基因工程的操作(已修改)
2025-01-15 17:55 本頁面
【正文】 第二節(jié) 基因工程的基本 操作程序 生長(zhǎng)快、肉質(zhì)好的轉(zhuǎn)基因魚 (中國(guó) ) 基因工程（ DNA重組技術(shù)）是指 按照人們的愿望 ，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)，并通過體外 DNA重組 和轉(zhuǎn)基因 等技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性從而創(chuàng)造出 更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品 。 目的基因的獲取 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 目的基因的檢測(cè)與鑒定 概念： 一、目的基因的獲取 目的基因 ： 主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因， 例如，與優(yōu)良品質(zhì)相關(guān)的基因，與生物藥物和保健品相關(guān)的基因，以及與工業(yè)所需酶相關(guān)的基因，也可以是一些具有調(diào)控作用的因子。 獲取目的基因的方法 ： 人工合成 從基因文庫(kù)中獲得目的基因 PCR技術(shù)擴(kuò)增 從 基因文庫(kù) 中獲得目的基因 概念 : 將含有某種生物不同基因的許多 DNA片段，導(dǎo)入受體菌 的群體中儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同的基因，稱為 基因庫(kù) 。 分類 : 基因組文庫(kù) 部分基因文庫(kù) (如 cDNA文庫(kù) ) 基因組文庫(kù) : 將某種生物體內(nèi)的 DNA全部提取出來 ，選用適當(dāng)?shù)?限制酶 ，將 DNA切成 一定范圍大小的 DNA片段 ，然后，將這些 DNA片段 分別與載體連接起來 ，導(dǎo) 入受體菌的群體中儲(chǔ)存， 每個(gè)受體菌都含有了一段不同的DNA片段，也就是說，這個(gè)群體包含了這種生物的 所有基因 ，叫做這種生物的 基因組文庫(kù) 。 cDNA文庫(kù) 如果用某種生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的 mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補(bǔ) DNA（也叫 cDNA)片段 ，與載體連接后儲(chǔ)存在 一個(gè)受體菌群中 ，那么，這個(gè)受體菌群就叫做這種生物的 cDNA文庫(kù) 。 怎樣從基因文庫(kù)中得到我們所需的目的基因 ? 根據(jù)基因的 核苷酸序列，基因的功能，基因在染色體上的位置，基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 mRNA，以及基因的表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特殊性 來獲得目的基因。 利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增 目的基因 定義： PCR是 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 的縮寫，是一項(xiàng)在 生物體外 復(fù)制特定 DNA片段的核酸合成技術(shù)，通過這一技術(shù)，可以在短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增目的基因。 原理： 它是利用 DNA雙鏈復(fù)制的原理，將基因的核苷酸序列不斷地加以復(fù)制，使其數(shù)量呈 指數(shù)方式增長(zhǎng) (約 2n，其中 n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)） 。 基本前提： 要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成 引物 。 過程： （ 1）加熱至 90℃ ~95℃ ，使雙鏈 DNA模板兩條鏈 之 間的氫鍵打開，變成單鏈 DNA，作為互補(bǔ)鏈聚 合反應(yīng)的模板。 (DNA變性） （ 2）將溫度降至 5
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