ， 便于進(jìn)一步連接 。 3180。 （三）、基因工程的載體 常用載體 (vector) 來(lái)源分類(lèi) ：質(zhì)粒載體 噬菌體載體 病毒載體 人工染色體載體 用途分類(lèi) ：克隆載體 表達(dá)載體 穿梭載體 克隆載體 (cloning vector) 能使插入的外源 DNA序列被復(fù)制 、 擴(kuò)增而不能表達(dá) ， 這樣的載體為 克隆載體 。 這類(lèi)載體中含有來(lái)源不同的復(fù)制子結(jié)構(gòu)，既具備 原核細(xì)胞 復(fù)制所需的序列結(jié)構(gòu)，又具有能使外源片段在 真核細(xì)胞 表達(dá)所需的結(jié)構(gòu)元件和相應(yīng)的選擇標(biāo)記基因 ,故能在兩種受體細(xì)胞中復(fù)制并檢測(cè)，克隆的外源基因在此類(lèi)載體直接從一種受體轉(zhuǎn)入另一種受體中進(jìn)行復(fù)制和表達(dá)． 穿梭載體（ shuttle vector) ①具有能使外源 DNA片段組入的克隆位點(diǎn)。 ③必須具有選擇標(biāo)記，承載外源 DNA的載體進(jìn)入受體細(xì)胞后，以便篩選克隆子。 ⑤具有較高的遺傳穩(wěn)定性。 （ 2） 細(xì)胞因子 各種干擾素、白細(xì)胞介素、集落刺激生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、凝血因子、促紅細(xì)胞生成素。 （ 4）酶類(lèi) 尿激酶、鏈激酶、葡聚糖酶、組織型纖維蛋白溶解酶原激活劑、超氧化物歧化酶、 a淀粉酶、凝乳酶、人溶菌酶、胰蛋白酶抑制劑。 （ 2）可以通過(guò) 大批量 的生產(chǎn)方法獲得足夠數(shù)量的生物活性物質(zhì)。 （ 4）利用基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)可以對(duì)藥物蛋白進(jìn)行 修飾和改造 ，來(lái)提高藥效價(jià)值和獲得新型的化合物。它源于中國(guó)人基因，最適于黃種人使用。 七、基因工程制藥生產(chǎn)的化學(xué)工藝學(xué)要求 （ 1）工程菌大規(guī)模 發(fā)酵工藝 最佳參數(shù)的確立 （ 2）新型生物反應(yīng)器的研制 （ 3）高效 分離介質(zhì) 和裝置的開(kāi)發(fā) （ 4）分離 純化技術(shù) 的優(yōu)化控制 （ 5）高純度產(chǎn)品的制備技術(shù) （ 6）生物傳感器等儀器儀表的設(shè)計(jì)和制造 （ 7）電子計(jì)算機(jī)的智能優(yōu)化控制 八、基因工程的發(fā)展 （一）基因工程的歷史 （二）基因工程所生產(chǎn)的產(chǎn)品 （三）基因工程 的發(fā)展方向 （一）基因工程的歷史 ? 1973年 Cohen第一例成功的克隆實(shí)驗(yàn)。 ? 1982年 第一個(gè)基因工程藥物重組人胰島素在英、美獲準(zhǔn)使用。 ? 1999年 9月 中國(guó)獲準(zhǔn)加入人類(lèi)基因組計(jì)劃，負(fù)責(zé)測(cè)定人類(lèi)基因組全部序列的 1% ? 2023年 6月 26日 科學(xué)家公布人類(lèi)基因組工作草圖。 產(chǎn)品名稱(chēng) 治療功能與醫(yī)藥范圍 1. 人胰島素 治療糖尿病 2. 人生長(zhǎng)激素 治療侏儒癥 ， 加速創(chuàng)口愈合 3. α 干擾素 治療癌癥 、 病毒感染 4. β 干擾素 治療帶狀皰疹 ， 眼結(jié) 、 角膜炎 5. γ 干擾素 治療癌癥 、 病毒感染 6. 人組織纖溶酶原激活因子 (tPA) 溶解血栓 ， 治療急性心肌
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